人乳头状瘤病毒18型阳性肿瘤疫苗的构建及体外活性鉴定

目的: 制备人乳头状瘤病毒（human papilloma virus, HPV）18型阳性的肿瘤疫苗，并观察其体外活性。方法:利用昆虫杆状病毒(简称Bac to Bac)表达系统，将HPV18L1基因重组入穿梭质粒pFastBacHtb，构建HPV18 L1Htb，通过转座反应,将目的基因片段重组入杆状病毒基因     

激光显微切割技术分离淋巴结血管内皮细胞

 目的　探讨淋巴瘤发生的分子机制及有关的基因改变,研究分离、分析淋巴结中血管内皮细胞基因表达差异的方法。方法　将淋巴瘤淋巴结标本液氮速冻,冷冻切片,快速免疫组化标记血管内皮细胞,使用激光显微切割技术分离血管淋巴细胞,提取血管内皮细胞中的mRNA,使用RT-PCR检测所得RNA的质量。结果　成功地实现了血管内皮细胞的分离,并保持了血管内皮细胞中RNA的完整性。结论　确立了一个适于分离淋巴瘤血管内皮细胞的激光显微切割方法。     

淋巴组织中新基因C14ORF44的生物信息学分析

目的研究淋巴瘤和反应性增生淋巴结的基因表达差异。方法将淋巴瘤淋巴结标本和反应性增生淋巴结标本的mRNA与表达谱芯片杂交,获得表达差异基因。用生物信息学方法对新基因C14ORF44进行初步分析。结果表达谱芯片共找出了152条差异表达基因。用生物信息学方法分析了C14ORF44的基因结构、染色体定位、编码蛋白质的理化性质、亚细胞定位等信息。对C14ORF44蛋白的多物种相似蛋白进行了系统进化分析,基本明确了该基因编码一个在胚胎和肿瘤细胞中高表达、进化中保守的核蛋白。结论生物信息学分析表明,C14ORF44是一个有研究价值的癌相关蛋白。这个蛋白可能参与正常的胚胎发育,但也与肿瘤形成有关。     

特异性结合血管内皮生长因子受体2的融合毒素

目的 制备特异性结合血管内皮生长因子受体2（vascular endothelial growth factor receptor-2，VEGFR-2）的融合蛋白．阻断新生肿瘤血管内皮细胞和某些VEGFR-2阳性肿瘤细胞内的蛋白合成，引起细胞死亡。方法运用基因定点突变技术．制成VEGF D63A、E64A、E67A突变体。利用这个可以和VEGFR-2特异性结合的VEGF突变体．代替白喉毒素上的受体结合区，制成了特异性结合VEGFR-2的融合蛋白。结果以去除了受体结合区的DTS91作为对照．以VEGFR-2阳性肿瘤细胞做实验，验证了这个融合毒素对VEGFR-2阳性细胞的选择性杀伤作用。结论制备了特异性杀伤血管内皮生长因子受体2阳性细胞的融合毒素。     

奥美拉唑雷尼替丁硫糖铝治疗胃十二肠溃疡52例临床分析

消化性溃疡指胃十二指肠溃疡,在内科住院人数累占0.8%～3%,十二指肠溃疡约占消化性溃疡的64%,胃溃疡约占25%,复合性溃疡约占11%,近年来十二指肠溃疡在男性中有明显增加趋势,其原因尚不清楚,诊断手段主要是胃镜的检查,治疗方法在不断的修正更新,我们从2000～2003年采用奥美拉唑、雷尼替丁、硫糖铝治疗消化性溃疡,取得较好的疗效,现总结如下。     

南方红豆杉细胞培养物的化学成分研究

采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20、HPLC等柱色谱技术,从南方红豆杉细胞培养物的80%乙醇(体积分数)提取物中分离得到13个化合物,根据理化性质与波谱数据鉴定化合物的结构分别为:2α,4α,7β,9α,10β-pentaacetoxy-14β-hydroxytax-11-ene(1)、2α,4α,7β,9α,10β-pentaacetoxytax-11-ene(2)、1β-deoxybaccatin VI(3)、2α-acetoxytaxusin(4)、taxuyunnanine C(5)、yunnanxane(6)、2α,5α,10β-triacetoxy-14β-propionyloxy-4(20),11-taxadiene(7)、2α,5α,10β-triacetoxy-14β-isobutyryloxy-4(20),11-taxadiene(8)、2α,5α,10β-triacetoxy-14β-(2’-methyl)butyryloxy-4(20),11-taxadiene(9)、13-dehydroxylbaccatin III(10)、13-dehydroxy-10-deacetylbaccatin III(11)、paclitaxel(12)及β-谷甾醇(13)。其中,化合物1为新化合物,化合物2、4、10和11为首次从南方红豆杉的细胞培养物中分离得到。     

淋巴组织中新基因C14ORF44的生物信息学分析

目的研究淋巴瘤和反应性增生淋巴结的基因表达差异。方法将淋巴瘤淋巴结标本和反应性增生淋巴结标本的mRNA与表达谱芯片杂交，获得表达差异基因。用生物信息学方法对新基因C140RF44进行初步分析。结果表达谱芯片共找出了152条差异表达基因。用生物信息学方法分析了C140RF44的基因结构、染色体定位、编码蛋白质的理化性质、亚细胞定位等信息。对C140RF44蛋白的多物种相似蛋白进行了系统进化分析，基本明确了该基因编码一个在胚胎和肿瘤细胞中高表达、进化中保守的核蛋白。结论生物信息学分析表明，C140RF44是一个有研究价值的癌相关蛋白。这个蛋白可能参与正常的胚胎发育，但也与肿瘤形成有关。     

噬菌体呈现技术筛选抗黑色素瘤单链抗体

目的：制备黑色素瘤单抗的单链可变区片段，用于肿瘤的诊断或靶向治疗。方法：从杂交瘤细胞提取总RNA，分别扩增出轻重链可变区基因(variable region of heavy chain，VH和variable region of light chain，VLDNA)，连接形成单链抗体(single chain fragment variable region，ScFv)DNA，将SeFv与载体pCANTAB 5E的连接产物转化大肠杆菌TGl，经M13K07超感染后，获得噬菌体抗体ScFvcDNA文库，用黑色素瘤细胞LiBr对重组的噬菌体抗体进行3轮吸附-洗脱-扩增亲和筛选后，随机挑选克隆经ELISA筛选鉴定。结果：vH、VL和ScFv分别约为360、330、750bp，从随机筛检的30个克隆中获得10个高亲和性噬菌体呈现型ScFv单克隆。结论：用噬菌体呈现技术制备的黑色素瘤ScFv，可为肿瘤的诊断和靶向治疗奠定基础。     

应用CRISPR/Cas9系统在G401细胞株中敲除p21基因

目的 运用 CRISPR/Cas9 基因编辑技术, 在人恶性横纹肌样瘤细胞株 G401 中敲除 p21 基因。 方法 通过反转录定量 PCR（RT-qPCR）及 Western blot 检测各瘤细胞株中 p21 的表达, 针对 p21 基因作用的功能域, 设计了靶向人 p21 基因第 3 个外显子的向导 RNA（sgRNA）, 克隆入 lentiCRISPR v2 载体。 将测序及酶切鉴定正确的重组质粒在 293T 工具细胞中制备慢病毒颗粒并感染 G401 细胞, 使用嘌呤霉素进行阳性细胞筛选, 显微镜下挑取单克隆细胞团并继续培养获得 G401 单克隆细胞株。 提取单克隆细胞株 RNA 及蛋白, 利用 RT-qPCR 及 Western blot 方法检测细胞株中 p21 的敲除效果。 结果 p21 在人横纹肌样瘤细胞中高表达。 成功构建靶向 p21 基因的 lentiCRISPR v2-sgRNA 重组慢病毒质粒。 与对照组相比, 筛选得到的 G401 亚克隆细胞系中 p21 蛋白表达缺失。 结论 针对难转染的 G401 细胞, 应用 CRISPR/Cas9 系统成功构建了 p21 基因敲除的稳定株, 为后续深入研究 p21 在人恶性横纹肌样瘤中的作用机制奠定了基础。