肠炎清对溃疡性结肠炎模型大鼠中分泌型免疫球蛋白A和P选择素的影响

目的： 探讨肠炎清对免疫复合法诱致溃疡性结肠炎模型大鼠结肠组织中分泌型免疫球蛋白A（sIgA）和P选择素的影响研究。 方法： SD大鼠64只,雌雄各半,随机分为正常对照组（12只）和模型组（52只）;模型组应用免疫复合法（注射抗原乳化剂+TNBS/乙醇）建立溃疡性结肠炎大鼠模型,正常组注射生理盐水。再喂养3周后,随机从造模组中抽取4只处死,检查结肠病变情况,确定溃疡性结肠炎模型建立;随后将造模大鼠随机分为4组：肠炎清低、高剂量组（10,40 g·kg^-1）,柳氮磺吡啶（SASP,0.1 g·kg^-1）组和模型对照组;每组12只,每天灌胃给药1次,连续给药4周。每周观察大鼠疾病活动指数（DAI）;末次给药后,处死动物,解剖观察并评分结肠黏膜损伤指数（CMDI）;光镜下观察结肠组织的病理学变化,并做组织病理变化评分（HS）;采用ELISA方法测定结肠组织中sIgA的含量变化;采用免疫组化法（SP法）检测P选择素的表达变化。 结果： 与正常组比较,模型大鼠的DAI,CMDI,结肠HS评分和髓过氧化物酶（MPO）均明显上升（P<0.01）;结肠组织中的sIgA含量显著下降,而P选择素表达明显增加 （P<0.01）;与模型组比较,肠炎清治疗4周后大鼠的DAI,CMDI,结肠HS评分和MPO值均能显著下降（P<0.01）;结肠组织中sIgA的浓度升高,同时减少了P选择素表达（P<0.01）。 结论： 肠炎清对免疫复合法诱致溃疡性结肠炎模型大鼠具有治疗作用,其机制可能与提升结肠组织内sIgA浓度和降低P选择素的表达有关。     

幽门螺杆菌感染小鼠慢性胃炎模型的建立及评价

目的建立幽门螺杆菌(H.pylori)感染动物模型,评价H.pylori相关慢性胃炎胃黏膜病理变化。方法灌胃H.pylori SS1菌株建立在体感染,感染后第2周后采用快速尿素酶法和PCR法检测感染成功率;确认感染成功后再分别继续饲养至6周和12周,建立H.pylori相关慢性胃炎动物模型。实验结束后,取胃腺体组织别进行HE和硼酸美兰染色,分析胃炎程度及H.pylori感染程度;生化法检测胃组织中髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO),超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD),丙二醛(malondialdehyde,MDA)和过氧化氢酶(catalase,CAT)的含量变化;RT-q PCR法检测胃组织中COX-2、iNOS、TNF-α和IL-1β基因表达的变化。结果与正常组相比,模型6周和12周组胃组织内可见H.pylori定植,并且黏膜层有不同程度的慢性炎性细胞浸润,腺体萎缩和肠化生情况;同时组织中CAT和SOD的含量明显下降,MPO和MDA的水平和COX-2、iNOS、TNF-α和IL-1β基因表达均有显著上升(P0.05或P0.01)。结论通过灌胃给菌的方法可以成功将H.pylori定植于小鼠体内,并在定植的6周和12周后均可引起慢性炎性细胞的浸润,并使增强胃腺体组织内氧化应激水平和促炎基因的表达,但12周模型感染程度更深,出现腺体萎缩和肠化生的情况。     

青钱柳叶水提物对阴虚内热型2型糖尿病大鼠中医表征和免疫功能的改善作用

【目的】探讨青钱柳叶水提物对阴虚内热型2型糖尿病大鼠中医表征和免疫功能的作用。【方法】将60只SPF级SD大鼠随机分为正常组,模型组,知柏地黄丸组,青钱柳叶水提物高、中、低剂量组。复制阴虚内热型2型糖尿病大鼠模型:大鼠给予高脂饲料喂养,喂养第4周时,按0.2 mg·kg~(-1)·d~(-1)剂量连续皮下注射甲状腺素(T4)7 d;第5周时,一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)35 mg/kg,3周后造模结束。模型复制成功后,除正常组和模型组外,其余各组给予相应药物灌胃治疗4周。每周观察中医证候指标并评分。末次给药后,观察空腹血糖(FBG)值变化、血糖曲线下面积(AUC)及血清中尿素(Urea)含量;取肝脏称质量计算肝指数,并检测肝组织肝糖原含量;检测CD3~+、CD4~+和CD8~+T淋巴细胞百分比。【结果】与模型组比较,给予青钱柳叶水提物治疗之后,阴虚内热型糖尿病中医表征表现如背部温度上升、舌色鲜红、活动次数明显增加、爪色青紫及眼睛神采异常等均有明显的改善(P0.05或P0.01),FBG、AUC、Urea含量和肝脏系数下降(P0.05或P0.01),肝糖原含量升高,CD8~+T细胞百分比升高,CD4~+T细胞百分比及CD4~+/CD8~+值下降(P0.05或P0.01)。【结论】青钱柳叶水提物能改善大鼠阴虚内热型2型糖尿病中医表征及调节免疫功能。     

乌药提取物对膀胱过度活动症模型膀胱上皮细胞Ca2+浓度和UPⅡ表达的影响

目的:观察乌药提取物对膀胱过度活动症(OAB)模型大鼠膀胱上皮细胞生长、Ca2+浓度和UPII表达的影响。方法:膀胱出口梗阻手术复制OAB模型,随机分为OAB模型组、假手术组和乌药提取物组,给药4周后,无菌条件下分离、培养膀胱上皮细胞,观察细胞形态、生长及增殖过程,并进行HE染色、Ca2+浓度测定和UPII免疫荧光染色。结果:与对照组相比,模型组上皮细胞数量少,细胞生长缓慢,Ca2+浓度增加(P0.01),UPII表达减少;与模型组相比,乌药提取物组膀胱上皮细胞数量增加,形态正常,Ca2+浓度明显减少(P0.05),Uroplakin II(UPII)表达增加。结论:乌药提取物对OAB模型大鼠膀胱上皮细胞生长有改善作用,减少细胞内Ca2+浓度,提高UPII表达。     

广藿香醇抑制幽门螺杆菌脲酶活性及其机制

探讨广藿香醇对于幽门螺杆菌Helicobacter pylori脲酶活性的抑制及其相关基因的表达变化,为进一步研究广藿香醇对幽门螺杆菌定植感染的影响奠定基础。培养幽门螺杆菌并采用革兰染色、快速尿素酶及PCR的方法鉴定后,在酸性条件(pH 5.3)和中性条件(pH 7.0)培养液中给予不同浓度的广藿香醇干预1 h,应用琼脂稀释法测定细菌的存活率;Berthelot显色法检测细菌的脲酶活性;RT-qPCR法检测细菌中ureA,ureB,ureE,ureH,ureI和nix A相关脲酶基因的表达变化。经过鉴定生长良好幽门螺杆菌在不同浓度的广藿香醇干预后,细菌存活率没有明显变化;其脲酶活性出现了显著的下降;同时脲酶的相关基因ureA,ureB,ureE,ureH,ureI和nix A的表达均出现不同程度的降低。广藿香醇在酸性条件和中性条件下均可以抑制幽门螺杆菌脲酶的活性,可能与降低细菌脲酶相关的基因表达有关。     

基于溶酶体介导巨噬细胞清除活力研究广藿香醇特异性抗幽门螺杆菌作用及其机制

探讨广藿香醇特异性增加巨噬细胞清除幽门螺杆菌Helicobater pylori作用及其机制,为进一步研究广藿香醇治疗H.pylori相关疾病奠定药理学基础。将巨噬细胞RAW264.7和H.pylori按照MOI=100的比例共孵育,同时分别予广藿香醇20,10,5 mg·L-1干预24 h;应用琼脂稀释法测定巨噬细胞对H.pylori的吞噬率和清除率;荧光显色法观察细胞内溶酶体的稳定性;生化方法检测细胞上清液中NO和MPO的变化情况;RT-q PCR和ELISA法分别检测细胞内IL-6和TNF-α的基因和细胞上清液中蛋白表达变化。与正常组相比,模型组细胞内溶酶体完整性明显下降,细胞上清液中的NO含量、MPO活性、IL-6和TNF-α蛋白表达均显著上升,细胞内IL-6和TNF-α基因表达也明显增加(P0.01)。经过广藿香醇治疗之后,巨噬细胞清除细菌的能力明显增强,同时细胞内溶酶体完整性恢复,细胞分泌的NO含量、MPO活性、IL-6和TNF-α蛋白表达均显著下降,细胞内IL-6和TNF-α基因表达也被有效抑制(P0.01或P0.05)。广藿香醇可以增加巨噬细胞对H.pylori的清除率并且对被感染的细胞表现出抗炎和抗氧化应激的作用,可能与阻断H.pylori逃逸溶酶体结合步骤有关。     

糖尿病膀胱功能障碍小鼠的膀胱功能及尿动力学改变

【目的】探讨糖尿病膀胱功能障碍小鼠的尿动力指标、小鼠膀胱功能的变化,为进一步探讨中药活性成分作用机制奠定基础。【方法】选用C57BL/6雄性小鼠,随机分为空白对照组、模型组,空白对照组给予普通饲料,模型组给予高脂纯化配方饲料,连续喂养4周。模型组腹腔注射链脲佐菌素(剂量为200 mg/kg),空腹血糖值到达10.5 mmol/L视为造模成功;造模成功后继续喂养12周,测定口服葡萄糖耐量(OGTT)、糖化血清蛋白(GSP)、空腹血糖值(FBG)和胰岛素(INS);进行小鼠尿动力学测定,并用powerlab生物信号系统测小鼠膀胱肌条功能;对膀胱组织行苏木素—伊红(HE)和Masson染色后采用光镜观察病理情况。【结果】造模12周后,与空白对照组小鼠比较,模型组小鼠的OGTT、GSP、FBG、INS均显著增加(P0.01);尿动力检测中,膀胱漏尿点压(BLPP)、排尿期的最大排尿压(MVP)、排尿率(EV)均显著下降(P0.05或P0.01),而膀胱最大容量(MBC)、膀胱顺应性(BC)以及残余尿量(PVR)均显著升高(P0.05或P0.01);离体肌条检测中,肌条对α,β-me ATP、Carbachol、Capsaicin、KCl诱发的逼尿肌条舒缩反应显著下降(P0.05或P0.01)。光镜观察HE染色切片,发现模型组小鼠的膀胱逼尿肌层束排列紊乱且间隙明显增宽,Masson染色切片发现胶原纤维成分下降。【结论】糖尿病小鼠膀胱的运动及感觉功能均出现功能障碍,并出现组织形态学变化,进入膀胱功能低下的失代偿期。