人鼻咽癌干细胞微球体培养并鉴定其生物特性

目的：目前分离和鉴定鼻咽癌干细胞的方法仍不成熟。探索鼻咽癌细胞系干细胞微球体培养方法,并对CNE-2细胞微球体是否具有肿瘤干细胞生物特性（干性）进行鉴定。方法人鼻咽癌细胞CNE2、C666-1细胞在含生长因子的无血清培养基（ serum-free medium, SFM）中悬浮培养。流式细胞术、Transwell小室实验、裸鼠成瘤实验、分别检测CNE2贴壁细胞（ CNE2 monolayer, CNE2-MN）及CNE2微球体细胞（ CNE2 sphere cells, CNE2-SC） CD133＋标记细胞比例,体外侵袭能力、体内成瘤能力;CNE2-SC在含血清培养基中贴壁培养观察其分化能力;实时荧光定量PCR分析CNE2-MN及CNE2-SC相关干性基因Bmi-1、Oct4、Twist1RNA的表达。结果2种细胞系均能在特殊配制的SFM中形成可以稳定传代的微球体, SFM新鲜配制、用细胞分离剂Accutase替代胰酶传代以及保持细胞的悬浮状态均有利于微球体的形成和增殖;在含血清培养基中培养能贴壁分化成CNE2-MN而无明显差异;CNE2-SC中CD133＋细胞比例（98．79％）显著高于CNE2-MN（0．98％）,差异有统计学意义（ P＜0．01）;与CNE2-MN相比,CNE2-SC高表达干细胞相关基因Bmi-1、Oct4、Twist1及EMT标志物N-cadherin、Vimentin。 Transwell小室实验示CNE2-SC与CNE2-MN的穿膜细胞数分别为（122±6）个／视野及（36±7）个／视野（P＜0．05）;裸鼠成瘤实验示1×104个CNE2-SC 3周内即能成瘤,成瘤率33．3％,而CNE2-MN不能成瘤,1×105个CNE2-SC与CNE2-MN成瘤体积比为（1．750±0．613）cm3 vs （0．457±0．291）cm3（P＜0．05）,而1×106个以上2种细胞成瘤体积比为（2．332±0．549）cm3 vs （0．669±0．278）cm3（P＜0．01）。结论利用特制SFM悬浮培养法可得到鼻咽癌CNE2-SC,这种微球体富集了肿瘤干细胞,将为后续鼻咽癌干细胞研究打下基础。     

2-甲氧基雌二醇对鼻咽癌CNE-2干细胞体外增殖、迁移及放疗敏感性的影响

目的 探讨2-甲氧基雌二醇(2-methoxyestradiol,2-MeOE2)对人鼻咽癌CNE-2干细胞(nasopharyngeal cancer stem cells,NPCSCs)增殖、迁移及放疗敏感性的影响及其可能机制.方法 收集本课题组前期富集并已鉴定的鼻咽癌CNE-2干细胞,Western blot检测亲本CNE-2细胞及NPCSCs乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)和核转录因子(NF-κB p65)的蛋白表达,克隆形成实验检测两组细胞的放射敏感性.按2-MeOE2浓度分为3组,分别用0、4、8μmol/L 2-MeOE2处理鼻咽癌干细胞,倒置显微镜观察细胞形态变化,CCK-8及Transwell检测细胞增殖及迁移能力,再联合X射线(0、2、4、8 Gy)照射,克隆形成实验检测3组细胞放疗敏感性;同时用4 μmol/L 2-MeOE2处理鼻咽癌干细胞后不同时间(0、24、48 h)提取蛋白,Western blot检测不同浓度2-MeOE2处理以及4μmol/L 2-MeOE2处理后0、24、48 h提取的干细胞HIF-1α和NF-κB p65蛋白表达.结果 相对于亲本CNE-2细胞,干细胞HIF-1 α和NF-κB p65蛋白表达明显增高(P均＜0.01),X射线辐射后干细胞各放射学参数D0、Dq、N及SF2均高于亲本CNE-2细胞.0、4、8μmol/L 2-MeOE2处理干细胞后,随浓度增加,致密球状生长的干细胞微球体逐渐变得离散,干细胞增殖活力降低(P＜0.01);迁移能力降低(P＜0.01);放疗敏感性增高,4 μmol/L2-MeOE2组放射增敏比(sensitivity enhancement ratio,SER)为1.19,8μmol/L 2-MeOE2组SER为1.39;HIF-1 α、NF-κB p65蛋白表达降低(P＜0.01),呈浓度依赖性.2-MeOE2(4μmol/L)处理干细胞后随时间延长HIF-1α、NF-κB p65蛋白表达明显降低(P＜0.01),呈时间依赖性.结论 相对于亲本CNE-2细胞,干细胞高表达HIF-1α和NF-κB p65,并且对放疗具有较低的敏感性.2-MeOE2能有效抑制鼻咽癌CNE-2干细胞增殖、迁移并增加其放疗敏感性,其机制可能为2-MeOE2抑制HIF-1α和NF-κB p65蛋白表达.     

影像增强剂对盆腔肿瘤术后调强放疗剂量计算的影响

目的:研究在盆腔肿瘤术后放疗中,影像增强剂对调强计划剂量计算的影响,并评价其临床意义.方法:本研究回顾分析了10例盆腔肿瘤患者(其中直肠癌6例,宫颈癌3例,子宫内膜癌1例).每例患者于相同体位先后做平扫和增强两套CT,然后将图像传入Pinncle3 8.0治疗计划系统.分别在增强CT上勾画靶区、危及器官和设计调强计划.并将所有勾画轮廓及计划复制到平扫CT.使用配对设计符号秩检验对比两套CT 中计划靶区和危及器官剂量分布.结果:对于PTV,平扫CT计划中计算得到的平均剂量、D95、D5(95%、5%体积PTV接受的最小剂量)和适形指数均显著高于增强CT计划,P<0.05.对于危及器官,平扫CT计划中计算得到的膀胱平均剂量和膀胱V40(接受≥40 Gy剂量的膀胱百分体积)均显著高于增强CT计划,P<0.05.但它们的差别均<0.5%.两套CT中,其他靶区或危及器官的剂量学指标差异均无统计学意义.结论:在临床放疗中,影像增强剂对盆腔肿瘤术后调强放疗剂量计算的影响是可以忽略的.     

课程思政融入放疗虚拟仿真实验系统中的教学实践与探索

课程思政是实现立德树人和高校“三全育人”的根本目标。由于放射治疗(放疗)实验的高危险性，不可避免地需要接触到一些射线，学生和环境安全尚无法得到保障，限制了部分实验的开展，同时由于肿瘤患者心理负担重，情绪低落，需要在接受放疗的同时给予人文关怀。该文将自主研发的放疗虚拟仿真实验系统与课程思政有机结合，将肿瘤放疗相关的思政元素融入虚拟仿真实验教学课程中。在放疗虚拟仿真系统中，设置了课程思政模块，内容包括新闻专题、图片、放疗常识、解疑题等方面的训练。教师可以实时更新思想政治内容，设定思想政治目标、思想政治内容，优化思想政治评价体系，让学生在模拟实验训练中树立正确的世界观、人生观和价值观，激发学生为祖国奋斗，不怕吃苦的爱国情怀，最终实现肿瘤放疗技术的“知识传授”与“价值引领”双重目的。     

放射治疗技术学虚拟仿真平台的开发与应用研究

为了解决放射治疗技术学课程教学资源有限以及实习场所高危险性而难以实现教学目标的难题，利用现代技术构建放射治疗技术虚拟仿真实验教学平台，合理分配课时应用于教学。通过对学生进行问卷调查和统计分析学生成绩后结果显示，该平台具有高度的仿真效果；118份有效问卷中，有72.0%学生认为虚拟仿真实验对理论知识的理解有很大帮助；91.5%学生认为虚拟仿真实验对临床常见放疗技术的掌握有很大帮助；90.7%的学生认为学习积极性明显提高，88.1%的学生对该教学方法非常满意；同时，使用虚拟仿真平台学习的学生成绩[好24(75.0%),中8(25.0%),差0(0.0%)]高于没有使用该平台学习的学生成绩[好42(40.4%),中58(55.8%),差4(3.8%)],差异具有统计学意义(P<0.05)。综上，该实验平台的使用很好地支撑了课堂教学，更加容易地实现教学目标，同时提供了安全的实习平台，为各个高校放射治疗技术学课程教学的优化设置提供参考。