MDT在联合肝脏离断和门静脉结扎的二步肝切除术中的运用

目的探讨多学科协作团队(multi-disciplinary team,MDT)模式在无法一期手术切除的原发性巨块型肝癌患者行联合肝脏离断和门静脉结扎的二步肝切除术(ALPPS)中的应用价值。方法患者术前行腹部CT检查提示一约90.9 mm×75.5 mm×77.5 mm大的肝右叶巨大占位,考虑为原发性肝癌,经放射影像科、肝病感染科、肿瘤科、麻醉科及肝胆外科团队协作讨论后决定拟采取ALPPS法治疗,第一步在全身麻醉下行剖腹探查+门静脉右支结扎联合左右半肝离断+射频消融+胆囊切除术;第一步手术后第45天在全身麻醉下行腹腔粘连松解+肝右叶切除术。结果在两步手术间期患者出现肝功能衰竭、肝性脑病、左肝增生欠佳等情况,MDT通力协作、群策群力,共同应对,患者顺利完成了ALPPS手术,做到了肝癌的R0切除,术后经多次MDT协助治疗相关并发症,患者恢复良好,术后2个月随访复查未见明显肿瘤复发与转移。结论在无法一期手术切除的原发性巨块型肝癌患者行ALPPS的治疗过程中,MDT模式将更加有利于临床集思广益,给予患者最佳治疗,收益较佳。     

七年制临床医学研究性教学中导师的素质和职能

七年制教育属于精英教育的范畴,早期实施研究性教学方法在缩短培养时间的同时提高了教育质量。导师应在研究性教学各阶段对学生进行全面指导,为培养学生的开发性研究能力打下基础。导师应具备良好的自身素质,在思想品德、治学态度、为人处事等方面成为学生的楷模。     

偶联 CD206 抗体载 Fe3O4的 PLGA 纳米微球促进巨噬细胞 M1型极化

目的 通过构建纳米微球靶向性地提高巨噬细胞中的铁浓度来增强抗肿瘤免疫。方法 采用W/O/W复乳化溶剂扩散法制备CD206单克隆抗体表面修饰的载Fe3O4聚乳酸羟基乙酸（PLGA）纳米微球。使用马尔文粒径检测仪测定微粒直径,Zeta电位 法测定Zeta电位。用铁测定试剂盒测定Fe3O4的包封率。采用免疫荧光实验检测CD206抗体与巨噬细胞的结合及靶向性。Western blot、qRT-PCR检测巨噬细胞的极化指数。并用BALB/C-57小鼠皮下肿瘤模型验证纳米微球促进肿瘤相关巨噬细胞（TAM）的极化状态。结果 纳米微球的平均直径在260~95 nm范围内,Zeta电位值在-19~-33 MV。Fe3O4的包封率在65%~75%。流式细胞术检测CD206单克隆抗体与PLGA微球偶联率为65%~70%,免疫荧光实验证实了PLGA微球与CD206高表达巨噬细胞的靶向结合能力。Western blot和qRT-PCR证实了偶联CD206抗体载Fe3O4的PLGA纳米微球（CD206-Fe3O4-PLGA）和载Fe3O4的PLGA纳米微球（Fe3O4-PLGA）促进TNF-α、iNOS和IL-1β的表达（P<0.05）。小鼠肿瘤模型研究证实CD206-Fe3O4-PLGA纳米颗粒促进TAMs中CD86的表达。结论 PLGA纳米微球具有均匀的粒子的大小及Zeta电位,以及较好的抗体偶联效率及纳米铁包封率,同时偶联CD206的PLGA微球能够较好的靶向结M2型巨噬细胞,并通过释放包被的Fe3O4促进巨噬细胞的M1型极化。本研究为肿瘤的免疫治疗提供了一种潜在的方法。     

Mirizzi综合征诊治分析53例

目的:探讨Mirizzi综合征的诊断和治疗方法.方法:回顾性分析本院1997-10/2006-09共收治的Mirizzi综合征53例患者的临床资料,男15例,女38例,年龄28-82(平均62)岁.术前主要以B超、计算机体层摄影术(CT)、内窥镜逆行胰胆管造影术(ERCP)和磁共振胰胆管造影术(MRCP)等检查手段进行筛查,以术中结果为最终诊断,针对不同的病例选用适合不同个体的手术治疗方式.结果:Mirizzi综合征患者53例按Csendes分型法分为Ⅰ型31例,Ⅱ型12例,Ⅲ型7例,Ⅳ型3例.均行手术治疗,患者住院时间最短5 d,最长2 mo,平均15 d.术后随访6 mo-10年,5例失访,1例因其他疾病死亡,2例胆道再发结石手术治愈,全组无手术死亡,近期发生胆瘘1例再次手术治愈.结论:Mirizzi综合征术前诊断困难,需借助多种影像学技术,术前明确诊断可减少Mirizzi综合征术中胆道损伤的发生率,要针对不同的病例选用适合不同个体的诊断和治疗手段.     

白细胞介素-1受体相关激酶-4短发夹RNA阻断库普弗细胞激活效应的实验研究

目的 探讨以白细胞介素-1受体相关激酶-4（IRAK-4）特异性短发夹RNA（shRNA）阻断内毒素诱导的库普弗细胞（KCs）激活效应的可行性。方法 构建两对表达IRAK-4-shRNA的阳性载体质粒（pSfIRAK-4-A，pSfIRAK-4-B）及一对阴性载体质粒（pSⅡRAK-4-C）。分离培养小鼠KCs，分为正常对照组，RNA干扰（RNAi）对照组（转染pSⅡRAK-4-C）与RNAi抑制组（转染pSⅡRAK-4-A，pSⅡRAK-4-B）。质粒转染后24h，加入0．1μg／ml脂多糖（LPS）。6h后，蛋白免疫印迹法及逆转录聚合酶链反应测定IRAK-4蛋白和mRNA表达水平；酶联免疫吸附法检测0、1、3、6、12h后KCs的核因子-κB（NFKB）活性及培养上清液中肿瘤坏死因子α含量。结果 RNAi抑制组IRAK-4表达水平，以及LPS刺激后NFKB活性、肿瘤坏死因子α峰值均明显低于正常对照组和RNAi对照组，t值分别为22．50，4．18及958．49，P〈0．01；尤其是pSⅡRAK-4-A组，抑制效果明显优于pSⅡRAK-4-B，t值分别为12．60，3．36及256．39，P〈0．01。结论 以IRAK-4为靶点的shRNA能有效的阻断内毒素诱导的KCs激活效应。     

NF-κB诱骗寡核苷酸对内毒素性肝损伤的保护作用和机制

目的探讨NF-κB诱骗寡脱氧核苷酸对大鼠内毒素性肝损伤的保护作用及其机制。方法60只SD大鼠随机分为对照组、内毒素(LPS)组、诱骗寡核苷酸(decoy ODNs)处理组。取各组大鼠肝组织检测NF-κB蛋白结合活性(EMSA),观察组织病理学改变(光镜)及肝细胞凋亡(TUNEL)。取静脉血检测AST(自动生化仪)以及TNF-α,IL-6的表达水平(ELISA)。结果与对照组相比,内毒素组NF-κB活性明显升高,诱发大量肝细胞凋亡,肝脏损伤明显;同时血清AST,TNF-α及IL-6明显升高(P0.01)。与内毒素组相比,NF-κB诱骗寡核苷酸处理组NF-κB活性受抑制(P0.01)、肝脏组织病理学改变和肝细胞凋亡明显减轻,血清中TNF-α和AST表达水平降低(P0.01),但IL-6表达与内毒素组差异无统计学意义(P0.05)。结论NF-κB诱骗策略能高效抑制NF-κB的活性,抑制其下游有害细胞因子的产生,从而减轻内毒素性肝损伤。     

不同试剂转染RIP140-siRNA至库普弗细胞的效率及毒性比较

目的对比不同的转染试剂转染RIP140-siRNA至肝脏库普弗细胞的转染效率及它们对肝脏库普弗细胞的细胞毒性,从而
寻找出最佳的肝脏库普弗细胞试剂转染方法和条件。方法以肝脏库普弗细胞为研究对象,以绿色荧光蛋白（GFP）标记的
RIP140-siRNA 为报告基因（reporter gene）,采用lipofectamine 2000,罗氏试剂（X-treme GENE siRNA Transfection Reagent）及
嘌呤霉素筛选的慢病毒（1.0×108 TU/mL）作为转染试剂,荧光倒置显微镜下观察细胞转染效果,激光扫描共聚焦显微镜分析不
同试剂转染后细胞RIP140的表达,流式细胞术检测各组细胞凋亡,CCK-8检测各组细胞增殖抑制情况。收集细胞并进行裂解,
提取细胞RNA与蛋白质,运用RT-RCR和Western blot实验法检测转染RIP140-siRNA后的基因及蛋白质表达情况。结果对于
肝脏库普弗细胞而言,在转染效率方面：嘌呤霉素筛选的慢病毒转染效率最高,可达90%以上;罗氏试剂其次;lipofectamine
2000效果最差。在试剂的细胞毒性方面：流式细胞术及CCK-8检测结果显示罗氏试剂的细胞毒性最小,细胞可见其原有形态;
慢病毒其次;lipofectamine 2000细胞毒性最大,可见多数细胞失去原有形态,并存在细胞裂解状态。RT-RCR和Western blot实
验显示慢病毒转染RIP140-siRNA的肝脏库普氏细胞组无论在基因方面还是在蛋白质水平均明显低表达于lipofectamine 2000
和罗氏试剂所转染的肝脏库普弗细胞组（P<0.05）。结论对于原代细胞肝脏库普弗细胞,在试剂转染方面,慢病毒转染方法可
以达到理想的转染效率和较小的细胞毒性,且条件可控性与稳定性方面更加优越。
     

过表达RIP140的肿瘤相关巨噬细胞抑制肝癌细胞的侵袭和增殖

目的探讨肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）中RIP140 的表达对肝癌细胞侵袭、增殖的影响。方法慢病毒介导小鼠腹腔巨 噬细胞（PMs）RIP140 的过表达,Western blot 和Real-time PCR（qRT-PCR）分别检测PMs中RIP140 蛋白以及核酸表达水平, 流式细胞仪分析慢病毒转染率;Western blot、细胞免疫荧光和qRT-PCR 检测肝癌条件培养基（HCM）刺激PMs 后TAMs中 RIP140 的表达变化;HCM刺激PMs以及HCM刺激过表达RIP140 的PMs,qRT-PCR检测TAMs极化指标以及NF-κB和IL-6 的表达;Transwell 实验和细胞流式凋亡实验检测肝癌细胞的侵袭和凋亡;肝癌细胞和PMs以4∶1 比例注射于BALB/c裸鼠皮 下,建立裸鼠皮下肝癌模型,成瘤癌组织HE染色和免疫组化评定肝癌组织大体生长情况和肝癌细胞增殖能力。结果慢病 毒介导PMs RIP140 的过表达,病毒转染效率高,RIP140 过表达明显;HCM刺激PMs后,TAMs中RIP140 呈低表达;HCM诱 导TAMs呈M2 型极化,并且与肿瘤生长密切相关的NF-κB-IL-6 轴处于活化状态;TAMs可促进肝癌细胞侵袭和增殖,抑制 肝癌细胞凋亡。TAMs过表达RIP140 可抑制HCM介导的TAMs M2 型极化并抑制NF-κB/IL-6 通路的激活,减少IL-6 的释 放;除此之外,TAMs过表达RIP140 可抑制肝癌细胞的侵袭和增殖,促进肝癌细胞的凋亡。结论过表达RIP140 的TAMs可 抑制肝癌细胞的侵袭和增殖。其机制可能与TAMs过表达RIP140后抑制TAMs M2型极化有关。     

经肠系膜上动脉右后入路联合钩突优先腹腔镜胰十二指肠切除术的初步探索和体会

目的 探讨经肠系膜上动脉（superior mesenteric artery,SMA）右后入路联合钩突优先在腹腔镜胰十二指肠切除术（laparoscopic pancreaticoduodenectomy,LPD）中的安全性和可行性。方法 对2022年12月至2023年5月期间重庆医科大学附属第二医院收治的5例行经SMA右后入路联合钩突优先的LPD患者的临床资料进行回顾性分析。结果 5例经SMA右后入路联合钩突优先的LPD手术均顺利完成。手术时间为（366±51）min，术中出血量为（140±42）mL，术后住院时间为（11±2）d。术后病理回示均达到R0切除，5例患者均未出现胃肠瘘、胆汁漏，无明显胃瘫，2例出现生化瘘，术后随访时间为（7±2）月，随访期间均未出现复发。结论 经SMA右后入路联合钩突优先的LPD是一种安全、可行的手术方式，尤其适用于无明显血管浸润且直径≤2 cm的肿瘤。     

女性直肠癌患者Mile''s术后早期性功能障碍的管理

我国每年约10万人需行结肠造口术,而40%患者术后将出现性功能障碍[1],虽然这一问题给患者及家属带来极大不幸,但由于对生命无直接影响,既往医护人员对之重视不够,尤其是女性性功能问题.我们调查分析126例Mile's术后早期女性患者性生理、心理变化,并探讨了相应对策.