基因表达连续分析技术及应用研究的进展

随着功能基因组学研究的兴起 ,基因表达连续分析技术 (SAGE)已成为高通量研究基因表达谱的新手段。 SAGE技术不仅可以用来研究大部分基因组序列尚未鉴定的生物个体的基因表达谱 ,其实验结果还可以直接与发表在 SAGEmap表达数据库中不同来源的已知文库相比较 ,应用日益受到重视。     

丙型肝炎病毒非结构区 3(NS3)Ⅰ、Ⅱ型血清反应性的比较研究

目的研究丙型肝炎病毒(HCV)非结构区3(NS3)Ⅰ型、Ⅱ型血清反应性.方法利用表达载体PBVIL1对HCV全长NS3区Ⅰ型、Ⅱ型抗原表位进行克隆表达,经纯化获得电泳纯的抗原.经酶联免疫吸附(ELISA)的方法检测丙型肝炎179份总抗体可疑阳性血清,再用NS3区Ⅰ、Ⅱ型抗原进行相应抗体检测.结果通过测定HCV-NS3区Ⅰ型、Ⅱ型抗体,179份HCV-NS3区1型阳性检出105份,HCV-NS3区Ⅱ型阳性检出95例.结论重组表达的HCV-NS3 Ⅰ型、Ⅱ型抗原对丙型肝炎病毒血清反应略有不同.二者具有一定的互补性.     

移植物抗宿主病研究的进展

本文就对移植抗宿主病（ＧＶＨＤ）的研究历史进行了简要的回顾，并综述了ＧＶＨＤ研究中的主要问题，Ｔ细胞亚群的功能，细胞因子网络，移植物抗白血病效应与ＧＶＨＤ关系等方面研究的进展。对ＧＶＨＤ研究中所应用的实验系统地进行了述评。     

阻断CD40／CD40L相互作用的治疗潜力及应用前景

T细胞是免疫系统发挥功能的重要组成部分，其激活不仅需要外来抗原原直接刺激，而且还需要细胞间通过表面分子相互作用传递的共刺激信号，CD40／CD40L途径是除B7／CD28途径之外又一重要的共刺激途径，不只在正常生理状态下参与和维持许多重复要的生理功能，多种病理过程往往由这一途径的失调或紊乱而发生，本文重点论述了CD40／CD40L途径的重要地位以及干预该途径的潜在应用前景。     

治疗性丙型肝炎疫苗研究的新进展

丙型肝炎是由丙型肝炎病毒（HCV）感染引起的一种重要的世界性传染病，约70％－85％的感染者发展为慢性肝炎，并可发展成肝硬化和肝癌等终末期肝病。目前尚没有预防HCV感染的疫苗。HCV感染后在体内持续存在和被清除的机制仍不明确。最近的研究提示，强烈的多特异性细胞免疫，特别是CTL反应在病毒的清除中扮演了重要角色。开始治疗性疫苗用于治疗慢性HCV感染是完全可行的，一个有效的HCV疫苗可能需要同时诱导高滴度的、长期存在的高交叉反应中和性抗体以及包含助T细胞和CTL细胞在内的广泛的、强烈的和多特异性的细胞免疫反应。另外，HCV疫苗只要能够防止HCV感染慢性化或治疗HCV引起的慢性丙型肝炎就可满足需要，并不一定要具有诱导清除免疫的能力。本文概述了当前世界HCV疫苗研究的进展，特别是治疗性HCV疫苗的研究现状，并分析了疫苗研制中存在的问题和疫苗研制的策略。     

丙型肝炎病毒优势表位抗原不同嵌合表达蛋白的血清反应性研究

目的采用含HCV不同优势表位抗原进行连接表达,对20份血清进行对比检测,探讨血清反应性.方法构建原核融合表达载体pBVIL-1,精选出HCV主要表位抗原插入表达载体在E.coli中表达,纯化后的融合抗原包被酶联板,用ELISA方法进行测定.结果不同抗原组合连接(HCV NS4-Core、NS4-Core-NS3、NS4-Core-NS5AB-NS3)对血清的反应性不同.结论含有多个抗原表位的嵌合抗原,能提高检测的灵敏度.     

双顺反子真核表达载体pVAX1-IRES的构建与鉴定

目的:为适应恶性肿瘤免疫治疗中多基因联合应用的需要,在真核表达载体pVAX1的基础上,利用内部核糖体进入位点IRES序列,构建双顺反子真核表达载体pVAX1-IRES,以增强DNA疫苗的免疫疗效.方法:通过PCR扩增获得目的基因IRES并定向克隆到pVAX1载体中,然后在IRES序列的上下游分别插入红色荧光蛋白基因DsRed1和增强型绿色荧光蛋白基因EGFP,瞬时转染人胚胎肾细胞293T,通过流式细胞术和免疫荧光验证基因表达.结果:pVAX1-IRES经相应酶切和测序鉴定,与预期设计一致,DsRed1基因和EGFP基因在pVAX1-IRES载体中,不仅可以分别表达,而且可以同时表达,显示该双顺反子真核表达载体构建成功.结论:pVAX1-IRES双顺反子表达载体的构建,为基因联合表达和恶性肿瘤的免疫治疗作了必要准备.     

小鼠移植物抗宿主病模型的建立及其初步应用

建立小鼠GVHD模型 ,用以评价人CD4 0 Ig融合蛋白治疗的有效性。以雄性C5 7BL/ 6小鼠作为脾细胞供者 ,照射后的雌性BALB/c小鼠作为受者 ,分别将 2 5×10 7和 5 0× 10 7/L脾细胞在60 Co射线亚致死剂量照射后经尾静脉注入 30只受者小鼠体内 ,建立小鼠GVHD模型。然后 ,在GVHD诱导后第 0、2、4天分 3次经尾静脉注射CD4 0 Ig融合蛋白各 5 0、15 0、4 5 0 μg,观察CD4 0 Ig融合蛋白对GVHD小鼠的治疗效果。结果显示 :3注射脾细胞 4～5天后 ,小鼠开始出现GVHD典型体征 ,第 10天受体小鼠体内扩增出雄性供体小鼠Y染色体特异片段。CD4 0 Ig融合蛋白治疗可显著延长GVHD小鼠的平均存活时间。此结果表明 ,已成功地建立了小鼠GVHD模型 ,可用于评价抗GVHD的治疗效果。     

基于E2糖蛋白的丙型肝炎疫苗的研究进展与展望

丙型肝炎是由丙型肝炎病毒感染所引起的一种严重的传染病 ,目前全世界约有 1.7亿感染者 ,我国的感染率为 3%～ 5 %。HCV感染后在体内持续存在和被清除的机制仍不明确。由于缺乏有效HCV体外增殖系统及中和抗体活性的检测技术 ,使预防性疫苗研究十分困难。但最近的研究发现 ,HCV膜糖蛋白E2可能具有中和性抗原表位 ,特别是它的高变区 1(HVR1)更是较为明确的中和表位 ,而且该表位具有一定的交叉反应性 ,因此为疫苗的研究提供了新的希望。本文概述了当前基于HCVE2糖蛋白的预防性HCV疫苗和相关动物模型的研究现状与进展 ,并分析了疫苗研制中存在的问题和疫苗研制的策略。     

重组人神经生长因子的高效表达和生物活性评价研究

目的利用中国仓鼠卵巢（Chinese Hamster0vary,CH0）细胞真核表达系统,获得高产的人神经生长因子（recombinant human Nerve Growth Factor,rhNGF）表达细胞株并对其分泌的rhNGF生物学活性进行评价。方法设计、合成并构建了携带rhNGF目的基因的GS—DHFR双基因筛选表达载体pDG2．0／NGF。经脂质体转染法将其导入二氢叶酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢细胞（CHODG44）中,经氨甲喋呤（MTX）和蛋氨酸亚氨基代砜（MSX）两种药物加压筛选和克隆化获得目的细胞株。经过阳离子交换和分子筛纯化,获得rhNGF制品。最后,利用小鼠神经生长因子生物学活性参比品评估纯化制品的生物学活性。结果通过基因合成、载体构建、细胞转染、加压筛选和克隆化等步骤,我们得到了高表达rhNGF的CHO—DG44单克隆细胞株。经过2步法纯化获得了纯度大于98％的精制rhNGF制品。生物学活性分析表明,与市售小鼠NGF产品相比较,我们所表达的rhNGF具有更好的生物学活性。结论成功实现了rhNGF的高水平和高活性表达,为大规模工业化生产重组人神经生长因子奠定了坚实基础。