后路伤椎短节段固定治疗严重不稳的胸腰椎爆裂性骨折

目的探讨经后路伤椎短节段椎弓根内固定治疗严重不稳的胸腰椎爆裂性骨折的临床疗效。方法 2008年5月—2013年7月,采用后路伤椎短节段椎弓根内固定治疗52例严重不稳的胸腰椎爆裂性骨折。其中男33例,女19例;年龄21~56岁,平均37.9岁。致伤原因:高处坠落伤32例,交通事故伤16例,其他伤4例。载荷分享评分(load sharing classification,LSC)为7~9分,平均7.85分。累及节段:T_(11) 4例,T_(12) 19例,L_1 25例,L_2 4例。Frankel分级:A级2例,B级4例,C级8例,D级11例,E级27例。伤椎椎管占位24.2%~76.7%,平均47.1%。伤后至手术时间3~5 d,平均3.6 d。根据患者手术前后的伤椎Cobb角、伤椎前缘高度及Frankel分级变化评价临床疗效。结果手术时间为85~127 min,平均106.5 min;术中出血量为90~155 mL,平均137.6 mL。术后手术切口均Ⅰ期愈合。47例患者获随访,随访时间19~27个月,平均23.2个月。随访期间均未出现切口感染、椎弓根钉松动和内固定物断裂等并发症。患者术后即刻及末次随访时的伤椎Cobb角及伤椎前缘高度均较术前显著改善(P0.001);末次随访时较术后即刻有一定程度丢失,但比较差异无统计学意义(P0.05)。末次随访时Frankel分级均较术前提高1~2个等级,差异有统计学意义(Z=15.980,P=0.003)。结论经后路伤椎短节段椎弓根内固定治疗严重不稳的胸腰椎爆裂性骨折(LSC≥7分),能有效矫正后凸畸形、恢复椎体高度,并可避免前路的重建。     

闭孔神经切断术对激素性股骨头缺血性坏死骨内高压的干预作用

目的探讨闭孔神经切断术对激素性股骨头坏死(SANFH)的骨内压、局部组织血液流变功能改变的影响。方法选用健康成年家兔40只,随机分为对照组(9只)、模型组(15只)和治疗组(16只)。对照组每周皮下注射生理盐水,模型组和治疗组均采用每周皮下注射醋酸泼尼松龙的方法成功制备兔早期激素性股骨头坏死的动物模型。4周后,治疗组行闭孔神经切断术,分别选取实验前、激素注射后4周(术前)、8周3个时间点,每组行骨内压测定并随机处死3只进行股骨头大体观察、HE染色、透射电镜下观察。结果模型组和治疗组家兔实验后4、8周比对照组骨内压及股骨头空骨陷窝率增高(P<0.05);到8周时治疗组骨内压及股骨头空骨陷窝率下降,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论闭孔神经切断术可以降低激素性股骨头坏死骨内压,可有效地延缓或降低股骨头坏死的发生。     

胸腰椎骨折合并椎间盘损伤的研究进展

<正>胸腰椎骨折是临床常见损伤,约占所有脊柱骨折的40%～60%,通常伴发不同程度的椎间盘损伤~([1])。手术是胸腰椎骨折治疗的主要方法之一,但常存在术后矫正失败,矫正不足或甚至无法矫正等并发症,主要是因为对骨折复杂性的评估不足,往往忽略椎间盘损伤~([2、3])。椎体骨折中的骨性部分在进行手术治疗后通常完全愈合并恢复正常强度,但相对无血管的椎间盘来说,其愈合是不可预测的。目前常用的胸腰椎骨折的临床分型及评分系统,无论是从形态学上的Denis分型、载荷分享评分(load sharing classifi-     

胫骨平台骨折术后感染性骨缺损的分型和治疗策略

目的 探讨胫骨平台骨折术后不同程度感染性骨缺损治疗策略的选择。方法 回顾性分析2014年7月至2018年2月我院收治的45例胫骨平台骨折术后感染性骨缺损病人的临床资料,其中男32例,女13例,年龄为（39.42±12.09）岁（20~66岁）。腔洞性骨缺损16例,节段性骨缺损16例,波及关节面的缺损13例。Ⅰ型为胫骨平台内腔洞性骨缺损;Ⅱa型为胫骨平台下节段性（＜4 cm）并平台内腔洞性骨缺损;Ⅱb型胫骨平台下节段性（≥4 cm）并平台内腔洞性骨缺损;Ⅲa型胫骨平台波及关节面的缺损,但节段性缺损＜4 cm;Ⅲb型为胫骨平台波及关节面的缺损,但节段性缺损≥4 cm。所有病人一期彻底扩创取出内固定,二期按照胫骨平台骨缺损情况进行分型治疗。记录病人一期手术前、二期手术后3个月的炎性指标（白细胞计数、C-反应蛋白、红细胞沉降率和降钙素原）、膝关节活动度、美国特种外科医院（Hospital for Special Surgery,HSS）膝关节评分,及术后并发症、骨折愈合情况。结果 病人随访时间为（25.25±3.32）个月（17~56个月）,骨折愈合时间为（11.21±4.43）个月（8~17个月）,伤口愈合较满意,其中8例行腓肠肌肌瓣转移术覆盖伤口,10例行同侧大腿取皮局部植皮术,1例节段性骨缺损术后10个月骨折未见明显愈合,再次手术植骨后6个月得到愈合。随访2年未见伤口破溃及感染复发。在观察期间未见固定失败、再骨折、神经损伤、下肢深静脉血栓、肺栓塞等并发症的发生。二期术后3个月各炎性指标、膝关节活动度、HSS评分与一期术前比较,差异均有统计学意义（P均＜0.05）。末次随访时,病人患膝HSS评分为（89.23±5.35）分（82~94分）。结论 根据胫骨平台术后感染性骨缺损进行分型治疗,临床疗效良好,为胫骨平台术后感染性骨缺损诊疗提供了策略。     

热疗联合特异性沉默趋化因子受体4对骨肉瘤增殖和侵袭的影响

目的观察热疗联合特异性siRNA沉默趋化因子受体4(chemokine receptor 4,CXCR4)对骨肉瘤增殖和侵袭的影响。方法培养人骨肉瘤细胞株MG 63至对数生长期,接种于6孔板中,分为三组,空白组细胞不进行任何处理常规培养,control siRNA组以control siRNA转染细胞,CXCR4 siRNA组以CXCR4 siRNA转染细胞,采用Western blot检测各组CXCR4的表达变化,评估CXCR4 siRNA转染效能。细胞及体内实验设置control siRNA组(对照组)、热疗联合CXCR4 siRNA组(联合组)、CXCR4 siRNA组(沉默组)和热疗组,以CXCR4 siRNA转染沉默组和联合组的细胞,control siRNA转染对照组细胞,热疗组和联合组进行热疗处理。采用实时荧光定量聚合酶链反应(real time quantitative polymerase chain reaction,RT qPCR)和Western blot检测各组细胞CXCR4的表达变化。CCK 8法和Transwell侵袭实验检测转染后MG 63细胞的增殖能力和侵袭能力变化。流式细胞技术检测转染后MG 63细胞的周期变化。体外裸鼠成瘤实验和肿瘤生长曲线观察转染后MG 63细胞增殖和裸鼠骨肉瘤生长情况。结果CXCR4 siRNA可以有效沉默MG 63细胞中CXCR4蛋白的表达。热疗联合CXCR4 siRNA有效沉默MG 63细胞中CXCR4的表达并能抑制MG 63细胞增殖和侵袭,阻滞细胞周期于G0/G1期(P均<0.05)。体内实验结果显示,从第14天起,联合组裸鼠骨肉瘤体积逐渐小于对照组、沉默组和热疗组,差异有统计学意义(P均<0.05)。联合组的瘤重也低于对照组、沉默组和热疗组,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论热疗联合特异性沉默CXCR4抑制骨肉瘤的增殖和侵袭,可作为一个有效的骨肉瘤基因治疗新方法。     

HERG 基因调控 NF-κB 通道抑制骨肉瘤恶性表型的研究

目的：检测HERG（human ether-à-go-go-related gene）钾离子通道在骨肉瘤中的表达,并探索小干扰 RNA（siRNA）沉默 HERG 表达后对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响及可能的调控机制。方法采用反转录定量聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blotting 和免疫组织化学法检测骨肉瘤 MG-63细胞和组织中 HERG 的表达。实验分组为：HERG-siRNA 处理为实验组,control-siRNA 处理为对照组,未行任何处理为空白组。分别采用 CCK-8法、克隆形成、流式细胞仪和 Tunel 法检测 MG-63细胞增殖、生长和凋亡的变化。最后采用 Western blo-tting检测骨肉瘤细胞中核转录因子-κB（NF-κB）信号通路相关蛋白的表达水平。结果HERG 在骨肉瘤细胞和组织中异常高表达。CCK-8法结果示,实验组[（75．34±4．45）％]与对照组[（100．60±5．31）％]和空白组[（100．00±5．66）％]的细胞增殖水平相比,差异有统计学意义（t ＝3．64,P ＝0．007;t ＝3．43,P ＝0．009）。克隆形成结果示,实验组（134．30±11．82）与对照组（225．30±11．56）和空白组（232．80±12．21）的克隆形成数相比,差异有统计学意义（t ＝5．51,P ＝0．002;t ＝5．80,P ＝0．001）。流式细胞凋亡结果示,实验组[（28．10±2．21）％]与对照组[（9．36±2．42）％]和空白组[（10．92±2．51）％]的早期凋亡所占比例相比,差异有统计学意义（t ＝5．72,P ＝0．005;t ＝5．14,P ＝0．007）。Tunel 法结果示,实验组[（31．57±2．08）％]与对照组[（10．35±1．82）％]和空白组[（7．96±0．88）％]的凋亡指数相比,差异有统计学意义（t ＝7．69,P ＝0．002;t ＝10．48,P ＝0．001）。抑制 HERG 表达可明显下调 NF-κB 信号通路中细胞凋亡抑制蛋白-1（cIAP-1）、X 染色体连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）、Bcl-2和 Survivin 的活性,同时还下调磷酸化 NF-κB 抑制蛋白（IκB）α和 NF-κB p65的表达水平。结论HERG 在骨肉瘤中高表达,其通过调控 NF-κB 信号通路参与骨肉瘤细胞增殖和凋亡过程,有望成为骨肉瘤治疗和诊断的新靶点。     

骨肉瘤Kv1.5钾离子通道表达意义的研究

目的 研究表明,Kv1.5钾离子通道参与了多种肿瘤的生物学行为,但其在骨肉瘤中的表达和作用尚未明确.本研究拟检测Kv1.5钾离子通道在骨肉瘤中的表达,并探讨小干扰RNA(small interfering,siRNA)沉默Kv1.5表达后对骨肉瘤细胞增殖、周期和凋亡的影响及可能的调控机制.方法 实验分组,Kv1.5-siRNA转染细胞为实验组,control-siRNA转染细胞为对照组,未处理细胞为空白组.采用siRNA抑制Kv1.5的表达,并分别采用CCK-8法、克隆形成率、流式细胞仪和Tunel法检测MG-63细胞增殖、生长、周期和凋亡的变化.采用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测骨肉瘤细胞中周期和凋亡相关基因的表达水平.结果 Kv1.5在骨肉瘤细胞和组织中均异常高表达.CCK-8法检测结果示,Kv1.5-siRNA组细胞增殖水平为(53.87±5.91)％,与control-siRNA组的(99.14±7.87)％相比差异有统计学意义,Z=-3.49,P＜0.001;与空白组(100.00±8.37)％相比差异有统计学意义,Z=-3.57,P＜0.001.克隆形成实验结果示,Kv1.5-siRNA组克隆形成数为164.00±7.66,与control-siRNA组(223.20±11.41)相比,Z=-2.61,P=0.008;与空白组(228.20±12.62)相比,Z=-2.40,P=0.016.流式细胞周期结果示,Kv1.5-siRNA组G0/G1期所占比例为(68.81±0.55)％,与control-siRNA组(41.22±0.61)％相比,Z=-2.15,P=0.031;与空白组(40.79±0.52)％相比,Z=-2.31,P=0.029.流式细胞凋亡结果示,Kv1.5-siRNA组(30.23±1.74)％与control-siRNA组(14.10±1.27)％相比,Z=-2.04,P=0.039;与空白组(12.85±1.02)％相比,Z=-2.09,P=0.035.Tunel法结果示,Kv1.5-siRNA组凋亡指数为(35.20±3.14)％,与control-siRNA组(8.03±1.50)％相比,Z=-2.41,P=0.015;与空白组(8.22±1.32)％相比,Z=2.25,P=0.019.沉默Kv1.5表达可明显下调骨肉瘤中Cyclin A、Cyclin D1、Cyclin E、Bcl-2和Bik基因的表达,同时上调p21、p27、Bax、Bcl-XL和Caspase-3基因的表达,与对照组相比,P值均＜0.05.结论 Kv1.5钾离子通道参与了骨肉瘤细胞增殖、周期和凋亡的过程,其作用机制可能与调控周期依赖激酶和Bcl-2家族的相关因子有关.     

shRNA靶向沉默Eag 1钾通道对骨肉瘤细胞增殖、细胞周期及cyclin D1／E表达的影响

目的 探讨短发夹RNA（shRNA）靶向沉默Ether-go-go 1（Eag1）钾通道对骨肉瘤MG-63细胞增殖、细胞周期及cyclin D1／E表达的影响。 方法 使用成功构建的Ad5-Eag1-shRNA表达载体转染MG-63细胞（抑制组）,同时设转染无义序列（Ad5-Control-shRNA）的空转染组及不进行任何处理的对照组。采用逆转录聚合酶链式反应和Western blotting检测Ad5-Eag1-shRNA转染骨肉瘤MG-63细胞后的Eag1 mRNA和蛋白水平,分别采用CCK-8法和克隆形成实验检测各组的细胞增殖情况,流式细胞仪和Western blotting分别检测各组的细胞周期变化和细胞周期蛋白（cyclin D1和cyclin E）的蛋白水平。建立裸鼠骨肉瘤异种移植模型并测量各组裸鼠肿瘤体积的变化情况。结果 抑制组的Eag1 mRNA和蛋白水平均低于空转染组和对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）;与其余两组相比,抑制组的细胞增殖、克隆形成数、S期细胞比例及细胞周期蛋白水平均降低,而G0／G1期细胞比例升高,以上差异均有统计学意义（P＜0.05）。抑制组裸鼠的瘤体积小于空转染组和对照组（P＜0.05）。结论 通过shRNA抑制Eag1基因表达可抑制MG-63细胞的增殖并诱导G0／G1期阻滞,可能与调控cyclin D1／E通路有关,有望成为骨肉瘤治疗和诊断的新靶点。     

Kv1.3钾通道在骨肉瘤中的表达及作用研究

目的 探讨特异性短发卡RNA（shRNA）抑制Kv1.3钾通道对骨肉瘤MG-63细胞增殖和凋亡的影响。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应、Western blotting和免疫组化检测骨肉瘤MG-63细胞中Kv1.3钾通道的表达,并分别采用CCK-8法、裸鼠骨肉瘤异种移植模型和流式细胞仪检测MG-63细胞增殖、生长和凋亡的变化,采用Western blotting检测MG-63细胞中多聚ADP核糖聚合酶（PARP）和caspase-3的表达水平。结果Kv1.3钾通道在骨肉瘤细胞中异常高表达。沉默Kv1.3钾通道的Ad5-Kv1.3-shRNA能从体内外有效地抑制MG-63细胞增殖并促进其早期凋亡。沉默Kv1.3钾通道可明显诱导细胞凋亡相关蛋白caspase-3和PARP的裂解。结论Kv1.3钾通道参与骨肉瘤细胞增殖和凋亡的过程,有望成为骨肉瘤治疗及诊断的新靶点基因。