肿瘤坏死因子β基因多态性在中国汉族SLE病人中的分布特点及与不同人种的比较研究

目的 :探讨中国江苏地区汉族人群TNFβ基因多态性在SLE病人中分布特点 ,并与不同人种进行比较研究。 方法 :收集江苏地区 16 8名无血缘关系健康个体及 6 6例SLE病人的静脉血提取DNA ,应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR RFLP) ,分析TNFβ基因的多态性。 结果 :中国汉族SLE病人与白种SLE病人TNFβ基因频率差异无统计学意义 ;中国汉族健康个体TNFβ 1等位基因频率明显高于白种健康个体 ;SLE病人TNFβ 2基因频率较正常人明显升高 (SLE病人 6 7 4% ,正常人 5 5 1% ,P <0 0 5 ,R =1 6 8) ;中国汉族SLE病人与白种SLE病人TNFβ基因频率差异无统计学意义。 结论 :TNFβ等位基因频率在正常人分布具有种族差异 ,但在SLE病人分布无种族差异。     

悬浮阵列技术在研究与临床中的应用

悬浮阵列技术是一种以荧光编码微球为核心,集流式细胞、激光分析、高速数字信号处理等多种技术于一体的多指标并行分析技术平台,可一次同时准确定量检测100种不同的生物分子;具有高通量、高灵敏度,并行检测等特点;常用于免疫分析、核酸研究、酶学分析、受体、配体识别分析等研究.     

中国江苏地区汉族人群肿瘤坏死因子β遗传多态性研究

目的　探讨中国江苏地区汉族人群肿瘤坏死因子 β遗传多态性分布。方法　收集江苏地区 16 8名无血缘关系健康个体的静脉血提取DNA ,应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性 (PCR -RFLP) ,对TNFβ基因多态性进行分析。结果　TNFβ检测到三个等位基因 ,其基因型频率分别为TNFβ 1/ 1=2 1 4 % ,TNFβ 1/ 2 =4 7% ,TNFβ 2 / 2 =31 5 % ,基因型分布符合Hardy-Weinberg定律。统计分析显示 :江苏地区汉族人群TNFβ等位基因频率分布与欧美白种人均有显著性差异(P <0 0 5 )。结论　TNFβ等位基因频率分布具有种族差异     

B淋巴细胞刺激因子及其受体与多发性骨髓瘤关联性的临床实验诊断研究

目的:探讨B细胞激活因子(BLyS) 及其受体在多发性骨髓瘤(MM)发病中的作用机制.方法:用酶联免疫吸附测定法(ELISA)和实时荧光定量聚合酶链反应 (RFQ-PCR),对19例MM患者和30名健康人血清BLyS含量、外周血单个核细胞(PBMCs) 中BLyS及其受体mRNA 含量进行检测;并比较MM患者血清BLyS含量与外周血BLyS及其受体基因表达水平和免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)浓度、乳酸脱氢酶(LDH)、轻链(kap、lam)的相关性.结果:MM患者血清 BLyS含量[(7.95±4.93) g/L 明显高于健康对照组[(2.70±1.09) g/L,P<0.01 ,并与LDH浓度呈正相关性(r=0.734,P<0.001);97.4% (18/19),84.2% (16/19)的MM患者PBMCs中BLyS、BCMA mRNA表达水平较正常人明显增高,并且也与LDH的含量呈正相关;而47.32% (9/19)患者TACI mRNA表达水平降低.结论:MM患者的血清BLyS蛋白浓度和PBMCs中BLyS及其受体基因表达水平有异常改变,说明BLyS及其受体可能参与MM的发病;BLyS及其受体表达水平也许可作为预后的一个指标.     

PCR-RFLP检测Apo CⅢ基因T-455C多态性的反应条件优化

目的：探讨聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）反应体系中各种成分的优化，建立检测载脂蛋白CⅢ（ApoCⅢ）T-455C多态性的方法。方法：采用PCR—RFLP检测ApoCⅢ基因T-455C多态性，同时通过对参与反应体系的成分，在一定范围内设置不同的浓度或参数组，进行正交试验和单因素逐项试验，观测各成分在不同条件下对结果的影响。结果：ApoCⅢ基因检测到3种基因型。PCR反应体系中不同模板含量、引物浓度、TaqDNA聚合酶用量、dNTP浓度、Mg^2＋浓度、退火温度和酶切体系中PCR产物量、内切酶量、酶切时间等对反应结果均有不同程度的影响。结论：该研究建立的PCR—RFLP体系检测Apo CⅢ基因T-455C多态性技术，是一种高效快速、简单敏感、准确可靠的分析方法，适合常规实验室开展。     

雨课堂在分子生物学检验教学中的应用

雨课堂是清华大学开发的一款线上线下混合式教学工具，适用于较抽象复杂的课程。分子生物学检验教学中引入雨课堂教学软件，发现雨课堂教学既可照顾普通学生的一般要求，又适应学生的个性化学习需求，是一款值得尝试的教学工具。     

鸟苷酸环化酶C基因沉默对人胃癌裸鼠皮下种植瘤的影响

目的:探讨鸟苷酸环化酶C(GC-C)基因沉默对人胃癌裸鼠皮下种植瘤的影响及其机制.方法:将SGC-7901细胞(SGC-7901组)、空质粒转染的细胞(PRNA组)、GC-C基因稳定沉默的细胞(GC-C-shRNA组)悬液先在裸鼠皮下接种成瘤,再取瘤组织块分别接种到裸鼠皮下,建立3种胃癌裸鼠皮下种植瘤模型.观察裸鼠一般情况、肿瘤的成瘤率、生长速度,描绘肿瘤的生长曲线,计算肿瘤的抑瘤率;采用实时荧光定量PCR(RFQ-PCR),Western blot和免疫组织化学法检测GC-C和趋化因子受体4(CXCR4)在各组移植瘤组织中的表达.结果:与SGC-7901组和PRNA组比较,GC-C-shRNA组裸鼠移植瘤生长速度明显减慢、体积明显变小(抑制率分别为33.7%、33.2%),肿瘤异型性、坏死程度明显降低,差异具有统计学意义(均P<0.05),且移植瘤组织中GC-C和CXCR4 mRNA和蛋白均明显下调(GC-CmRNA:7.47±1.70 vs 11.18±0.60,11.28±0.85;GC-C蛋白:0.52±0.15 vs 1.04±0.19,1.03±0.24;CXCR4蛋白:0.67±0.13 vs 1.02±0.21,1.03±0.23,均P<0.05).结论:GC-C基因稳定沉默在体内能保持稳定,且能抑制裸鼠移植瘤生长,该过程可能与CXCR4下调有关.     

应用NCCLS EP9-A文件评价两种磷试剂

目的探讨在生化分析仪上使用国产试剂替代进口原装试剂检测血清磷(Phosphor)的可行性。方法按照EP9-A文件提供的方法,每天取临床标本8份,分别用两种试剂测定样本磷,共测定5天,记录检测结果,并对两种试剂进行偏差评估。结果采用两种试剂测定的血清磷结果的相关系数为0.996,截距a=0.019,斜率b=0.999,无方法内、间的离群点,测定结果的偏差在允许误差范围内。结论经过方法对比及偏差评估确定在本实验室使用国产试剂替代进口原装试剂是可行的。     

抑癌基因PTEN与人类肿瘤的研究进展

PTEN基因是1997年第一个克隆得到的具有磷酸酶活性的抑癌基因，为肿瘤抑制基因家庭的新成员。它具有蛋白质酪氨酸磷酸酶催化区域，并与细胞骨架中的张力蛋白、辅助蛋白具有较高的同源性。其定位于人染色体杂合性缺失高发区10q23.3，在成人胶质细胞瘤、前列腺瘤等多种肿瘤，尤其是晚期恶性肿瘤中存在突变。就PTEN基因的结构、功能、突变与人类肿瘤的关系作一综述。     

Livin转录变体在结肠癌中的表达及其临床意义

目的:探讨凋亡蛋白抑制因子Livin 2种转录变体(Livin α和Livin β)在结肠癌中的表达及其临床意义.方法:采用以SYBR Green Ⅰ为染料的实时荧光定量-PCR(real-time fluorogentic quantitative PCR,RFQ-PCR),分析24例结肠癌组织中Livin α和Livin β2种转录变体的表达情况,并以癌旁正常组织和良性病变组织作为对照.结果:结肠癌组织中Livin α的表达阳性率为75%(18/24),明显高于癌旁正常组织的16.7%(4/24)和良性病变组的11.1%(1/9);Livin β的阳性率为83.3%(20/24),癌旁正常组织为16.7%(4/24),良性病变组为11.1%(1/9);Livin α和Livin β的表达率与患者的性别、癌症转移无相关性(P>0.05),与结肠癌Dukes病理分期也无明显相关性,但Livin α与结肠癌分化程度呈正相关(P<0.05).结论:凋亡蛋白抑制因子Livin 2种转录变体在结肠癌组织中高表达,且Livin α与结肠癌分化程度密切相关.