RNA干扰抑制EZH2基因表达对人胶质瘤细胞凋亡及对卡莫司汀敏感性的影响

目的观察RNA干扰技术抑制EZH2基因表达对人胶质瘤U251细胞凋亡及其对卡莫司汀敏感性的影响。方法针对EZH2 mRNA序列设计合成小干扰RNA（siRNA）的DNA模板,构建pRNAT-EZH2重组表达载体,并用其转染人胶质瘤U251细胞。用RT-PCR法检测pRNAT-EZH2转染前后U251细胞中内源性EZH2表达;激光共聚焦显微镜观察转染后及加入卡莫司汀后U251细胞凋亡情况;MTT法检测转染前后U251细胞对化疗药物卡莫司汀敏感性;用分光光度法检测转染前后以及加入卡莫司汀后U251细胞中Caspase-3活性。结果成功构建pRNAT-EZH2重组质粒,并成功转染U251细胞。pRNAT-EZH2重组质粒转染后U251细胞中EZH2 mRNA表达量降低（P〈0.01）;卡莫司汀组及卡莫司汀加pRNAT-EZH2组U251细胞凋亡明显;与卡莫司汀联合时,pRNAT-EZH2组U251细胞生长抑制率明显增高（P〈0.01）;Caspase-3活性明显高于空白对照组和阴性对照组（P均〈0.01）。结论pRNAT-EZH2可抑制EZH2在人胶质瘤U251细胞中的表达,并增强U251细胞对卡莫司汀敏感性。     

外伤性脑室内出血的发生、治疗及预后分析

外伤性脑室内出血(TIVH)是较少见的严重颅脑损伤，大多伴有其他类型的颅脑损伤，预后差，病死率极高。我科自1996年至2001年共收治35例经CT诊断的TIVH，占同期颅脑损伤病人的2．4％，我们对35例进行了回顾性分析，现就其发病机制，治疗方法和预后进行探讨。     

促红细胞生成素对挫裂伤脑组织线粒体的影响

目的 探讨重组促红细胞生成素(rhEPO)对大鼠颅脑损伤后脑线粒体能量代谢以及线粒体呼吸功能的影响.方法 健康雄性SD大鼠63只,随机分为rhEPO治疗组(n=28):以自由落体法制作大鼠腑挫裂伤模型,伤后立即腹腔注射rhEPO 10 U/g,每10 h重复注射1次;对照组(n=28):同样脑挫裂伤模型,伤后立即腹腔注射相同剂量生理盐水;假手术组(n=7):只钻孔不致伤.采用生化检测的方法分别测定治疗组治疗后6 h、12 h、24 h和48 h及各自的对照组大鼠脑组织线粒体ATP酶和SOD的活性和MDA水平以及线粒体呼吸功能.各组数值进行F和t检验.结果 重组促红细胞生成素治疗后12 h、24 h和48 h治疗组大鼠脑组织线粒体ATP酶、SOD活性和呼吸功能均高于各自时间点对照组(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01),而MDA水平则明显低于各自对照组(P＜0.01).结论 重组促红细胞生成素可以通过影响线粒体能量代谢及呼吸功能而减轻大鼠创伤性脑损伤后的继发性脑损害.     

肝细胞生长因子受体反义寡核苷酸影响胶质瘤细胞对丝裂霉素C敏感性的研究

目的探讨肝细胞生长因子受体(c-Met)反义寡核苷酸(ASODN)增强胶质瘤细胞系 U251细胞对丝裂霉素C(MMC)敏感性的作用。方法用5 μmol／L c-Met ASODN封闭U251细胞 c-Met mRNA,将50μg/L的MMC与其共培养,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测c- Met mRNA表达,噻唑蓝(MTT)试验检测U251细胞的生长情况,免疫组织化学法检测细胞PCNA 蛋白的表达,体外检测细胞黏附率。以无义寡核苷酸处理及未处理U251细胞为对照。结果经 c-Met ASODN处理的U251细胞 ,c-Met mRNA的表达(吸光度值为62±21)明显低于经无义寡核苷酸处理U251细胞(吸光度值为150±25,P<0．05);对MMC的敏感性,细胞生长抑制率、细胞黏附率及PCNA指数分别为(53．84±12．21)％、(14．61±3．82)％和(0．35±0．02)％,明显高于相应的无义[(9．86±3．42)％、(24．84±5．90)％和(0．55±0．04)％,P<0．05]。结论 c-Met ASODN能增强胶质瘤细胞系U251细胞对MMC的敏感性,其分子机制可能与c-Met反义寡核苷酸下调了c- Met基因和PCNA蛋白的表达有关。     

HGF、c-Met、PCNA、CD34表达与胶质瘤恶性程度及预后因素的研究

目的研究肝细胞生长因子（HGF）、肝细胞生长闪子受体（c—Met）、增殖细胞核抗原（PCNA）、CD34在胶质瘤的表达，并结合多种临床因素探讨其与肿瘤恶性程度及预后的关系。方法用原位杂交法检测68例胶质瘤中HGF、c-MetmRNA的表达，用SP免疫组化技术检测PCNA、CD34在肿瘤巾的表达。并对可能影响预后的㈥素进行统计学分析。结果胶质瘤HGF、c-Met、PCNA的表达在高低级别组之间存在显著差异（P〈0．05）。Logistic逻辑回归单因素分析显示，患者年龄、切除范嗣、恶性程度、术前KPS评分、瘤周水肿、术后放疗、HGF表达、c-Met表达、PCNA表达、MVD对3年存活率有意义；多阕素分析表明，肿瘤的恶性程度、术前KPS评分、MVD、PCNA及c-Met基因的表达是影响预后的主要因素。结论HGF、c-Met、PCNA在胶质瘤中的表达与其恶性程度相关，肿瘤的恶性程度、术前KPS评分、MVD、PCNA及c-Met基因的表达可作为考察胶质瘤患者预后的重要指标。     

肝细胞生长因子在丝裂霉素C诱导胶质瘤细胞凋亡中的作用

目的探讨人类重组肝细胞生长因子(rhHGF)在丝裂霉素C(MMC)诱导人胶质瘤U251细胞凋亡中的作用。方法采用倒置相差显微镜和透射电镜观察细胞凋亡变化,MTT法检测细胞生长抑制率,TUNEL法和流式细胞术(FCM)研究U251细胞凋亡及细胞周期变化,分析不同浓度的rhHGF对低剂量MMC诱导U251细胞凋亡的影响。结果MMC组U251细胞出现细胞凋亡特有的形态学特征,其抑制率和凋亡指数(AI)分别为(43.7±3.2)%和(63.2±3.4)%,较不同浓度的rhHGF加MMC组和空白对照组显著增高(P<0.05)。随着rhHGF浓度的增加,细胞生长抑制率和凋亡指数呈递减趋势。FCM检测结果表明,MMC主要诱导G0/G1期细胞凋亡而出现凋亡峰,凋亡率25.86%;10和20μg/LrhHGF能特异性抑制MMC诱导U251细胞凋亡,凋亡率分别为15.14%和11.12%。结论rhHGF能抑制MMC诱导的U251细胞凋亡,可能与胶质瘤的复发、耐药等临床特性有关。     

SLC22A1828基因表达对胶质瘤细胞生长的抑制作用

我们利用基因转染技术,观察SLC22A18(solute carrier family 22,member 18)基因对胶质瘤U251细胞增殖的影响,探讨SLC22A18对胶质瘤的治疗价值. 一、材料和方法 1.材料:胶质瘤U251细胞购自中国典型培养物保藏中心,pcDNA3和pCDNA3.SLC22A18表达质粒由为武汉大学医学病毒学国家重点实验室构建.     

沉默Bcl-XL逆转人胶质瘤获得性SLC22A18的耐药

目的:探讨RNA干扰Bcl-XL(siRNA）在人胶质瘤获得性SLC22A18的耐药中的作用。方法:以Bcl-XL siRNA转染获得性SLC22A18耐药的人胶质瘤U251-SLC22A18/R细胞,用重组人SLC22A18蛋白处理,MTT法和流式细胞仪检测肿瘤细胞的存活率,免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Caspase-3和Caspase-8的表达情况。结果:Bcl-XL siRNA能够降低U251-SLC22A18/R细胞中Bcl-XL的表达,也能逆转其对SLC22A18的耐药。U251-SLC22A18/R细胞经过Bcl-XL siRNA和重组人SLC22A18蛋白共同处理4 h后细胞凋亡率>50%,细胞存活率<30%;而对照组和重组人SLC22A18蛋白处理组的细胞凋亡率和存活率无明显变化。经Bcl-XL siRNA与重组人SLC22A18蛋白联合处理后,U251-SLC22A18/R细胞中Caspase-3和Caspase-8均明显活化。结论:Bcl-XL siRNA能有效逆转人胶质瘤获得性SLC22A18的耐药,为治疗胶质瘤耐药提供一种新的思路。