浅蓝菌素对人结肠癌裸鼠移植瘤bcl-2及bax基因表达水平的影响

目的 :通过观察人结肠癌LoVo细胞裸鼠移植瘤bcl 2及bax基因表达水平 ,探讨脂肪酸合酶抑制剂浅蓝菌素选择性的抑瘤途径和机制。方法 :建立人结肠癌裸鼠移植瘤模型 ,浅蓝菌素每公斤体重 160mg腹腔注射 ,1次·d-1,连续10d ,第 17天处死并解剖动物 ,瘤组织作免疫组织化学检测bcl 2及bax基因表达水平。结果 :浅蓝菌素处理组结肠癌LoVo细胞移植瘤bcl 2基因蛋白表达率为 68.5 % ;对照组bcl 2蛋白阳性表达率为 87.8% ,阳性细胞弥漫分布。两组间有显著性差异 (P <0 .0 1)。bax基因蛋白在浅蓝菌素组移植瘤组织阳性表达率为 75 .4% ,主要呈强阳性表达 ;对照组阳性表达率为 9.5 %。两组间比较有统计学差异 (P <0 .0 1)。结论 :浅蓝菌素可使结肠癌LoVo细胞移植瘤的bcl 2基因表达下调 ,bax基因表达增强 ,提示bcl 2及bax基因在浅蓝菌素诱导的人结肠癌LoVo细胞凋亡中可能起着重要的调控作用。     

用套式RT-PCR法检测肝细胞癌中丙型肝炎病毒基因型

目的　检测人肝细胞癌（ＨＣＣ）组织中丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因型。方法　用ＲＴＰＣＲ法常规检测ＨＣＣ组织和部分患者血清ＨＣＶ,再以巢式ＲＴＰＣＲ法对ＨＣＶ阳性标本中５种ＨＣＶ基因型进行鉴别。对多数标本中ＨＢｓＡｇ和ＨＢＶＤＮＡ也进行了免疫组化和原位杂交检测。结果　ＨＣＣ组织中ＨＣＶ阳性率为５０％（３９／７８）,与ＨＢＶ者（６４．４％）差异无显著性意义（Ｐ＞０．０５）,两者重叠感染率３４％（２０／５９）。在１０例血清ＨＣＶ阴性ＨＣＣ患者中,３例ＨＣＣ冰冻组织检出ＨＣＶＲＮＡ。在ＨＣＣ组织中共检出３种ＨＣＶ基因型,其中２ａ、１ｂ、３ａ和混合型分别为１７例（４３．６％）、９例（２３．１％）、４例（１０．３％）和２例（５．１％）,各基因型间差异有极显著性意义（Ｐ＜０．０１）,但２ａ型与１ｂ型间差异无显著性（Ｐ＞０．０５）,２ａ型与ＨＢＶ的重叠感染明显较其他ＨＣＶ基因型者常见（Ｐ＜０．０５）。结论　２ａ型ＨＣＶ是ＨＣＣ组织中最常见的基因型并易与ＨＢＶ重叠感染率,ＨＣＣ患者血清ＨＣＶ检测不一定能准确反映ＨＣＣ组织中的ＨＣＶ感染率,其所示基因型也有所不同。     

菝葜皂甙元对红细胞Na~ 泵的抑制

据Edelman提出的细胞产热的Na~ 泵假说,机体产热的增加,在很大程度上与细胞膜Na~ 泵活性的升高有关。阴虚和阳虚患者产热异常的表现,就可能伴有Na~ 泵活性的改变。中药知母是一种滋阴泻火药,对阴虚患者具有良好的清热效果。菝葜皂甙元是知母提取物中的一个有效成份,已经证实它是Na~ 、K~ -ATP酶的一种抑制剂,并且知母的清热作用的机理可能与菝葜皂甙元对Na~ 、K~ -ATP酶的抑制有关。     

肝细胞癌中丙型肝炎病毒的原位检测

目的了解丙型肝炎病毒在本地区肝细胞癌中存在的频度.方法66例首次住院手术肝癌标本(含癌及癌旁组织),其固定、包埋、切片均经无RNase处理.应用地高辛标记HCVcDNA重组基因探针进行原位杂交,检测HCV病毒核酸.免疫组化SABC法检测HCV不同基因区抗原,HCV-CP10,HCV-NS3,HCV-NS5在HCC中的表达.结果66例HCC中HCVRNA阳性50例,阳性率为75.8%,阳性信号大部分存在于胞质中,偶有核阳性,或核浆混合型.HCVCP10阳性42例,阳性率63.6%.HCVCP10的阳性表达定位于胞质,少数病例有明显的围核分布现象,未见明确的核阳性.HCVNS3阳性33例,阳性率50%.HCVNS3阳性信号以胞质型为主,少数为核、浆混合型.HCVNS5阳性48例,阳性率72.8%.HCVNS5阳性信号以胞质型为主,部分呈膜型,少数为核、浆混合型.HCVRNA及三种抗原在癌周组织中的表达明显强于癌组织者.阳性细胞在癌组织呈散在分布,少数呈灶性分布,偶尔呈弥漫分布.在癌周组织大部分呈灶性、弥漫性分布,也可呈散在分布.经x2检验原位杂交检测HCVRNA一般比免疫组化检测HCV不同基因区抗原阳性率高,敏感(HCVRNA与HCVCP10相比,x2=4.083,P<0.05;与HCVNS3相比,x2=13.479,P<0.005;与HCVNS5相比,x2=0.1,P>0.5).两种检测方法的结果又有联系(HCVRNA与HCVCP10之间,x2=21.038,P<0.005;与HCVNS3之间,x2=13.942,P<0.005;与HCVNS5之间,x2=29.838,P<0.005).结论原位杂交结合免疫组化更能准确反映HCC中HCV的感染情况.     

EGFR-STAT3信号转导通路在大鼠实验性肝内胆管细胞癌发生中的作用

[目的]探讨EGFR-STAT3信号转导通路在大鼠实验性肝内胆管细胞癌形成过程中的表达及活化。[方法]3′-甲基-4-二甲基偶氮苯(3′Me-DAB)诱发大鼠肝癌,免疫组化法检测EGFR、TGFα、STAT3、p-STAT3在胆管细胞癌中的表达,原位杂交法检测STAT3在胆管细胞癌及正常肝组织中mRNA的表达,KS400图象分析系统进行图象半定量分析。[结果]EGFR、TGFα、STAT3、p-STAT3在胆管细胞癌中100%表达,与正常组织相比,胆管细胞癌中EGFR、TGFα表达明显升高(P<0.05)。胆管细胞癌中STAT3在mRNA、蛋白水平的表达较正常胆管及增生胆管中明显升高(P<0.05),p-STAT3也显著增高(P<0.05)。胆管细胞癌中p-STAT3与TGFα的表达呈正相关性(P<0.05)。[结论]胆管细胞癌中STAT3在转录、蛋白表达及活化水平显著增强,STAT3在胆管细胞癌中的持续活化与上游信号转导通路EGFR-TGFα自分泌环作用增强有关。     

菝葜皂甙元对人红细胞钠、钾泵的抑制作用

我们对中药清热药(知母、生地)的作用机理和知母的有效成分菝葜皂甙元抑制人红细胞钠、钾泵的特性进行了研究。结果表明菝葜皂甙元和生地梓醇对人红细胞钠、钾泵具有显著的抑制作用,提示清热药的清热作用可能与钠、钾泵被抑制有关。 菝葜皂甙元对人红细胞钠、钾泵的抑制作用是可逆的,抑制作用的发生是比较缓慢的,并可被细胞外Na~ 所增强,而被细胞外K~ 所拮抗。菝葜皂甙元对红细胞摄取Rb~ 的抑制属混合性抑制。菝葜皂甙元掺入重新封闭的人红细胞影泡的研究,提示菝葜皂甙元抑制红细胞钠、钾泵的作用部位可能在细胞膜的外侧面。     

罗丹明-6GDN在体外的正常细胞和肿瘤细胞中潴留效应比较

对荧光染料罗丹明-6GDN(Rhodamine-6GDN,Rh-6GDN)在细胞中潴留效应的研究表明,正常细胞与肿瘤细胞对Rh-6GDN的摄取无明显差别,但肿瘤细胞保留Rh-6GDN的能力显著强于正常细胞,肿瘤细胞能保留染料达5d以上,而正常细胞在24h内将染料完全排出,二者之间的差异为Rh-6GDN在肿瘤诊断上的应用提供了可能性。     

肝细胞癌癌组织三维形态学观察——共聚焦激光扫描显微镜的应用

目的 应用CLSM对肝细胞癌标本的石蜡切片进行三维重建,显示立体形态特点,探讨CLSM在肿瘤病理学中的应用.方法 30μm石蜡切片,YOYO-1碘化物DNA荧光探针标记细胞核,CLSM连续光学切片、三维重建,观察肝细胞癌、不典型增生及正常肝组织的三维形态特点.结果 肝癌细胞核排列紊乱、积堆,体积增大、大小不等、明显多形;核表面不规则、凹凸不平、荧光强度不均;核内染色质分布不均、结构粗糙、多浓集于核膜下.结论 CLSM的断层扫描和三维重建功能提供了高精密度的三维图象和丰富信息,有助于准确诊断.     

大鼠肝细胞GSH转运体系在非洲爪蟾卵中的表达

探讨大鼠肝细胞ＧＳＨ转运体系在非洲爪蟾卵中表达的可能性。用大鼠肝细胞ｍＲＮＡ注射蛙卵，检测蛙卵转运ＧＳＨ的活性。结果：注射大鼠肝细胞ｍＲＮＡ的蛙卵，３ｄ后能表达摄取和释放ＧＳＨ的转运活性，而注射水的蛙卵则不显示这种转运活性。将大鼠肝细胞ｍＲＮＡ进一步分段离心后分别注射蛙卵，发现大鼠肝细胞的两类ＧＳＨ转运蛋白分别由分子大小为２．０～３．０ｋｂ和４．０～５．０ｋｂ的ｍＲＮＡ所编码。结论：非洲爪蟾卵可用于检测和克隆大鼠肝细胞ＧＳＨ的转运蛋白。