三七总皂苷对自然衰老大鼠睾丸炎症反应和生殖细胞凋亡的影响北大核心CSCD

目的探讨三七总皂苷(PNS)对自然衰老大鼠睾丸炎症反应和生殖细胞凋亡的影响。方法将SPF级SD大鼠随机分为9月龄组(9M),24月龄组(24M),PNS低、中、高剂量组,每组10只。大鼠从18个月开始,PNS低、中、高剂量组分别灌胃给予PNS 10,30,60 mg·kg^(-1),灌胃至24个月,每周灌胃6 d,周日停1 d,连续灌胃6个月。末次给药并禁食不禁水12 h后,处死大鼠,迅速取出睾丸组织。苏木精-伊红(HE)染色法观察睾丸组织形态学变化,Western Blot检测睾丸组织中P21^(WAF1/CIP1)(P21)、核转录因子(NF-κB)以及下游炎症因子白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、环氧化酶2(COX2)蛋白的表达和凋亡相关蛋白Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)的表达,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测睾丸生殖细胞凋亡。结果 HE染色观察发现,与9M比较,24M大鼠睾丸生精小管形态结构发生明显变化,生精细胞层数减少,细胞稀疏,各级生精细胞脱落。与24M比较,PNS低、中、高剂量组均能在一定程度上改善睾丸组织生精小管结构形态。与9M比较,24M大鼠睾丸组织P21、NF-κB及其下游炎症因子IL-1β、TNF-α、COX2的表达显著上调(P<0.01),PNS低、中、高剂量组可显著下调其表达(P<0.05,P<0.01)。24M大鼠睾丸组织抗凋亡蛋白Bcl-2的表达显著降低(P<0.01),促凋亡蛋白Bax显著升高(P<0.05),Bcl-2/Bax比值显著降低(P<0.01),PNS可显著升高Bcl-2的表达,降低Bax的表达,升高Bcl-2/Bax比值(P<0.05,P<0.01);与9M比较,24M大鼠睾丸内凋亡阳性细胞数显著增多,PNS低、中、高剂量组可明显减少凋亡的阳性细胞数。结论 PNS能够抑制自然衰老大鼠睾丸炎症反应,显著减少睾丸生殖细胞凋亡。     

五子衍宗方对自然衰老大鼠睾丸生殖细胞DNA损伤和凋亡的保护作用研究

该文探讨五子衍宗方对自然衰老大鼠睾丸生殖细胞DNA损伤和凋亡的保护作用及其可能机制。将SPF级16月龄SD雄性大鼠随机分为3组,衰老模型组(Ageing)、五子衍宗方低剂量组(WZ,1 g·kg-1)、五子衍宗方高剂量组(WZ,4 g·kg-1),2月龄SD大鼠作为青年对照组(Adult),每组10只。普通饲料或含药饲料喂养4个月后,处死大鼠,取出睾丸组织,称取睾丸质量,计算睾丸指数。HE染色观察睾丸组织形态。免疫荧光检测DNA损伤相关蛋白ATR的表达和定位。免疫印迹检测睾丸组织中DNA损伤相关蛋白γ-H2AX,Chk1,p-p53及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达。TUNEL检测大鼠睾丸生殖细胞凋亡变化。结果显示,五子衍宗方能显著提高睾丸质量及睾丸指数,明显改善睾丸组织形态。免疫印迹结果显示,与青年对照组相比,衰老模型组大鼠睾丸组织γ-H2AX,Chk1,p-p53,Bax蛋白表达水平显著升高,Bcl-2蛋白表达水平显著下降。五子衍宗方干预后能显著降低γ-H2AX,Chk1,p-p53,Bax蛋白表达水平,升高Bcl-2蛋白表达水平,且能升高Bcl-2/Bax的比值。免疫荧光结果显示,五子衍宗方能显著降低衰老所致睾丸组织ATR升高。TUNEL结果显示,五子衍宗方能显著减少睾丸组织生殖细胞凋亡。以上结果表明,五子衍宗方可保护自然衰老大鼠睾丸生殖细胞DNA损伤和凋亡,机制可能与调节p53信号通路有关。     

基于ATR/Chk1/P53信号通路探讨三七总皂苷对自然衰老大鼠睾丸生殖细胞DNA损伤的保护作用

目的基于ATR/Chk1/P53信号通路探讨三七总皂苷(PNS)对自然衰老大鼠睾丸生殖细胞DNA损伤的保护作用。方法将SPF级SD大鼠随机分为青年对照组(3月龄),衰老模型组(18月龄),PNS低、中、高剂量(10、30、60 mg/kg)组(18月龄),每组10只。PNS低、中、高剂量组大鼠分别ig给予PNS 10、30、60 mg/kg,每周6 d,给药6个月。结束时称体质量后处死大鼠,迅速取出睾丸组织,称取睾丸质量,计算睾丸指数。HE染色法观察睾丸组织形态学变化,免疫组化法检测DNA损伤相关蛋白γ-H2AX、ATR的表达和定位,Western blotting检测睾丸组织中DNA损伤相关蛋白γ-H2AX、Chk1、p-P53、P21的表达水平。结果与青年对照组比较,衰老模型组大鼠睾丸质量、睾丸指数显著降低,PNS能不同程度地升高睾丸质量、睾丸指数;HE结果表明,PNS能显著改善自然衰老所致的睾丸组织形态学变化;与青年对照组相比,衰老模型组大鼠睾丸组织DNA损伤标志蛋白γ-H2AX表达水平和阳性灶点数明显升高,ATR的阳性灶点数及其下游Chk1、p-P53、P21的蛋白表达明显升高,而PNS干预后可降低上述DNA损伤相关反应蛋白的表达。结论 PNS能够减轻自然衰老大鼠睾丸组织DNA损伤,其机制可能与调控ATR/Chk1/P53信号通路有关。