抗菌肽Maximin衍生物的体外杀精效果研究

目的比较抗菌肽Maximin衍生物(M1~M19)的体外杀精效果和细胞毒性作用,筛选有进一步研究价值的候选体外杀精剂。方法利用Sander-Cramer方法评价抗菌肽的体外杀精效果;CCK-8试剂盒测定抗菌肽对Hela-229的细胞毒性,筛选出具有较强杀精作用和低细胞毒性的抗菌肽。结果 19种抗菌肽衍生物中,M1、M7、M11、M15和M17五种抗菌肽在2 000mg/L时均能完全制动精子,其中100%制动精子的最低浓度EC100分别是:M7=M11=2 000mg/L,M1=M15=M17=1 500mg/L;利用Hela-229细胞分析细胞毒性时,M11的细胞毒性明显低于其他4种抗菌肽,表现出较高的安全性。结论对19种抗菌肽衍生物的体外研究表明,抗菌肽M11具有较强的杀精作用,且细胞毒性低,有望成为体外杀精剂的候选药物。     

卵巢癌患者血清中肿瘤特异标志物的鉴定研究

目的:通过分析卵巢癌患者血清中的蛋白质组分,寻找可能的肿瘤相关蛋白并对该蛋白鉴定,以期确定其作为卵巢癌血清学诊断的特异标志物。方法:采用双向凝胶电泳方法分离6例卵巢癌患者及2例正常健康妇女血清总蛋白,经考马斯亮蓝染色后对比找出差异蛋白斑点,该蛋白斑点经蛋白酶水解后进行液质联用串联质谱(LC-MS/MS)分析,用SEQUEST搜索软件查询Finngan公司提供的FASTA格式蛋白序列数据库。采用WesternBlotting、ELISA、斑点印迹及亲和层析等方法对目标蛋白作进一步的分析。结果:经双向电泳分离,卵巢癌患者血清中有3-4个组分显示含量高于正常健康妇女血清,选其中最明显的一个差异斑点进行质谱分析,对库检索确定为结合珠蛋白。进一步的分析证实,卵巢癌患者血清中结合珠蛋白总含量有高于正常健康妇女的趋势。此外,通过凝集素斑点印迹法检测发现,岩藻糖基化结合珠蛋白成分明显增加是该蛋白总量增高的主要特性。结论:检测血清结合珠蛋白总量以及特异的岩藻糖基化组分可能成为卵巢癌的血清诊断指标之一,可与其它检测方法相结合,提高卵巢癌早期诊断的有效性。     

子宫中粘蛋白MUC1的研究进展

正常生理情况下粘蛋白MUC1在子宫内膜容受期的丢失受类固醇激素、胚泡的影响,并发现一些MUC1脱落酶.MUC1在子宫调节胚泡植入中发挥抑制和促进两方面作用.该蛋白异常表达可致女性不孕.子宫恶性肿瘤时,发现MUC1和雌激素受体(ER)α相关.肿瘤相关MUC1比正常MUC1在结构上显示明显改变.MUC1可以和参与肿瘤转化和细胞黏附的各种蛋白相互作用.子宫内膜癌MUC1表达丢失和预后好相关.     

大鼠精子发生过程中热休克蛋白70-2特异表达的研究

目的运用蛋白质组学方法,寻找大鼠精子发生相关蛋白质,找到目标蛋白质后,进一步用免疫组织化学方法做定位研究。方法用重力沉降法(STAPUT法)从9 d龄雄性大鼠睾丸中分离出A型精原细胞,从成年的雄性大鼠睾丸中分离出粗线期精母细胞、圆形精子细胞。分别提取这3种细胞的总蛋白质,进行双向电泳。对所得双向电泳凝胶扫描,分析并找出差异蛋白质。对挑选出的差异蛋白质做质谱分析,发现在这3种不同细胞的表达上有明显差异的蛋白。进一步做睾丸免疫组织化学组织定位、定量研究。结果双向电泳结果显示,HSP70-2在粗线期精母细胞、圆形精子细胞中表达量较高, 在A型精原细胞则表达量极少。HSP70—2在粗线期精母细胞中表达量最大。用HSP70—2抗体对大鼠睾丸组织切片行免疫组织化学研究,发现粗线期精母细胞、Sertoli细胞、Leydig细胞有阳性颗粒反应。HSP70—2主要表达于细胞质。结论 HSP70—2在精子发生过程中有明显的差异表达,推测其对精子发生起重要调节作用。     

Identification of an 80 K Dalton Human Sperm Antigen

Monoclonal antibodies raised against human sperm were used as a probe to look for specific human sperm antigen. By “ Western blotting” ,an 80 K dalton molecular weight protein was recognized by the monoclonal antibody, 21-2-4. By the SDS polyacrylamide gel electrophoresis, the 80 Kd was the major band of deoxycholate extract in which this protein could be isolated from other components of sperm by eleetro-elution from the gel slab. For the purpose of evaluating the function of 80 Kd in fertilization, the rabbit anti-80 Kd polyclonal antibodies were produced and immunoassays were performed. The TAT result showed that the agglutination in patterns of tail to tail and head to head were induced by incubating human sperm with rabbit anti-8OKd antiserum. The SIT result showed that the human sperm motility was strongly inhibited by rabbit anti-80 Kd antiserum. The immanofluorescence staining of human sperm incubated with rabbit anti-80 Kd antiserum showed very strong fluorescence on postaerosome and tail. These results suggest that 80 Kd is a specific sperm antigen which locates on the surface of human sperm and possibly plays an important role in fertilization.     

乙酰唑胺对表达水孔蛋白1的非洲爪蟾卵母细胞转运水功能的影响

目的观察乙酰唑胺对水孔蛋白1(AQP1)水转运功能的影响。方法将AQP1 cRNA 10 ng注射入非洲爪蟾卵母细胞,观察并记录给予1×10^-7～1×10^-5 mol·L^-1乙酰唑胺后卵母细胞在低渗溶液中的膨胀率,并计算其渗透水通透性(Pf)的变化。结果非洲爪蟾卵母细胞表达AQP1蛋白后,在低渗溶液中迅速膨胀,Pf值显著增加至1.82×10^-2 cm·s^-1,而注射水的阴性对照仅为0.25×10^-2 cm·s^-1。AQP抑制剂HgCl₂使Pf值降至0.64×10^-2 cm·s^-1;1×10^-7～1×10^-5 mol·L^-1乙酰唑胺处理后,Pf值分别降至1.43,1.24和0.93×10^-2 cm·s^-1。结论乙酰唑胺剂量依赖性地降低AQP1介导的渗透水通透性,抑制AQP1转运水的功能。     

附睾特异蛋白与精子功能的研究进展

鉴定精子特异蛋白的目的是阐明其在生殖过程中的作用,将其作为有效调控的靶点。哺乳动物的精子在睾丸的曲细精管内生成后,虽然形态上已成为蝌蚪状,但并不具备运动和识别卵子并使其受精的能力。精子必须经过附睾内的加工才能成熟,即精子的附睾成熟。该过程主要是修饰精子膜表面的蛋白,随着精子在附睾管腔中的运行,某些蛋白被移除或结合其上,还有经历糖基化或磷酸化等修饰。因此,对附睾中蛋白的鉴定研究,特别是附睾特异合成的蛋白,始终是揭示精子功能的重要切入点之一。综述近年对附睾特异蛋白参与精子成熟以及保护精子的较系统的研究。     

前列腺特异性膜抗原在前列腺癌患者外周血和组织中的表达及意义

目的探讨前列腺特异性膜抗原（PSMA）在前列腺癌患者（PCa）外周血和组织中的表达及其与肿瘤病理分级和临床分期之间的关系。方法采用RT-PCR方法检测前列腺特异性膜抗原（PSMA）在前列腺癌和良性增生患者外周血清中的表达;采用免疫组化法观察PSMA在前列腺不同病变组织中的表达。前列腺癌28例,前列腺上皮内瘤（PIN）7例,良性前列腺增生（BPH）30例。结果血清学检测显示PSMA mRNA在前列腺癌和良性病变组（包括PIN和BPH）患者外周血中阳性率分别为67.9%和8.1%,两者差异具有显著性（P〈0.01）。在局限性癌、局部进展性癌和远处转移癌患者外周血肿瘤细胞中,PSMA mRNA的阳性率分别为58.3%、66.7%和85.7%,随前列腺癌临床分期的进展而逐渐递增（P〈0.05）。在高分化、中分化和低分化前列腺癌中,PSMA mRNA的阳性率分别为87.5%、62.5%和50%,肿瘤分化越差,其阳性率越低（P〈0.05）。组织学检测显示PSMA在PCa、PIN、BPH三种不同前列腺病变组织中的阳性率分别为60.7%、28.6%和20.0%（P〈0.05）,在高、中、低分化前列腺癌组织中PSMA的阳性率分别为100.0%、50.0%和25.0%,与肿瘤Gleason评分之间呈负相关（P〈0.05）。在局限性癌、局部进展性癌和远处转移癌患者肿瘤组织中,PSMA的阳性率分别为58.3%（7/12）、77.8%（7/9）和42.9%（3/7）（P〉0.05）。结论PSMA在前列腺癌组织中明显高表达,并且表达量与前列腺癌临床分期和分化程度（组织学分级）密切相关;检测PSMA可能对前列腺癌诊断、治疗方案的选择及预后评估具有重要价值。     

80K道尔顿的人精子抗原的鉴定

<正> 本文以抗人精子单克隆抗体作为探针进行人精子特异抗原的寻找工作。用转移免疫印迹法(Western blotting),已由单抗21-2-4识别出一分子量为80K道尔顿的精子蛋白。用人精子去氧胆酸钠提取物走的SDS-聚丙烯酰胺电泳显示80kd是提取物中的主要成分。电泳后将含有8Okd的胶条切下来,再用电泳洗脱法(Electro-elution)可将其回收纯化。为了评价80kd在生殖过程中     

β-肌动蛋白在大鼠精子发生过程中的特殊表达

目的:寻找大鼠精子发生相关蛋白,研究β-肌动蛋白在大鼠睾丸组织的表达和分布。方法:用牛血清白蛋白梯度沉降(STAPUT)法从9日龄雄性SD大鼠睾丸中分离出A型精原细胞,从成年雄性大鼠睾丸中分离出粗线期精母细胞、圆形精子细胞;分别提取这3种细胞的总蛋白,进行双向电泳;对所得到的双向电泳图谱用Im ageM aster2D E lite图像分析软件分析,找出差异蛋白,对挑选出的差异蛋白做质谱分析。进一步用β-肌动蛋白抗体做免疫组化的睾丸组织定位研究。结果:在双向电泳图谱中,β-肌动蛋白在A型精原细胞、粗线期精母细胞中表达量较高,在圆形精子细胞中则表达量极少。免疫组化研究发现:A型精原细胞、粗线期精母细胞有阳性颗粒反应,圆形精子细胞则无阳性颗粒反应;在接近成熟的精子细胞中,呈现极强的阳性颗粒反应,并且越接近排放期的精子细胞,阳性反应越强。在接近成熟的精子头部,阳性颗粒反应最强。β-肌动蛋白主要在精原细胞和精母细胞的细胞质中表达;在接近成熟的精子细胞中主要表达在细胞核。结论:β-肌动蛋白在精子发生过程中有明显的阶段差异表达,推测其对精子发生起重要调节作用。