脐血CIK细胞的体外增殖及对K562细胞的杀伤活性的实验研究

目的：探讨脐血CIK细胞体外增殖活性及时K562细胞的杀伤活性。方法：通过第1天在脐血淋巴细胞中加入IFN-γ，第2天再加入IL-2和CD3单抗进行细胞培养，就可获得名为多种细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induede killer cells)即脐血CIK细胞。用MTT法测定其抗肿瘤活性，台盼蓝拒染法计数细胞。结果：脐血CIK细胞及其培养上清抗K562细胞活性明显优于CD3AK细胞，短期培养后其增殖活性低于CD3AK细胞；但是G-CSF的加入可以提高CIK细胞的增殖活性。结论：脐血CIK细胞是一种有效的杀伤活化细胞，脐血在多种细胞因子适当组合的诱导下即可提高杀瘤活性，又能保留重建造血功能的作用。     

Oct4和CathepsinB在胶质瘤中的表达及意义

目的: 探讨转录因子Oct4及组织蛋白酶B(CathepsinB,CB)在人脑胶质瘤中的表达和预后的关系,并探讨Oct4的表达在脑胶质瘤发生发展中的意义及与肿瘤干细胞的关系.方法: 采用免疫组织化学S-P法检测51例人脑胶质瘤组织和8例正常人脑组织中Oct4,CB的表达.结果: Oct4及CB的表达在正常腩组织与胶质瘤之间以及胶质瘤的高低级别组间存在显著差异(P<0.05),并且在生存时间>2年组与生存时间≤2年组间差异显著(P<0.05),且两者的表达呈显著正相关(P<0.01).在单因素分析中,Oct4的表达与患者预后不良有关.结论: Oct4的高表达在胶质瘤的恶变进展,增殖和侵袭过程中起着重要作用,可作为胶质瘤恶性表型的有用指标;Oct4阳性表达与患者预后不良有关.Oct4可能与CB的活化密切相关,直接或间接促进脑胶质瘤的侵袭.     

Ezrin蛋白与E钙黏素在脑胶质瘤中的表达及意义

目的:研究埃兹蛋白(Ezrin)和E钙黏素(E-cadherin)在人脑胶质瘤中的表达及其意义。方法:采用SP免疫组化方法检测Ezrin、E-cadherin在40例不同级别胶质瘤及10例正常脑组织中的表达。结果:Ezrin蛋白、E-cadherin蛋白的阳性表达,在正常脑组织与胶质瘤组之间存在显著差异(P<0.01),在胶质瘤的高低级别组间也存在显著差异(P<0.05);并且它们在生存时间>2年组与生存时间≤2年组之间差异亦有显著性(P<0.01,P<0.05)。Ezrin的阳性表达随着肿瘤级别的升高而增高(P<0.05),E-cadherin的阳性表达随着肿瘤级别的升高而降低(P<0.05);Ezrin与E-cadherin的阳性表达呈明显负相关(rs=-0.685,P<0.01)。结论:Ezrin的过度表达和E-cadherin的表达下调在胶质瘤的侵袭及恶性进展中起着重要作用。Ezrin和E-cadherin的表达可能与胶质瘤患者的预后密切相关,提示可作为反映胶质瘤恶性程度与预后的指标。     

武汉地区236例正常人血清唾液酸水平测定及其对肿瘤的诊断意义

对武汉地区236例正常人和53例肿瘤患者进行了血清唾液酸水平的测定,发现正常男女性别之间,成人与儿童之间血清唾液酸水平无显著性差异(P>0.05),测得正常范围为0.64～1.86 mmol/L。肿瘤患者唾液酸水平为1.91±0.57 mmol/L,与正常人比较,有非常显著性差异(P<0.01)。本文对该检测方法的稳定性及其影响因素进行了讨论.     

RNA干扰抑制Cyr61表达对人脑胶质瘤细胞生物学行为的影响

目的 观察RNA干扰技术沉默Cyr61基因表达对人脑胶质瘤U251细胞生物学行为的影响.方法 针对Cyr61 mRNA的序列设计合成小干扰RNA(siRNA)的DNA模板,构建pRNAT-Cyr61重组质粒,转染人脑胶质瘤U251细胞;RT-PCR和Western blot检测其对U251细胞内源性Cyr61表达的影响;用噻唑蓝(MTT)比色法观察U251细胞体外增殖活性的变化;用Transwell 小室法检测U251细胞体外侵袭能力的改变;流式细胞仪检测U251细胞凋亡并用透射电镜观察凋亡后的细胞形态学变化.结果 pRNAT-Cyr61重组质粒在mRNA及蛋白水平分别显著抑制Cyi61基因表达,抑制率分别最高达到74.87%和78.23%;U251细胞的体外生长抑制率最高达68.15%,侵袭细胞数下降至(46.00±2.82)个;U251细胞凋亡率最高达53.16%.结论 pRNAT-Cyt61可抑制Cyr61在人脑胶质瘤U251细胞中的表达,并抑制细胞的增殖活性和侵袭能力,促进细胞凋亡.     

脑胶质瘤中胰岛素样生长因子Ⅰ型受体的表达及意义

目的：探讨胰岛素样生长因子Ⅰ型受体（IGF-IR）在正常脑组织和脑胶质瘤中的分布和表达,及其与核增殖指标MIB-1的相关性。方法：应用免疫组织化学S-P法,对55例胶质瘤组织和10例正常脑组织中IGF-IR、MIB-1表达情况进行检测分析。结果：脑胶质瘤组织中IGF-IR阳性率明显高于正常脑组织（P〈0.05）,并且随病理分级（WHO分级）的增高而增高,Ⅰ-Ⅱ级与Ⅲ-Ⅳ级的表达差异有显著性（P〈0.05）;胶质瘤组织中IGF-IR的表达与MIB-1的表达密切相关（P〈0.01,rs=0.735）。结论：IGF-IR在脑胶质瘤的发生发展起重要作用,能促进肿瘤细胞的增殖,有可能成为临床病理诊断脑胶质瘤和判断预后的一个重要指标。     

缺氧条件下胶质瘤U251细胞培养上清液对血管内皮细胞形成管样结构的影响

目的探讨缺氧条件下胶质瘤细胞培养上清液对血管生成的影响及其与尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）的关系。方法在常氧、缺氧条件下对人胶质瘤U251细胞进行培养,随后取其上清液作为内皮细胞ECV304的条件培养液,并分别加入uPA及其受体（uPAR）、组织型纤溶酶原激活物（tPA）的单克隆抗体、αvβ3和αvβ5整联蛋白特异性阻滞剂,观察内皮细胞管样结构形成变化;免疫细胞化学法检测ECV304中uPA、uPAR、NF—KB的表达。结果缺氧组ECV304形成管样结构数量较常氧组增加（P〈0．05）,且随上清液浓度增加差异更明显;uPA、uPAR单克隆抗体可抑制此促进作用,而tPA抗体、αvβ3和αvβ5则无此作用;缺氧培养U251的上清液能刺激ECV304中uPA、uPAR、NF—kB表达。结论在缺氧条件下培养胶质瘤细胞培养液的上清液对血管内皮细胞管样结构形成有促进作用,且与uPA、uPAR的表达有关,与tPA、αvβ3和αvβ5整联蛋白的关系不密切。     

陷阱受体3反义寡核苷酸对胶质瘤U251细胞凋亡的影响

目的 观察陷阱受体3(DcR3)反义核苷酸(ASODN)在胶质瘤细胞凋亡中的作用.方法 构建并挑选DcR3反义核苷酸,转染U251细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot方法 观察DcR3 mRNA和蛋白有无降低,流式细胞仪观察细胞凋亡的变化.结果 经1.2 μmol/L AS20DN处理的U251细胞可有效地降低DcR3 mRNA和蛋白表达,DcR3/β-actin比值分别为(12.4±3.1)%和(13.5±4.2)%,错义链组、脂质体组、对照组mRNA和蛋白分别为(68.8±4.5)%、(74.5±5.0)%、(71.3±6.4)%和(78.2±6.8)%、(79.8±4.5)%、(76.4±5.6)%,差异有统计学意义(P＜0.05),同时,传染DcR3反义核苷酸的U251细胞凋亡率为(42.9±13.1)%,明显高于错义链组(15.8±4.8)%、脂质体组(15.7±3.7)%和对照组(14.6±4.0)%,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 DcR3反义核苷酸可使U251细胞凋亡增多.     

异柠檬酸脱氢酶基因突变在神经胶质瘤发生发展中的作用

目的 观察异柠檬酸脱氢酶(IDH)基因突变在神经胶质瘤发生、发展中的作用.方法 提取89例胶质瘤蜡块标本DNA,设计合成引物,聚合酶链反应(PCR)扩增覆盖IDH1、IDH2基因4号外显子cDNA片段,正反双向DNA测序,观察基因突变频率和类型,分析基因型与临床表型的关系.结果 89例胶质瘤标本中有36例IDH1突变(40.4%);主要见于Ⅱ、Ⅲ级星形细胞瘤(61%～63%)、少突胶质细胞瘤(33%～66%)以及混合性胶质瘤(57%～80%);全部为4号外显子R132h杂合性、错义、点突变;各型胶质瘤组中突变型患者多较年轻.结论 高频率IDH基因特定催化活性区域碱基突变是胶质瘤发生、发展过程中一种重要的分子事件.

Abstract：

Objective To explore the possible role of isocitrate dehydrogenase (IDH) gene mutation in the genesis of glioma. Methods DNA was extracted from 89 glioma FFPE specimens. The primers were designed and synthetized. The exon 4 of IDH1 and IDH2 gene was screened and analyzed through polymerase chain reaction (PCR) and direct DNA sequencing. Results Altogether 36 IDH1 gene mutations were found (40. 4% ) , mainly from WHO Ⅱ and Ⅲ grade astrocytoma (61%-63% ) , oligodondroglioma (33%-66%) and oligoastrocytoma (57% -80%). All mutations were heterozygous, missense and point mutation, which were only found in codon 132 of IDH1. The patients with gene mutation were younger than those without muatation. Conclusion IDH1 gene mutation may play an important role in the tumorigenesis of glioma.     

异柠檬酸脱氢酶基因突变在神经胶质瘤发生发展中的作用

Objective To explore the possible role of isocitrate dehydrogenase (IDH) gene mutation in the genesis of glioma. Methods DNA was extracted from 89 glioma FFPE specimens. The primers were designed and synthetized. The exon 4 of IDH1 and IDH2 gene was screened and analyzed through polymerase chain reaction (PCR) and direct DNA sequencing. Results Altogether 36 IDH1 gene mutations were found (40. 4% ) , mainly from WHO Ⅱ and Ⅲ grade astrocytoma (61%-63% ) , oligodondroglioma (33%-66%) and oligoastrocytoma (57% -80%). All mutations were heterozygous, missense and point mutation, which were only found in codon 132 of IDH1. The patients with gene mutation were younger than those without muatation. Conclusion IDH1 gene mutation may play an important role in the tumorigenesis of glioma.