幽门螺杆菌CagA对AGS细胞RNA转录相关磷酸化蛋白的影响

目的研究幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，H.pylori）细胞毒素相关蛋白A（CagA）作用后人胃腺癌上皮细胞（AGS）RNA转录相关蛋白磷酸化的变化情况，进一步揭示CagA的致病机制，为寻找生物标记蛋白奠定基础。方法采用金属离子亲和吸附富集技术富集H.pylori、H.pylori CagA缺失株（H.pylori△CagA）与AGS细胞相互作用4h、以及培养相同时间的AGS细胞的磷酸化蛋白，利用二维凝胶电泳技术分离磷酸化蛋门，ImageMaster 2D分析软件比较分析识别差异蛋白，4700型MALDI源蛋白分析器确认蛋白。结果CagA致使AGS细胞的7个RNA相关的磷酸化蛋白出现差异表达，其中1个磷酸化蛋白表达量上调、4个磷酸化蛋白表达量下调、2个新出现磷酸化的蛋白。hnRNP D0 127位的苏氨酸及137位的丝氨酸发生了磷酸化。结论CagA作用后，致使hnRNP D0蛋白磷酸化。AGS细胞与RNA转录相天蛋白磷酸化的变化，呈现出诱导细胞凋亡、增殖及有利于细胞免疫逃逸的趋势。     

枸杞对小鼠骨髓细胞增殖和白细胞介素-1的影响

目的：观察枸杞对小鼠造血功能和ＩＬ－１产生的影响。方法：用１００％枸杞浸出液给小白鼠连续灌胃１０ｄ,１次／ｄ,检测小鼠骨髓细胞增殖反应、ＩＬ－１产生。结果：枸杞组对骨髓细胞增殖反应明显增强,与对照组相比有非常显著性差异（Ｐ〈０．０１）,而枸杞组ＩＬ－１与对照组相比无显著性差异（Ｐ〉０．０５）。结论：枸杞可促进小鼠骨髓细胞增殖反应,而对ＩＬ－１无明显作用。     

食品与环境中豚鼠气单胞菌系统发育分析以及毒力和耐药性研究

目的食品与环境中49株豚鼠气单胞菌菌种鉴定、毒力与耐药性检测。方法VITEK、API 20NE生化鉴定,gyrB、rpoD系统发育分析;PCR检测act、alt、ast、lip、ahp、aerA、hlyA、ompA1、fla基因;AST-GN16药敏试验。结果生化鉴定为豚鼠/嗜水气单胞菌株54株,经系统发育分析豚鼠气单胞菌49株,嗜水气单胞菌4株,中国台湾省气单胞菌1株。毒力基因alt、lip、ompA1、fla、act、aerA、hlyA检出率依次为100.00%、100.00%、79.59%、14.29%、2.04%、2.04%、2.04%,未检出ast、ahp;存在4种毒力基因组合,优势组合为alt/lip/ompA1(32/49)。豚鼠气单胞菌氨苄西林、头孢唑林、头孢西丁、阿莫西林/克拉维酸、头孢曲松、复方新诺明、安曲南耐药率依次为79.59%、14.29%、10.20%、6.12%、4.08%、4.08%、2.04%,哌拉西林/他唑巴坦、亚胺培南、阿米卡星、庆大霉素、左氧氟沙星、替加环素、呋喃妥英均敏感;2株多重耐药菌株。结论gyrB、rpoD可有效鉴定豚鼠/嗜水气单胞菌,rpoD可区分近亲缘关系豚鼠与中国台湾省气单胞菌;所有豚鼠气单胞菌均携带2种以上毒力基因,1株环境源菌携带7种毒力基因;青霉素类普遍耐药,产生β-内酰胺酶是最主要耐药机制;未发现碳青霉烯类、氨基糖苷类、氟喹诺酮类、四环素类、呋喃类耐药菌株;食品和生活饮用水存在多重耐药菌。     

缺血时间对脑缺血再灌注损伤及脑组织AChE表达的影响

目的：研究不同的缺血时间再灌注0.5h对脑缺血组织的损伤程度及乙酰胆碱酯酶（AChE)的影响。方法：建立大鼠局灶性脑缺血动物模型,制备并纯化抗神经系统AChE的单克隆抗体2E6,观察缺血再灌注脑组织的病理变化及AChE含量。结果：不同缺血时间再灌注,脑组织的损伤程度不同,AChE的变化亦不同。结论：单克隆抗体2E6可以用于神经系统AChE含量的检测,AChE可能与缺血再灌注损伤有关。     

不同CA16流行株的相关生物学和VP1基因的分子生物学研究

目的 对柯萨奇病毒A组16型(CA16)病毒株进行生物学特征与基因背景研究,为CA16病原和疫苗的进一步研究奠定基础.方法 从咽拭子标本中分离出CA16病毒;通过中和鉴别试验和RT-PCR对病毒进行分子生物学鉴定;病毒的VP1基因序列测定后,与其他CA16序列进行比较,绘制种系发育树,确定病毒基因型;测定病毒滴度,观察病毒在Vero细胞上的噬斑形态;攻击乳鼠分析病毒的致病性.结果 从手足口病患者咽拭子标本中分离到6株病毒,采用肠道病毒通用引物可以从病毒感染细胞中扩增出约150 bp大小的目的产物带;采用CA16特异性引物可以从病毒感染细胞中扩增出210 bp大小的目的产物带.而采用EV71特异性引物未见特异性扩增条带.噬斑分析发现,6株病毒在Vero细胞上接种96 h后均能出现清晰的噬斑,其中BJ-3噬斑直径为4～5 mm,B J-5噬斑直径约为3 mm,B J-1、B J-2、BJ-4、BJ-6噬斑直径为1.5 ～2 mm;除BJ-3噬斑边缘模糊外,其余5株噬斑边缘整齐.该6株病毒均可被人CA16抗体阳性血清中和.在Vero细胞上连续传5代,滴度均在7.0LgCCID50/nl左右.基于VPI基因序列的种系发育分析结果显示,BJ-2、B J-4、B J-5属于C1亚型,BJ-1、BJ-3、BJ-6属于C3亚型,该6株病毒核苷酸同源性达90％以上,氨基酸同源性达99％以上.乳鼠攻击试验结果显示,BJ-3和BJ-5攻击后第4～5天乳鼠开始发病,后肢出现明显的麻痹、瘫痪症状,至第6～7天全部死亡,正常对照组和其他病毒组直至攻击后第14天均无异常.结论 不同CA16病毒株的生物学特性有所不同,基因背景相近,致病性明显不同,需进一步了解中国流行的 CA16病毒株的致病特点,为疫苗的研发提供直接依据.     

人胃上皮细胞中幽门螺杆菌CagA相关未知磷酸化蛋白和磷酸化位点分析

背景：细胞毒素相关基因A蛋白（CagA）是Ⅰ型幽门螺杆菌（H.pylori）的主要毒力因子。H.pylori胃癌、胃炎相关株和CagA缺失（△CagA）株的蛋白质组学研究尚未发现CagA相关生物标记蛋白。目的：分析H.pyloriCagA阳性株和△CagA株作用后人胃上皮细胞中差异表达的未知磷酸化蛋白和磷酸化位点,为研究CagA的致病机制提供线索。方法：以金属离子亲和吸附富集技术富集经H.pylori标准株和△CagA株作用4h的人胃腺癌细胞株AGS的磷酸化蛋白,双向电泳（2-DE）分离蛋白,飞行时间质谱（TOF-MS）技术鉴定差异蛋白点。结果：H.pylori标准株作用后,AGS细胞FAM50A蛋白276位丝氨酸发生磷酸化,PQBP1蛋白227～251序列中有磷酸化位点。与H.pylori标准株相比,△CagA株作用于AGS细胞可引起至少13种未知磷酸化蛋白的变化,其质谱图中均出现中性丢失峰,其中2种表达量增加,4种表达量降低,6种消失,1种新发生磷酸化。结论：CagA阳性H.pylori感染可致AGS细胞FAM50A和PQBP1蛋白发生磷酸化。所发现的13种未知磷酸化蛋白为揭示CagA的致病机制提供了线索。     

北京市朝阳区2011年儿童A组溶血性链球菌超抗原基因的分子流行病学研究北大核心CSCD

目的描述2011年北京市朝阳区儿童A组溶血性链球菌（GAS）的超抗原分子流行病学特征,分析超抗原基因与emm型别和GAS相关疾病的关系。方法从猩红热、咽炎及扁桃体炎患儿的咽拭子分离培养获得71株GAS,应用PCR法检测这些GAS是否携带8类超抗原基因（speA、spel、$sa、speC、speJ、speG、spell和SMEZ）;PCR扩增emm基因片段并测序,进行emm型别鉴定;分析超抗原基因、emm型别和GAS所致疾病之间的相互关系,应用,检验进行显著性分析。结果71株GAS的超抗原基因检出率从高到低分别为speC（100．0％）、SMEZ（100．0％）、s50（97．2％）、speG（95．8％）、speH（80．3％）、spel（80．3％）、speA（15．5％）和speJ（12．7％）;71株GAS中检出emml2．0型菌株62株、emml．0型7株、emm22．0型1株、emm75．0型1株;spel和渺H基因与speA和speJ基因在emml2．0型与emml．0型菌株中的分布差异有统计学意义（P均〈0．05）;spel和spetf基因在猩红热患儿和咽炎扁桃体炎患儿中的分布差异有统计学意义（P均〈0．05）;未发现emm型别在不同的疾病中的分布有差异。结论北京市朝阳区儿童携带的GAS超抗原基因的检出率与地域有一定关系;不同emm型别的GAS对超抗原基因的携带有一定的选择性,尤其是针对噬菌体携带的超抗原基因;较emm型别,超抗原基因能更好地建立菌株与疾病之间的关系。     

北京市朝阳区2011年儿童A组溶血性链球菌超抗原基因的分子流行病学研究

目的 描述2011年北京市朝阳区儿童A组溶血性链球菌(GAS)的超抗原分子流行病学特征,分析超抗原基因与emm型别和GAS相关疾病的关系.方法 从猩红热、咽炎及扁桃体炎患儿的咽拭子分离培养获得71株GAS,应用PCR法检测这些GAS是否携带8类超抗原基因(speA、spel、ssa、speC、speJ、speG、spell和SMEZ)；PCR扩增emm基因片段并测序,进行emm型别鉴定；分析超抗原基因、emm型别和GAS所致疾病之间的相互关系,应用,检验进行显著性分析.结果 71株GAS的超抗原基因检出率从高到低分别为speC(100.0％)、SMEZ(100.0％)、ssa(97.2％)、speG(95.8％)、speH(80.3％)、speI(80.3％)、speA(15.5％)和speJ(12.7％)；71株GAS中检出emm12.0型菌株62株、emm1.0型7株、emm22.0型1株、emm75.0型1株；spel和spell基因与speA和speJ基因在emm12.0型与emm1.0型菌株中的分布差异有统计学意义(P均＜0.05)；spel和spell基因在猩红热患儿和咽炎扁桃体炎患儿中的分布差异有统计学意义(P均＜0.05)；未发现emm型别在不同的疾病中的分布有差异.结论 北京市朝阳区儿童携带的GAS超抗原基因的检出率与地域有一定关系；不同emm型别的GAS对超抗原基因的携带有一定的选择性,尤其是针对噬菌体携带的超抗原基因；较emm型别,超抗原基因能更好地建立菌株与疾病之间的关系.     

CagA对AGS细胞Ca2+相关蛋白磷酸化的影响

目的:分析幽门螺杆菌(H pllori)细胞毒素相关蛋白A(CagA)对人胃腺癌黏膜上皮细胞(AGS)Ca2 相关蛋白磷酸化的影响,进一步揭来H pylori的致病机制.方法:采用金属离子亲和吸附富集技术富集H pylori、H pylori CagA缺失株(H pylori △CagA)与AGs细胞相互作用4 h,以及培养相同时间的AGS细胞的磷酸化蛋白.利用二维凝胶电泳技术分离磷酸化蛋白,ImageMaster 2D分析软件识别差异蛋白,MALDI-TOF/OF质谱鉴定确认蛋白.结果:Hpylozi △ CagA作用的AGS细胞.与培养相同时间的AGS细胞比较表达量不变,而Hpylori △CagA作用的AGS细胞表达量发生了明显变化,表明此蛋白的变化是单纯由CagA引起的;此类蛋白点共鉴定出19个,其中3个蛋白点与Ca2 相关.钙离子结合蛋白(nucleobindin-2 precursor,CALNUC)在AGS细胞以及H pylori △CagA与AGS相互作用的2-D胶中表达量接近,而H pylori与AGS相互作用后该蛋白表达量明显降低.结论:H pylori △CagA进AAGS细胞可能会影响内质网、线粒体及高尔基体的钙稳态,诱发内质网、线粒体、高尔基体凋亡或增殖途径.而成为胃炎、胃溃疡、胃癌发生的诱因之一.     

丙型肝炎病毒MHC-Ⅱ类抗原表位预测

目的预测各型丙型肝炎病毒(HCV)的MHC-Ⅱ类抗原表位,为HCV的疫苗研发提供理论依据。方法从NCBI数据库中检索出10条包含6种基因型的HCV完整氨基酸序列,使用在线MHC-Ⅱ类抗原表位分析工具NetMHCⅡpan-2.1 Server,从MHC-Ⅱ类抗原表位在6种HCV型别之间的保守性及与MHC-Ⅱ类分子亲和力两方面评价HCV携带的潜在MHC-Ⅱ类抗原表位。结果位于NS3和NS5B蛋白的3段表位核心序列具有较好的保守性,其中尤以NS3蛋白携带的表位核心序列保守性最好;高亲和力的MHC-Ⅱ类抗原表位主要位于E2、NS5A、NS4A和NS5B蛋白,其中E2和NS5A蛋白携带的高亲和力抗原表位较为丰富。结论 NS5B蛋白所携带的MHC-Ⅱ类抗原表位兼顾了各个HCV基因型之间的保守性及与MHC-Ⅱ类分子的高亲和力,具有较好的疫苗应用前景;NS3、E2、NS5A和NS4A蛋白有可能成为HCV多表位肽疫苗的备选组分。