抗Pgp/抗CD3双特异双链抗体的生物学活性研究

目的　研究抗Pgp 抗CD3双特异双链抗体介导的特异性靶向杀伤活性。方法　采用亲和层析法分离纯化本室构建的抗Pgp 抗CD3双特异双链抗体可溶性表达产物 ,并用SDS PAGE、Westernblot及抗活细胞间接免疫荧光法鉴定纯化产物 ;采用51 Cr释放试验测定其介导的体外靶向杀伤活性。结果　纯化的抗Pgp 抗CD3双特异双链抗体具有与Jurkat细胞 (CD3 )和K5 6 2 A0 2 (Pgp )细胞结合的活性 ;抗Pgp 抗CD3双特异双链抗体具有介导激活的T淋巴细胞杀伤Pgp表达阳性的耐药肿瘤细胞的作用 ,杀伤作用的强弱显示出效靶比和剂量依赖关系 ,且可被CD3ScFv或PgpScFv特异性的阻断。结论　抗Pgp 抗CD3微型双功能抗体有望成为治疗耐药肿瘤 ,特别是肿瘤残留灶和微小转移灶的治疗的一种新策略。     

监狱女警察心理健康调查研究

对监狱女干警用症状自评量表 ( SCL-90 )及艾林克人格问卷 ( EPQ)测查显示 ,5 3.0 1 %的人存在中度以上的心理健康问题。除人际关系敏感因子外 ,监狱女干警 SCL-90其余 8个因子都显著地高于国内常模。SCL-90与 EPQ得分的相关分析表明 ,情绪越不稳定者倾向于出现更多的心理健康问题 ;精神质得分越高 ,心理健康问题越突出。     

白血病患者多药耐药相关蛋白基因和多药耐药基因mdr1的表达及其临床意义

应用半定量逆转录－多聚酶链反应技术检测了２９例白血病患者骨髓细胞中多药耐药相关蛋白（ＭＲＰ）基因的表达，同时用间接免疫荧光法检测了每例患者的Ｐ糖蛋白（Ｐｇｐ）的表达。发现临床耐药组Ｐｇｐ过度表达占４５．５％，ＭＲＰ过度表达占６３．６％；临床不耐药组分别占５．５６％和１６．６７％。根据上述结果提出了多药耐药的判断标准并应用临床流行病学方法对该标准进行了评价     

靶向4-1BBL 和CD3 双信号的协同抗肿瘤作用机制研究*

目的:探讨人4-1BBL 胞外区/抗CD20融合蛋白增强抗CD3/抗CD20diabody介导的靶向杀伤作用及其机制。方法:通过表达纯化人4-1BBL 胞外区/抗CD20融合蛋白及抗CD3/抗CD20diabody,利用台盼蓝计数观察联合应用人4-1BBL 胞外区/抗CD20融合蛋白及抗CD3/抗CD20diabody对淋巴细胞增殖的影响;采用ELISA 检测白介素-2（IL- 2）水平。RT-PCR 检测穿孔素和颗粒酶mRNA 的表达。Calcein 检测其联合应用抗CD3/抗CD20双功能抗体及PBL 对靶细胞Raji 细胞的杀伤作用。结果:人4-1BBL 胞外区/抗CD20融合蛋白增强抗CD3/抗CD20diabody对靶细胞Raji 细胞的杀伤作用,其机制可能是促进淋巴细胞增殖,减少细胞死亡,促进IL- 2 分泌及上调穿孔素和颗粒酶mRNA 表达。结论:人4-1BBL 胞外区/抗CD20融合蛋白与抗CD3/抗CD20diabody联合应用,分别靶向4-1BBL 和CD3 双信号发挥协同抗肿瘤作用,为肿瘤免疫治疗提供了新的思路。      

人B淋巴瘤裸鼠腹腔内移植模型

目的：建立人 Ｂ淋巴瘤裸鼠移植瘤腹腔模型,主要是为了研究抗 ＣＤ２０／ＣＤ３双功能抗体对人 Ｂ淋巴瘤的治疗作用。方法：采用５周龄左右的雌性ＢＡＬＢ／ｃ－ｎｕ,腹腔注射ｐｒｉｓｔａｎｅ ０．２ｍｌ／只 ２次,经６０Ｃｏ照射,３天后腹腔接种人Ｂ淋巴瘤细胞株（Ｒａｊｉ）１×１０～７／只,并于第 ２天随机分组用预先激活的Ｔ细胞加入双功能抗体进行治疗,每周腹腔给药 １次,共４次。结果：人Ｂ淋巴瘤细胞株（Ｒａｊｉ）裸鼠腹腔移植,接种３８只均获成功,成瘤率１００％。染色体检查证明为人类染色体特征,病理形态学观察,瘤块主要分布于腹腔、肠系膜、淋巴结、贴近肠壁处,并且ＣＤ１９、ＣＤ２０,ＨＬＡ—ＤＲ阳性率达９５％以上,对照组４０天时全部死亡,治疗组存活至１００天处死。结论：成功地建立了人类Ｂ淋巴瘤裸鼠移植瘤腹腔模型,经过实验证明,抗ＣＤ３／抗 ＣＤ２０。双功能抗体有很好地抑癌作用。     

抗CD_3/抗CD_(20)微型双功能抗体裸鼠体内分布研究

目的：建立裸鼠皮下人Ｂ－淋巴细胞移植瘤模型,研究抗ＣＤ３／ＣＤ２０。微型双功能抗体在裸鼠体内的分布。方法：采用亲和层析分离纯化本室构建的抗 ＣＤ３／抗 ＣＤ２０微型双功能抗体可溶性表达产物,并用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ、分子排阻层析和 ＦＡＣＳ鉴定纯化产物;采用５周龄左右的雌性 ＢＡＬＢ／ｃ－ｎｕ,经４Ｇｙ照射、皮下接种 Ｒａｊｉ细胞建立裸鼠皮下人Ｂ－淋巴细胞移植瘤模型,并于眼底静脉丛注射１２５Ｉ标记的抗ＣＤ３／抗ＣＤ２０微型双功能抗体,测定各组织中１２５Ｉ的分布。结果：雌性ＢＡＬＢ／ｃ－ｎｕ经照射、皮下接种１×１０～７～３×１０～７Ｒａｊｉ细胞／只,６～１４天均开始出现移植瘤,移植瘤细胞膜表面标记与 Ｒａｊｉ相同,且在２４小时时肿瘤部位１２５ Ｉ的分布明显低于心、肝、肾、脾,其比值分别为０．０８、０．１９、０．０６和０．５１,而 ７２小时时肿瘤部位１２５Ｉ的分布则高于心、肝、肾、脾,其比值分别为 ２．３２、９．４６、８．２４和９．５０。结论：抗ＣＤ３／抗ＣＤ２０微型双功能抗体能在裸鼠皮下人Ｂ－淋巴细胞移植瘤部位富集,是一个有望用于Ｂ细胞恶性肿瘤临床治疗的双特异性抗体。     

抗CD20 嵌合抗体突变型Fab′片断诱导凋亡过程中活性氧Caspase-3 的变化

 目的 研究抗CD20嵌合抗体突变型Fab’片断诱导Raji细胞凋亡过程中活性氧（ROS），Caspase-3的变化。方法 利用MTT法测定突变型Fab’片断抑制细胞生长，形态学方法观察凋亡细胞的变化，用流式细胞仪检测DCFH—DA荧光探针标记细胞内I的S的变化，以及用酶标仪和Westernblot检测细胞内Caspase-3的变化。结果 MTT法测定突变型Fab’片断对Raji细胞的生长具有抑制作用，其抑制作用呈明显的剂量依赖性，荧光显微镜下观察细胞出现凋亡，流式细胞仪，酶标仪以及Westernblot检测细胞内ROS，Caspase-3的表达增高，并与作用时间，剂量呈依赖关系。结论 ROS，Caspase-3表达的增高，在抗CD20嵌合抗体突变型Fab’片断诱导Raji细胞凋亡的过程中起到重要作用。     

抗人乳腺癌细胞膜表面角蛋白CK8的单克隆抗体的制备及鉴定

目的：建立针对多药耐药人乳腺癌细胞膜表面差异抗原的抗体库,并鉴定抗角蛋白CK8特异性的单克隆抗体。方法：采用细胞免疫和杂交瘤技术制备单克隆抗体库,经免疫沉淀得到抗原-抗体复合物,SDS-PAGE分离目的抗原,质谱测序,Western blot验证及激光共聚焦显微镜观察抗原分子的细胞膜定位。结果：成功筛选到稳定分泌抗CK8分子的单克隆抗体的杂交瘤细胞株（7F9）。结论：文中所研制的单克隆抗体具有与乳腺癌细胞膜表面CK8分子特异结合的活性,在上皮来源肿瘤标志物CK8的临床检测及CK8相关生物学活性研究中具有广泛应用前景。     

人B淋巴瘤裸鼠腹腔内移植模型

目的建立人B淋巴瘤裸鼠移植瘤腹腔模型,主要是为了研究抗CD20/CD3双功能抗体对人B淋巴瘤的治疗作用.方法采用5周龄左右的雌性BALB/c-nu,腹腔注射pristane0.2ml/只2次,经60Co照射,3天后腹腔接种人B淋巴瘤细胞株(Raji)1×107/只,并于第2天随机分组用预先激活的T细胞加入双功能抗体进行治疗,每周腹腔给药1次,共4次.结果人B淋巴瘤细胞株(Raji)裸鼠腹腔移植,接种38只均获成功,成瘤率100%.染色体检查证明为人类染色体特征,病理形态学观察,瘤块主要分布于腹腔、肠系膜、淋巴结、贴近肠壁处,并且CD19、CD20,HLA-DR阳性率达95%以上,对照组40天时全部死亡,治疗组存活至100天处死.结论成功地建立了人类B淋巴瘤裸鼠移植瘤腹腔模型,经过实验证明,抗CD3/抗CD20双功能抗体有很好地抑瘤作用.     

抗CD3/抗CD20双特异双链抗体的生物学活性研究

目的研究抗CD3/抗CD20双特异双链抗体的生物学活性.方法采用亲和层析法纯化本室构建的抗CD3/抗CD20双特异双链抗体可溶性表达产物,并用SDS-PAGE,Westernblot和分子排阻层析鉴定纯化产物;采用FACS法和玫瑰花环试验测定纯化产物与靶细胞的结合活性;采用3H-TdR掺入实验和51Cr释放试验测定该双特异双链抗体的生物学性质.结果纯化的抗CD3/抗CD20双特异双链抗体具有与Jurkat(CD3+)和Daudi细胞(CD20+)的结合活性,且能同时与Jurkat和Daudi细胞结合形成玫瑰花环,并能竞争性封闭亲代鼠源性抗体HIT3a和HI47与Jurkat和Daudi细胞的结合位点;该双特异双链抗体具有促有丝分裂原作用和介导激活的T细胞杀伤Daudi细胞的活性.结论抗CD3/抗CD20双特异双链抗体具有与亲代鼠源性抗体HIT3a和HI47相同的性质,且能介导激活的T细胞杀伤表达CD20抗原的肿瘤细胞,是一个有望用于B细胞恶性肿瘤临床治疗的双特异性抗体.