姜黄素通过下调nectin-4抑制肺癌PC-9细胞的迁移和侵袭

目的:探讨姜黄素对肺癌PC-9细胞迁移和侵袭的抑制作用及其与nectin-4表达的关系。方法:用MTT、划痕修复和Transwell小室实验检测姜黄素对肺癌PC-9细胞活力、迁移和侵袭能力的影响;用Western blot技术检测姜黄素对nectin-4表达及AKT通路的影响;经siRNA干扰nectin-4后观察姜黄素对PC-9细胞活力、迁移、侵袭及AKT通路的影响。结果:姜黄素能抑制PC-9细胞活力,10、20μmol/L姜黄素组与对照组相比,划痕修复率降低,穿膜细胞数目显著下降。姜黄素作用肺癌PC-9细胞24 h后,nectin-4表达下调。转染siNectin-4 48 h和72 h后,siNectin-4组比对照组的细胞活力显著降低(P0.01),划痕修复率及穿膜细胞数目显著下降(P0.01)。姜黄素与siNectin-4均抑制了PC-9细胞AKT通路的激活。姜黄素与siNectin-4联用时细胞活力降低(P0.01),划痕修复率、细胞侵袭能力及AKT磷酸化水平下降。结论:在肺癌PC-9细胞中,姜黄素通过下调nectin-4表达、调控下游AKT通路来抑制细胞迁移和侵袭。     

Nectin 4在肺癌组织中的表达及干扰nectin 4 对肺癌细胞增殖和迁移侵袭的影响

摘 要：［目的］ 研究nectin 4在肺癌组织中的表达及其在肺癌细胞增殖、迁移侵袭过程中的作用。［方法］ 免疫组化法检测20例肺癌组织及其对应癌旁组织中nectin 4的表达情况;QPCR及Western Blot分别检测不同肺癌细胞株及正常肺上皮细胞中nectin 4 mRNA和蛋白的表达情况;设计nectin 4干扰 RNA序列,转染肺癌细胞后,MTT法检测细胞的增殖能力。划痕愈合实验和Transwell小室法分别检测细胞的迁移能力和侵袭能力。［结果］ 免疫组化结果显示nectin 4在癌旁组织中不表达,而40%的肺癌组织中表达阳性（8/20）,且nectin 4 的表达与肺癌患者淋巴结转移明显相关（r=0.612,P=0.004）。QPCR及Western Blot结果显示,正常肺上皮细胞BEAS-2B中nectin 4表达较低,而在A549和PC-9肺癌细胞株中nectin 4表达明显较高。 设计的其中一条nectin 4 siRNA可以降低肺癌A549和PC-9细胞nectin 4蛋白表达70%以上,且nectin 4基因干扰后,肺癌细胞的增殖能力减弱,迁移和侵袭能力也受到明显抑制。［结论］ Nectin 4表达水平与肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭密切相关,可以作为肺癌转移治疗的重要靶点。     

miRNA-126对肺癌A549细胞的增殖、迁移、侵袭及EGFR/AKT/mTOR信号通路的影响

 目的: 探讨微小RNA(microRNA,miRNA)-126对肺癌A549细胞功能的影响及相关的作用机制。方法: 利用脂质体试剂Lipofectamine 2000将miRNA-126转染入肺癌A549细胞中,采用real-time PCR法检测转染后各组细胞中miRNA-126的表达;MTT法检测细胞活力;台盼蓝拒染实验检测细胞存活数目;细胞集落培养实验观察转染后细胞集落形成;划痕愈合实验检测细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;Western blot法检测EGFR/AKT/mTOR通路中各蛋白水平的变化。结果: Real-time PCR结果显示,转染miRNA-126组细胞中的miRNA-126表达水平显著高于阴性对照组和空白对照组(P<0.01),而阴性对照组与空白对照组无显著变化;A549细胞转染miRNA-126模拟物后,细胞增殖和集落形成能力均呈明显下降(P<0.01);肺癌细胞的迁移和侵袭能力也受到明显抑制(P<0.01);Western blot结果显示,转染miRNA-126组细胞中EGFR/AKT/mTOR通路相关蛋白p-EGFR、p-AKT和p-mTOR的水平均有明显降低(P<0.01)。结论: miRNA-126可以显著降低肺癌A549细胞中p-EGFR、p-AKT和p-mTOR的蛋白水平,进而可能抑制其细胞增殖和迁移侵袭能力。     

复方菊明提取物对高血压伴高尿酸血症模型大鼠尿酸的影响

[目的]观察复方菊明提取物(Compound Juming extract,CJE)对高嘌呤饲料饲喂自发性高血压大鼠(Spontaneously Hypertensive Rats,SHR)致高血压伴高尿酸血症模型大鼠的降尿酸作用,并初步探讨其作用机制.[方法]采用SHR连续饲喂高嘌呤饲料8周建立高血压伴高尿酸血症模型大鼠,在造模的同时灌胃给予CJE,连续8周.分别于给药前第0周,给药第3周、第6周、第8周取血测定血清尿酸(uric acid,UA)、肌酐(creatinine,Cr)、尿素氮(nitrogen,BUN)水平;末次给药后取血测定血清黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XOD)、腺苷脱氨酶(adenosine deaminase,ADA)活性.[结果]CJE(10.0、5.0、2.5g·kg-1)均能降低高血压伴高尿酸血症大鼠血清UA、Cr、BUN水平,降低血清XOD、ADA活性.[结论]CJE具有显著的降尿酸及改善肾功能作用,其机制可能与抑制XOD和ADA活性有关.     

基于TCGA和GEO数据挖掘分析PRC1在肺腺癌中的表达及预后意义

目的探讨肺腺癌（LUAD）组织中胞质分裂蛋白调节因子1（PRC1）的表达及其对LUAD患者预后的影响。方法通过肿瘤免疫评估资源（TIMER）数据库分析PRC1mRNA在33种肿瘤中的表达情况,并用人类蛋白质图谱（HPA）数据库的免疫组化结果验证PRC1蛋白在LUAD中的表达。通过肿瘤基因图谱（TCGA）和基因表达综合（GEO）数据库获得PRC1在LUAD中的表达数据及相关临床特征参数,分析PRC1mRNA表达水平与LUAD患者的临床特征、总生存期（OS）和无进展生存期（PFS）的关系。采用基因集富集分析（GSEA）预测PRC1相关的基因通路。结果TIMER数据库分析结果显示,17种肿瘤组织中PRC1mRNA表达水平均高于正常对照组织。TCGA数据库、GSE31210和GSE75037数据集结果提示,LUAD组织中PRC1mRNA表达水平均明显高于正常对照组织或癌旁正常组织,差异均有统计学意义（均P＜0.01）。HPA数据库的免疫组化结果提示,PRC1蛋白在LUAD组织中呈高表达。TCGA数据库分析结果提示,PRC1mRNA表达水平与LUAD患者的性别、吸烟、T分期、N分期和TNM分期均有关（均P＜0.01）。TCGA数据库、GSE31210和GSE68465数据集结果提示,除GSE68465数据集中的PFS外,其余PRC1高表达组患者PFS和OS均差于低表达组（均P＜0.05）。单因素和多因素Cox分析表明,PRC1mRNA表达水平是影响LUAD患者OS和PFS的独立危险因素（均P＜0.05）。GSEA结果提示,PRC1高表达样本富集在有丝分裂纺锤体、G2M检查点、E2F信号通路、DNA修复等基因集中。结论LUAD中PRC1mRNA表达水平上调,PRC1高表达提示LUAD患者的预后差,可作为LUAD患者治疗的潜在靶点。     

依维莫司联合RSL3诱导肺腺癌细胞铁死亡的机制研究

目的探讨依维莫司（EVE）联合铁死亡诱导剂（RSL3）诱导肺腺癌细胞铁死亡的作用及机制。方法人肺腺癌细胞系PC9和H1299分为对照组（药物浓度为0）、不同浓度EVE组、不同浓度RSL3组和EVE+RSL3组,加入相应药物培养。检测铁抑制素1（Fer-1）效果时再加入Fer-1。采用噻唑蓝溴化四唑法检测各组细胞存活率,采用丙二醛（MDA）检测法、铁比色分析法分别检测细胞内MDA、亚铁离子（Fe2+）相对水平;采用Westernblot法检测磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）及谷胱甘肽过氧化物酶（GPX）4相对表达量。结果相比对照组,不同浓度EVE组细胞存活率无明显变化（P＞0.05）;相比RSL3组,EVE+RSL3组细胞存活率显著降低（P＜0.01）。相比未加Fer-1的EVE+RSL3组,加入Fer-1后EVE+RSL3组细胞存活率显著升高（P＜0.05）。相比其他3组,EVE+RSL3组细胞内Fe2+和MDA相对水平均显著升高（均P＜0.05）,p-mTOR和GPX4蛋白相对表达量均显著降低（均P＜0.05）;相比RSL3组,EVE+RSL3组p-mTOR和GPX4蛋白相对表达量均显著降低（均P＜0.01）。结论EVE联合RSL3可能通过mTOR/GPX4通路诱导肺腺癌细胞发生铁死亡。