细胞因子处理联合B7—1基因转染制备有效的肝癌疫苗

在体外用ＩＦＮ－γ和ＴＮＦ－α等细胞因子处理的Ｂ７－１表达阳性的Ｈｅｐａｌ－６，观察其对小鼠肝癌表面ＭＨＣ Ｃｌａｓｓ Ｉ和ＩＣＡＭ－１表达的调节作用和对体内外抗肿瘤免疫反应的影响。结果发现：单独Ｂ７－１基因转染的Ｈｅｐａｌ－６的致癌性消失，但仅能诱导部分细胞毒性和部分保护性免疫反应，而Ｂ７－１基因转染与细胞因子处理联合应用则能诱导强的细胞毒杀伤活性和完全的抗Ｈｅｐａｌ－６保护性免疫反应。结论Ｂ７－     

腺病毒介导的小鼠内皮抑素治疗胃癌的研究

目的:探讨人血管生成素-1(angiopoietin-1,Ang-1)对人脐静脉内皮细胞(human umbilican vein endothelia cell,HUVEC)增殖和凋亡的影响,以进一步研究其生物学作用及其在肿瘤发生中的作用机制.方法:构建pcDNA3.1-V5-HisC-Ang-1真核表达载体,并瞬时转染293细胞;取新生儿脐带经胶原酶消化等方法分离培养HUVEC;分别通过MTT比色和细胞计数法,分析Ang-1瞬时转染上清对HUVEC增殖的影响;通过流式细胞仪分析在血浆饥饿实验条件下,Ang-1对HUVEC凋亡的影响.结果:成功克隆了Ang-1基因,构建了其正义真核表达载体,并在293细胞中瞬时表达;成功进行了HUVEC的原代分离及传代培养;MTT法检测HUVEC增殖结果:只加培养液组、加空载体转染上清组、加Ang-1转染上清组HUVEC OD490值分别为0.36±0.11,0.40±0.03,0.68±0.10(P＜0.05);细胞计数法检测结果依次为:(10.13±2.06)×104,(8.7±1.73)×104,(15.03±1.98)×104(P＜0.05).流式细胞仪检测HUVEC凋亡率依次为:21%,19%和6%.结论:Ang-1能显著促进血管内皮细胞体外增殖,抑制血浆饥饿时HUVEC的凋亡.     

特异性增殖型腺病毒CNHK200-mIFN-γ表达mIFN-γ及体外肿瘤杀伤实验

目的:构建增殖型腺病毒CNHK200-mIFN-γ和增殖缺陷型腺病毒AdEasy-mIFN-γ,比较两者在肿瘤细胞中表达mIFN-γ蛋白的能力以及CNHK200-mIFN-γ,ONYX-015及野生型腺病毒Ad5在正常及肿瘤细胞中的增殖力,进一步观察其抗瘤效果.方法:以病毒增殖试验检测病毒在细胞中的增殖能力;透射电镜观察CNHK200-mIFN-γ在Hep3B细胞中的增殖复制;检测病毒感染肿瘤细胞后mIFN-γ的表达;CPE实验观察增殖病毒对细胞的杀伤效应.结果:CNHK200-mIFN-γ和ONYX-015仅在肿瘤细胞中增殖,且前者增殖力较强.CNHK200-mIFN-γ在肿瘤细胞中表达mIFN-γ,且表达量与病毒增殖密切相关,而AdEasymIFN-γ在肿瘤细胞中的mIFN-γ表达几乎不能测到.ONYX-015与CNHK200-mIFN-γ对正常的细胞无杀伤性,但能有效地杀伤癌细胞.结论:外源基因mIFN-γ的插人没有改变增殖病毒在肿瘤细胞中选择性增殖的特性.增殖型腺病毒CNHK200-mIFN-γ具有良好的肿瘤选择性及增殖性,且可以有效表达mIFN-γ,并且有效杀伤癌细胞,显示其良好的临床应用前景.     

肿瘤端粒酶靶向腺病毒载体的表达活性

目的　构建针对端粒酶阳性肿瘤的特异性腺病毒载体 ,研究其介导目的基因在肿瘤细胞内的定向表达能力。方法　将端粒酶逆转录酶 (hTERT )启动子克隆入质粒 pDC3 12的多克隆位点构成外源基因表达盒 ,在基因表达盒上下游分别插入 1个绝缘子序列 ,构建针对端粒酶阳性肿瘤的特异性腺病毒载体pSG TPE ;采用Luciferase报告基因进行hTERT启动子的活性分析 ;以pSG TPE携带绿色荧光蛋白 (EGFP)报告基因 ,重组腺病毒AdTPE EGFP ,观察其介导EGFP在肿瘤细胞内的定向表达能力 ,并与CMV启动子控制的腺病毒AdCMV EGFP作对照。结果　hTERT启动子在正常细胞内几乎没有活性 ,而在肿瘤细胞内的活性与SV 40启动子相近。腺病毒AdTPE EGFP能介导EGFP在肿瘤细胞内定向而稳定表达 ,在正常细胞内不表达 ,而对照腺病毒AdCMV EGFP在肿瘤和正常细胞内均表达EGFP。结论　靶向端粒酶阳性肿瘤的腺病毒载体 pSG TPE ,不但提高了对基因表达调控的特异性 ,而且降低了对正常细胞毒性作用。绝缘子的应用隔断了外源基因表达盒和病毒基因表达调控序列之间的互相干扰 ,进一步提高目的基因的表达效率。该载体对肿瘤的靶向基因治疗具有重要的应用价值。     

DETECTION OF HUMAN TELOMERASE ACTIVITY BY TELOMERASE TRAP-ELISA ASSAY

ＤＥＴＥＣＴＩＯＮＯＦＨＵＭＡＮＴＥＬＯＭＥＲＡＳＥＡＣＴＩＶＩＴＹＢＹＴＥＬＯＭＥＲＡＳＥＴＲＡＰ—ＥＬＩＳＡＡＳＳＡＹＷｅｉＬｉｘｉｎ卫立辛ＷｕＭｅｎｇｃｈａｏ吴孟超ＹａｎＺｈｅｎｌｉｎ阎振林ＳｈｅｎＦｅｎｇ沈锋ＸｉｅＴｉａｎｐｅｉ谢天培Ｑｉａ...     

甲胎蛋白糖链异质体检测方法的探讨

甲胎蛋白(AFP)是一种单肽链糖蛋白,其糖链主要由甘露糖、半乳糖、N-乙酰葡萄糖和唾液酸以寡聚糖形式组成。近来人们利用不同组织来源的AFP糖链结构的差异,应用植物凝集素分离AFP 异质体,对肝癌进行鉴别诊断和早期诊断。我所曾建立简便,高度敏感的亲和交叉免疫电泳放射自显影法检测AFP 糖链异质体。经过多年的实践取得一定经验,现总结如下。     

高效毛细管电泳法测定利多卡因代谢产物单乙基甘氨酰二甲苯胺

目的 :建立一种测定利多卡因代谢产物单乙基甘氨酰二甲苯胺 (MEGX)含量的高效毛细管电泳法。方法 :用50mmol/L硼酸缓冲液 (pH =8.8)为电泳电解液 ,电压 1 2kV ,运行电流 1 8.8～ 2 3 .2 μA ,检测波长 2 1 4nm ,有效毛细管长度 50cm ,管径 50 μm ,氨茶碱为内标 ,展开 1 2min。 8只昆明种小白鼠腹腔注射 0 .2 %利多卡因 4 0mg/kg ,用本法测定其 5h尿液中MEGX累积排泄量。结果 :MEGX迁移时间 7.8min ,氨茶碱迁移时间 1 0 .7min。MEGX含量为 0 .0 62～1 .0mg/ml时 ,其浓度与色谱峰面积线性关系良好 ,r =0 .9991 ,日内、日间变异系数均小于 7.8% ,回收率为98.4 %～ 1 0 1 .6% ,常用 3 0种药物对其无干扰。 8只小鼠MEGX累积排泄量为 ( 2 95.2± 55.2 ) μg ,其中游离型MEGX为 4 4.7% ,结合型为 55.3 %。结论 :该方法简单、快速、灵敏 ,特异性和重现性良好 ,具有较强实用价值。     

识别肿瘤血管内皮细胞的嵌合性T细胞受体的构建与鉴定

近年来发展了一种新的肿瘤免疫治疗策略 ,即将能够特异性识别并结合肿瘤细胞表面抗原、或受体的抗体或配体 ,与T细胞受体胞内成分融合成嵌合性 T细胞受体 (chimeric Tcell recepter,c TCR) ,赋予 T细胞持久的、预先决定的新配体识别特异性 ,转染 c TCR的细胞毒 T淋巴细胞 (cytotoxic Tlym phocyte,CTL )选择性地靶向和杀伤肿瘤细胞 [1 ] 。鉴于血管内皮生长因子受体在恶性肿瘤组织和正常组织中表达完全不同 [2 ,3] ,本研究采用重叠延伸技术构建一种能识别肿瘤血管内皮细胞的 c TCR,为进一步研究其功能提供实验基础。1　材料和方法1.…     

原发性肝癌组织及血清中豌豆凝集素结合型甲胎蛋白含量对照研究

作者检测了25例原发性肝癌、非癌肝组织以及外周血中豌豆凝集素结合型甲胎蛋白(AFP-R-P)含量,分别为41±26％、30±27％和36±25％。≤3cm、包膜完整、没有向周围肝组织浸润性生长、无血管癌栓的肝癌组织中AFP-R-P含量较低,患者术后生存期较长。结果提示,AFP-R-P主要由恶性行为较高的肝癌细胞所分泌,它直接或经血路向周围肝组织弥散,同时进入外周血循环,使血清中AFP-R-P含量升高。     

p53基因及CAR受体对ONYX-015肿瘤杀伤作用的影响

目的：利用肿瘤特异性增殖型腺病毒ONYX-015分别感染具有柯萨奇病毒和腺病毒联合受体（CAR）水平正常、p53正常或突变的,以及CAR水平低下、p53突变的肿瘤细胞株,研究ONYX-015对这些肿瘤细胞的特异性增殖及杀伤能力。方法：以正常的肝细胞株L02作为对照,用细胞病变效应（CPE）实验观察ONYX-015对细胞的选择性杀伤效应;病毒增殖实验检测野生型腺病毒（Ad5）、ONYX-015在多种肿瘤细胞中的增殖能力。结果：ONYX-015对正常的肝细胞L02无杀伤性,但能够有效地杀伤p53突变的肝癌细胞Hep3B、p53正常的肝癌细胞HepG2及肺癌细胞A549,不能杀伤p53突变的人乳腺癌细胞株MDA—MB-231。在CAR受体水平正常的癌细胞株Hep3B、HepG2和A549中,Ad5和ONYX-015均可增殖。在CAR受体水平低下、p53突变的人乳腺癌细胞株MDA—MB-231中,两种病毒均不增殖。结论：CAR受体对ONYX-015的增殖力起着至关重要的作用。在CAR受体水平正常的前提下,无论肿瘤细胞的p53基因正常与否,ONYX-015均可以有效增殖并杀伤细胞;相反,如果CAR受体水平低下,即使该种肿瘤细胞p53基因突变,ONYX-015在该细胞中的增殖力也会受到限制。ONYX-015不杀伤CAR受体及p53基因均正常的正常肝细胞。