清肺排毒汤对二肽基肽酶-Ⅳ的抑制作用研究

目的：以自主研发的二肽基肽酶-Ⅳ（DPP-Ⅳ）特异性双光子荧光探针甘氨酰-脯氨酰-N-丁基-4-氨基-1,8-萘二甲酰亚胺（GP-BAN）为底物,人血浆为DPP-Ⅳ酶原,评价方剂清肺排毒汤及处方中中药材对DPP-Ⅳ的抑制作用,并进一步评价具有DPP-Ⅳ抑制活性中药材的成分单体化合物。方法：以建立的DPP-Ⅳ抑制剂筛选体系,分别将清肺排毒汤汤剂的喷干粉水溶液、中药颗粒水溶液、中药单体化合物与DPP-Ⅳ特异性探针GP-BAN在37 ℃条件下共同孵育,通过测定探针底物代谢产物BAN的荧光值来判断上述物质对DPP-Ⅳ的抑制程度。结果：清肺排毒汤具有较弱的DPP-Ⅳ活性的抑制作用,而其组分中药水溶液浓度为1 000 μg/mL时,麻黄、枳实、广藿香颗粒水溶液对DPP-Ⅳ的活性明显的抑制作用,酶残余活性分别为40.00%、61.05%、62.04%。橙皮素、芦丁、芹菜素、槲皮素、山柰酚、去甲基麻黄碱、川陈皮素对DPP-Ⅳ有一定的抑制作用,其中最强的3种单体成分槲皮素、山柰酚及芹菜素对DPP-Ⅳ的IC50值分别为(75.39±6.17）μmol/L、(9.16±0.69）μmol/L和(7.91±1.09）μmol/L。结论：清肺排毒汤对DPP-Ⅳ的有一定的抑制作用,存在抑制DPP-Ⅳ的成分群和单体化合物,这些发现为“清肺排毒汤”对感染新型冠状病毒肺炎（COVID-19）患者,尤其是COVID-19合并T2DM的患者的治疗提供了参考。     

脯氨酰内肽酶检测方法及抑制剂构效关系研究

脯氨酰内肽酶(prolyl endopeptidase,PREP)是一种重要的丝氨酸蛋白水解酶,特异性水解多肽链中脯氨酸羧基端的肽键,参与神经肽的代谢调节,其活性与多种精神类疾病的发生发展密切相关。人体内PREP活性异常可能是阿尔茨海默病易感性的标志。总结PREP活性检测方法及其抑制剂的研究进展:检测方法方面,生化分析方法主要包括探针底物及其分析条件和动力学参数;抑制剂方面,根据来源和结构骨架分类归纳,包括黄酮类、生物碱类、萜类、菲醌类、脯氨酸类、硼酸类、噻唑类和其他类;通过进一步探讨PREP抑制剂的构效关系,以期为PREP抑制剂的高通量筛选及研发提供参考。     

调血脂类中药及中药单体对羧酸酯酶1体外活性抑制作用研究

目的:采用羧酸酯酶1 (hCE1)特异性化学发光探针D-荧光素甲基醚(DME),在人肝微粒体(HLM)体系中测定18种调血脂类中药及12种中药单体对hCE1活性的抑制作用。方法:在HLM体系中,取不同中药饮片70%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取层(简称酯层)与残留水层及中药单体化合物,分别与hCE1特异性探针DME在37℃条件下共同孵育,通过测定探针底物代谢产物的相对光单位(RLU)值计算酶活力(E_(res)),判断提取物及中药单体对hCE1的抑制程度。结果:绿茶酯层、女贞子水层、干姜酯层、甘草次酸、胡椒水层、决明子水层、红花酯层、决明子酯层、柴胡水层、制何首乌水层、胡椒酯层、蒲黄酯层对hCE1有较强的抑制作用(E_(res)20%),质量浓度为20μg·mL~(–1)时hCE1酶活力分别为0.35%、 0.89%、 3.69%、 5.26%、 5.64%、 6.34%、 7.79%、12.04%、13.70%、15.35%、16.66%、18.89%。结论:绿茶、女贞子、干姜、甘草、胡椒、决明子、红花、柴胡、制何首乌、蒲黄中的化学成分对hCE1有较强的抑制作用。服用这些药物或食物,如饮茶时,需要注意其羧酸酯酶抑制作用会影响hCE1参与代谢的药物的血药浓度及药效。