自噬在脂多糖诱导的A549细胞炎症反应中的作用及机制研究

目的 探讨自噬在脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的人肺泡上皮A549细胞炎症反应中的作用及机制。 方法 用LPS刺激A549细胞建立炎症反应模型,按浓度（0、1、5、10 μg/mL）和时间（0、4、8、12、24 h）分组（各组n=3）。用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-methyladenine,3-MA）处理细胞,分为对照组、LPS组、3-MA组、3-MA+LPS组（各组n=3）;用自噬激动剂雷帕霉素（rapamycin,RAPA）处理细胞,分为对照组、LPS组、RAPA组、RAPA+LPS组（各组n=3）。通过Toll样受体4（Toll-like receptor 4,TLR4）过表达质粒和siRNA转染A549细胞,实验分为两部分,每部分各分4组（各组n=3）：TLR4过表达对照组、TLR4过表达组、TLR4过表达对照+LPS组、TLR4过表达+LPS组;TLR4沉默对照组、TLR4沉默组、TLR4沉默对照+LPS组、TLR4沉默+LPS组。采用CCK-8法检测细胞存活率,免疫印迹法检测炎症指标（NLRP3、Caspase-1、ASC）、自噬指标（LC3B、Beclin-1、P62）、TLR4蛋白表达水平。 结果 1 μg/mL浓度的LPS刺激12 h后,炎症指标（NLRP3、Caspase-1、ASC）、自噬指标（LC3B、Beclin-1、P62）和TLR4蛋白表达均明显升高并达峰值（P<0.05）。与LPS组比较,3-MA+LPS组自噬相关蛋白表达降低,炎症相关蛋白表达升高,TLR4蛋白表达上调;RAPA+LPS组自噬相关蛋白表达升高,炎症相关蛋白表达降低,TLR4蛋白表达下调（P<0.05）。TLR4过表达+LPS组较TLR4过表达对照+LPS组自噬相关蛋白表达降低,炎症相关蛋白表达升高;TLR4沉默+LPS组较TLR4沉默对照+LPS组自噬相关蛋白表达升高,炎症相关蛋白表达降低（P<0.05）。 结论 在LPS诱导的人肺泡上皮A549细胞炎症反应中,自噬流对A549细胞具有一定保护作用;TLR4介导自噬流对LPS诱导的人肺泡上皮A549细胞炎症反应进行负向调控。