化痰通络汤对脑缺血/再灌注大鼠“肠-脑”轴的干预作用

目的 基于“肠-脑”轴探讨化痰通络汤（HTTLD）对大鼠脑缺血再灌注后脑组织和肠道形态和功能的影响。方法 将60只SPF级雄性大鼠随机分为假手术组，模型组，HTTLD高、中、低剂量组（28.66，14.33，7.16 g·kg^-1），依达拉奉（4 g·kg^-1）+丁酸梭菌（5.0×10⁸ cfu·mL^-1）组，采用大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，灌胃给药HTTLD，神经功能缺损评分和2，3，5-氯化三苯四氮唑（TTC）染色法测定脑组织损伤，小肠推进率观察脑缺血再灌注对肠道动力的影响，十二指肠黏膜的病理形态学检测评价肠黏膜细胞损伤，酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定血清D-乳酸（D-LAC），二胺氧化酶（DAO），细菌内毒素（LPS）含量，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测十二指肠的闭合蛋白（Occludin），紧密连接蛋白-5（Claudin-5），闭锁小带蛋白-1（ZO-1）蛋白的表达。结果 脑缺血再灌注后，大鼠出现神经功能缺损症状，与假手术组比较，模型组神经功能缺损评分显著升高（P<0.01）；与模型组比较，HTTLD中、高剂量组能显著减少神经功能缺损症状，降低神经功能缺损评分（P<0.01）。与假手术组比较，模型组大鼠脑组织出现明显梗死灶，脑梗死率显著升高（P<0.01）；与模型组比较，各给药组脑梗死体积明显减少（P<0.01），以HTTLD高剂量组的效应最佳，且效应具有剂量依赖性。小肠推进率结果显示，与假手术组比较，模型组小肠推进率显著降低（P<0.01）；与模型组比较，各给药组能显著升高小肠推进率（P<0.01），以HTTLD高剂量效应最佳，且效应具有剂量依赖性。十二指肠黏膜组织病理学检测显示，脑缺血再灌注后十二指肠黏膜可见明显损伤，各给药组黏膜损伤情况明显减轻。与假手术组比较，模型组ZO-1，Occludin，Claudin-5蛋白表达均显著降低（P<0.01）；与模型组比较，HTTLD低、中、高剂量组能不同程度上调ZO-1，Occludin，Claudin-5蛋白表达（P<0.05，P<0.01），以高剂量组的效应最为显著。与假手术组比较，模型组血清D-LAC，DAO，LPS蛋白含量均显著升高（P<0.01）；与模型组比较，各给药组D-LAC，DAO含量均明显降低（P<0.05，P<0.01），HTTLD中、高剂量组明显降低LPS含量（P<0.05，P<0.01），且HTTLD高剂量组的作用最明显。结论 脑缺血再灌注后，大鼠脑组织受损、出现神经功能障碍，同时肠道黏膜损伤、肠道蠕动减弱和肠道黏膜屏障破坏。HTTLD能减少脑组织和胃肠道黏膜损伤，减轻神经功能缺损症状，提高胃肠道动力、改善肠道屏障功能、减少肠道细菌代谢产物和毒物的释放，从而发挥对脑缺血再灌注后“脑-肠”轴损伤的保护作用。     

基于基因表达综合数据库与中医传承辅助系统分析气虚血瘀型脑梗死的中医药防治策略

目的：利用GEO芯片数据及中医传承辅助系统,获取气虚血瘀型脑梗死的差异基因及中医药防治方剂,并分析其作用机制,为气虚血瘀型脑梗死的中医药防治策略提供理论依据。方法：采用生物信息学、数据挖掘、网络药理学等多学科交叉方法,对气虚血瘀型脑梗死的中医药防治策略进行探讨。整合基因表达综合数据库（GEO）、中医药整合药理学研究平台（TCMIP）、GeneCards、PubChem、中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）、STRING、WebGestalt、DAVID多数据库资源及Cytoscape、R语言软件工具,对气虚血瘀型脑梗死疾病靶点、中药靶点进行筛选,从蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络、基因本体（GO）及京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集的角度,对中医传承辅助系统数据挖掘获取的气虚血瘀型脑梗死基础方的作用机制进行探讨。结果：获取2 542个气虚血瘀型脑梗死疾病靶点,其中差异基因结果显示HIF1A、PIK3CA、PIK3R1、TP53、NFKB1、HSP90AA1、CREBBP、CASP8、IL6、TNF、ITGB等表达上调,APOE、IGF1、CXCL5、SRC、ADCY5、PTGS2等表达下调,可作为疾病诊断治疗的潜在靶点。58首气虚血瘀型脑梗死方剂的用药规律,包括频次、关联及新方组合,获得气虚血瘀型脑梗死基础方剂,由黄芪、川芎、当归、地龙、党参、西洋参、白术、桃仁、赤芍、枳实10味中药组成,具有益气活血、行气化痰的功效,其作用机制可能与调控差异基因以多组分、多功能、多途径的方式,主要通过HIF-1、TNF、NF-kappa B、Apoptosis、PI3K-AKT等通路发挥作用。结论：气虚血瘀型脑梗死的中医药防治当以差异基因靶点为中心,筛选出临床基础方,根据临床辨证施治加减中药,同时可采用多学科交叉方法对气虚血瘀型脑梗死的方剂从多组分、多途径、多靶点层面进行临床与实验验证。本研究为中医药治疗气虚血瘀型脑梗死提供了方法理论上的指导,对推动中医药现代化具有重要意义。     

黄芪甲苷配伍三七总皂苷对脑缺血大鼠BMSCs移植后神经修复的影响

目的 探讨黄芪甲苷IV（astragaloside IV,AST IV）与三七总皂苷（Panax notoginseng saponins,PNS）配伍联合骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）移植对脑缺血大鼠神经功能修复的影响。方法 大鼠随机分为对照组、模型组、AST IV（10 mg/kg）与PNS（25 mg/kg）低剂量组、AST IV（20 mg/kg）与PNS（50 mg/kg）高剂量组、BMSCs输注组、BMSCs输注联合AST IV（10 mg/kg）与PNS（25 mg/kg）低剂量组、BMSCs输注联合AST IV（20 mg/kg）与PNS（50 mg/kg）高剂量组。全骨髓贴壁法分离、纯化BMSCs,流式细胞术检测BMSCs表面标志物CD29、CD90、CD34、CD45阳性表达率。各给药组给予药物进行干预,采用大脑中动脉阻塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）建立局灶性脑缺血模型,采用Longa法测定各组大鼠神经功能缺损症状;采用苏木素-伊红（HE）染色与尼氏染色测定各组大鼠脑组织病理变化;采用免疫荧光法检测各组大鼠海马区BMSCs和神经元特异性烯醇化酶（neuron specific enolase,NSE）阳性表达;采用Western blotting法测定各组大鼠脑组织脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）和胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line derived neurotrophic factor,GDNF）蛋白表达。结果 成功分离培养BMSCs,表面标志物CD29、CD90、CD34、CD45鉴定符合BMSCs特征。大鼠脑缺血后出现神经功能缺损症状及脑组织病理损伤,模型组大鼠神经功能缺损评分和脑组织细胞损伤率显著升高（P<0.01）,尼氏体数量显著减少（P<0.01）;各给药组均能够不同程度减轻上述病理改变,其中效应最强为BMSCs输注联合AST Ⅳ＋PNS高剂量组（P<0.01）,优于单用药物和单用BMSCs输注。大鼠脑缺血后神经元损伤,输注BMSCs后,细胞可在缺血侧脑组织增殖并分化为神经元,药物联合BMSCs输注能够增强BMSCs在大鼠脑内的增殖和分化。大鼠脑缺血后,BDNF和GDNF蛋白表达增加,各药物组均能够不同程度上调其表达,其中效应最强为BMSCs输注联合ASTⅣ＋PNS组（P<0.01）,优于单用药物和单用BMSCs输注。结论 AST Ⅳ配伍PNS能够促进BMSCs移植的存活,靶向修复脑缺血后受损神经元,其机制可能与改善脑缺血后脑内局部微环境,促进移植干细胞的存活、增殖和分化有关。     

黄芪甲苷配伍三七总皂苷对脑缺血大鼠BMSCs移植后血管新生的影响

目的 探讨黄芪甲苷（AST Ⅳ）与三七总皂苷（NTS）配伍联合骨髓间充质干细胞移植对脑缺血大鼠神经修复和血管新生的影响。方法 大鼠随机分为假手术组，模型组，AST Ⅳ配伍NTS低、高剂量组，骨髓间充质干细胞（BMSCs）输注组，BMSCs输注联合黄芪甲苷和三七总皂苷低（10，25 mg·kg^-1），高（20，50 mg·kg^-1）剂量组。全骨髓贴壁法分离、纯化BMSCs，流式细胞术检测BMSCs表面标志物CD29，CD90，CD34，CD45阳性表达率。采用大脑中动脉阻塞建立局灶性脑缺血模型。BMSCs输注组尾静脉注射PKH26标记的BMSCs（1次/d）；联用组尾静脉注射BMSCs（1次/d）并灌胃给药（2次/d）；其他组灌胃给药，2次/d；假手术组、模型组灌胃等体积生理盐水。Longa法测定神经功能缺损症状，红四氮唑（TTC）染色测定脑梗死率、免疫荧光法观察BMSCs移植后的存活及向血管的分化［PKH26/血管内皮生长因子（VEGF）的双阳性表达］，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测血管生成素1（Ang1）和转化生长因子-β₁（TGF-β₁）蛋白的表达。结果 成功分离培养BMSCs，表面标志物CD29，CD90，CD34，CD45鉴定符合BMSCs特征。脑缺血后出现神经功能缺损症状，模型组神经功能缺损评分显著升高（P<0.01），脑梗死率显著增高（P<0.01），各药物及细胞移植均能不同程度减轻上述病理改变，其中效应最强为BMSCs输注联合高剂量AST Ⅳ+NTS组（P<0.01），优于单用药物和单用BMSCs输注。脑缺血后脑血管损伤，输注BMSCs后，细胞可在缺血侧脑组织存活并促进血管新生，药物联合可增强其效应。脑缺血后，Ang1和TGF-β₁的表达增加，效应最强为BMSCs输注联合AST Ⅳ+NTS组（P<0.01），优于单用药物和单用BMSCs输注。结论 AST Ⅳ配伍NTS能促进骨髓间充质干细胞移植的存活，靶向修复脑缺血后受损血管促进血管新生，机制可能与改善脑缺血后脑内局部微环境，促进移植干细胞的存活和分化有关。     

黄芪甲苷配伍三七总皂苷对OGD/R大鼠脑微血管内皮细胞屏障功能的影响

目的 观察黄芪甲苷（astragalosideⅣ, ASTⅣ）配伍三七总皂苷（Panax notoginseng saponins, PNS）对氧糖剥夺后再复糖复氧（oxygen-glucose deprivation/reperfusion, OGD/R）大鼠脑微血管内皮细胞（brain microvascular endothelial cells, r BMECs）屏障功能的影响。方法 原代培养并鉴定r BEMCs,取第3代rBMECs,采用ASTⅣ与PNS高（100μmol/L+60μmol/L）、中（50μmol/L+30μmol/L）、低（25μmol/L+15μmol/L）剂量配伍预处理24 h,以OGD/R建立缺血再灌注损伤模型,同时设立对照组和模型组。CCK-8检测细胞存活情况,利用跨内皮细胞电阻（transendothelial electrical resistance, TEER）检测细胞屏障功能的改变,免疫荧光检测血脑屏障连接蛋白Occludin和ZO-1蛋白含量,Western blot检测黏附分子ICAM-1、VCAM-1的蛋白表达及NF-κB-p65的活...     

基于网络药理学探讨加味逍遥散治疗气滞痰阻型桥本氏甲状腺炎的作用机制

目的 采用网络药理学方法对加味逍遥散治疗气滞痰阻型桥本氏甲状腺炎（HT）作用机制进行研究。方法 通过TCMSP、TCMID、TCMIP数据库收集筛选加味逍遥散当归、茯苓、白芍、白术、柴胡、半夏、厚朴、紫苏叶8味中药的主要化学成分并通过PubChem数据库收集各化合物化学式结构。分别通过Swiss Target Prediction、GeneCards、TCMIP数据库收集中药、疾病、证型的靶点,通过Bioinformatics Gent韦恩图收集“中药-疾病-证型”交互靶点,并分别通过STRING、WebGestal数据库对交互靶点进行PPI、GO、KEGG富集分析。结果 加味逍遥散有效活性成分：当归2个,茯苓15个,白芍13个,白术7个,柴胡17个,半夏13个,厚朴2个,紫苏叶14个;“中药-疾病-证型”交互靶点共43个;PPI结果显示,IL-6、VEGFA、AKT1、CASP3、TNF、HRAS、PTGS2等蛋白-蛋白相互作用关系最强;生物过程（BP）富集246个,细胞成分（CC）富集70个,分子功能（MF）富集12个类别、KEGG富集105条信号通路。结论 整合文献报道及网络药理学结果,加味逍遥散可能通过维持Th1/Th2平衡,调节炎症因子——白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子（TNF）-α、TNF-β表达,通过HIF信号通路介导血管内皮生长因子（VEGF）在甲状腺细胞中广泛表达,通过VEGF信号通路参与调控甲状腺组织中血管新生的生理病理过程,在气滞痰阻型HT中发挥作用,同时预测加味逍遥散可能在HT转化成甲状腺乳头状癌（PTC）中发挥作用。     

基于生物信息学整合分析醒脾舒肝汤调节自噬治疗中医郁病的分子机制

目的:利用生物信息学方法,对醒脾舒肝汤进行多成分、多靶点、多通路、多miRNA研究,分析其在增强自噬发挥抗抑郁的作用及分子机制,为进一步开发醒脾舒肝汤提供理论依据。方法:利用TCMSP数据库收集醒脾舒肝汤活性化合物并进行初步筛选。采用Swiss Target Prediction数据库预测活性化合物靶点,通过GeneCards数据库预测中医郁病对应的西医病名焦虑症、抑郁症、躯体形式障碍的作用靶点,交集靶点得出"中药—疾病—表型"共同靶点。采用String数据库进行PPI网络构建,利用Cytoscape软件进行MCODE、MCC及拓扑分析整合得出共同靶点关键基因。采用WebGestalt数据库进行GO、KEGG富集分析及聚类亚网络分析。采用TargetScan数据库对关键基因mRNA进行反向预测其miRNA,构建miRNA-mRNA互作关系网络调控模式。结果:醒脾舒肝汤中有效高活性化合物:麻黄10个,红花12个,川芎6个,细辛6个,艾叶7个,柴胡9个,吴茱萸21个,白术4个,白芍3个,香附10个;"中药—疾病—表型"共同靶点312个,整合算法分析后获得39个关键基因;富集分析结果得出醒脾舒肝汤在细胞膜区改变膜蛋白结构,影响蛋白与蛋白、RNA、DNA结合,影响细胞内信号传导的生物进程抗抑郁,其机制可能与网络化调控多通路机制介导自噬增强有关;miRNA-mRNA相互作用模式可能调控自噬发挥抗抑郁作用。结论:醒脾舒肝汤多成分、多靶点、多通路、多miRNA参与增强自噬机制发挥抗抑郁作用,为中医郁病治疗,西医抑郁症、焦虑症、躯体形式障碍治疗提供理论靶点及临床预测标志物,推进中西医结合诊断治疗郁病的发展。     

基于网络药理学和实验验证黄芪甲苷和三七总皂苷配伍调控血管生成抗脑缺血作用机制

采用网络药理学结合体内、外实验验证探讨黄芪甲苷(astragalosideⅣ,ASTⅣ)配伍三七总皂苷(Panax notoginseng saponins, PNS)调控血管生成治疗脑缺血的作用机制。运用网络药理学预测ASTⅣ和PNS通过介导血管生成治疗脑缺血的可能机制。体内实验：SD大鼠随机分为假手术组、模型组、ASTⅣ(10 mg·kg^-1)+PNS(25 mg·kg^-1)组,大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO)法建立脑缺血模型。ASTⅣ及PNS灌胃给药,每天2次。采用Longa法测定神经功能缺损症状;苏木素-伊红(HE)染色观察脑组织病理损伤;免疫组化测定血友病因子(von Willebrand factor, vWF)的表达;免疫荧光测定血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)的表达;蛋白质印迹法检测脑组织血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor recept...