二仙汤对环磷酰胺致少精子症模型小鼠生殖功能的影响

目的:探讨二仙汤对环磷酰胺致少精子症模型小鼠生殖功能的影响。方法:雄性昆明小鼠随机分为正常组、模型组、二仙汤低/中/高剂量组等5组,每组16只小鼠。二仙汤低/中/高剂量组按体重每天分别灌胃3、6、12 g/kg的二仙汤,正常组和模型组则按体重灌胃相应体积生理盐水,连续30 d。从给药第21天起模型组、二仙汤低、中、高剂量组则同时腹腔注射环磷酰胺(80 mg/kg),正常组则腹腔注射生理盐水,连续5 d。在末次灌胃24 h后处死小鼠,取双侧附睾制备精子悬液,以随机盲测方式观察精子的数量和活力;取小鼠双侧睾丸,做睾丸组织切片,观察睾丸形态以及组织匀浆,以生化方法检测睾丸组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷光氨肽(GSH)的浓度。结果:与正常组相比,模型组小鼠的附睾精子浓度[(9.31±1.32)×10~6/ml vs(3.32±1.13)×10~6/ml]与活力明显下降[(44.75±8.12)%vs(25.95±11.41)%],SOD[(37.27±0.99)U/mg prot vs(14.23±1.99)U/mg prot]、GSH[(101.55±8.74)μmol/L vs(58.77±8.93)μmol/L]浓度降低(P0.01),MDA含量升高,组织切片显示管腔内精子的数量减少,生精细胞排列比较稀疏。而二仙汤具有明显改善作用,低、中、高剂量的二仙汤都能提高附睾精子浓度[(8.34±2.59)×10~6/ml;(8.59±1.10)×10~6/ml;(8.41±1.47)×10~6/ml]、活力[(36.04±12.33)%;(38.87±13.13)%;(41.90±8.09)%]以及SOD[(22.99±1.11)U/mg prot;(20.82±1.81)U/mg prot;(21.33±1.66)U/mg prot]、GSH[(104.74±2.47)μmol/L;(98.61±12.98)μmol/L;(108.89±5.85)μmol/L]含量,降低MDA含量等。结论:中药复方二仙汤能改善环磷酰胺致精子浓度减少和活力降低等病证,其作用机制可能与提高抗氧化能力,减少氧化应激损伤有关。     

二仙汤对围绝经期大鼠心脏电生理的影响

目的:探讨二仙汤对围绝经期大鼠心脏电生理的作用及机制。方法:雌性SD大鼠,根据体质量随机分组,分为假手术组,模型组,戊酸雌二醇组(8×10~(-4)g·kg~(-1)·d~(-1)),二仙汤低、中、高剂量组(4,8,12 g·kg·~(-1)d~(-1))。除假手术组外,其余各组大鼠均彻底摘除卵巢复制围绝经期大鼠模型。同时分别灌胃给药,假手术组和模型组则灌胃等量生理盐水,每天1次,连续80 d。以生物信号采集仪连接Ⅱ导联电极记录大鼠心电图,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠血清中雌二醇(E2)的含量,苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠子宫病理形态学变化,蛋白免疫印迹法(Western bot)检测大鼠心肌组织中雌激素α受体(ERα)蛋白的表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠心电图P波,R波,T波幅度显著减小(P 0. 01),PR间期,QRS时程,QT间期不同程度的缩短,大鼠血清中E2水平显著降低(P 0. 01);大鼠子宫明显干瘪,皱缩,子宫内膜层变薄,腺体数量明显减少;心肌组织ERα受体蛋白表达显著降低(P 0. 01)。与模型组比较,二仙汤各剂量组均能改善上述大鼠子宫的病理变化,中、高剂量二仙汤能显著升高E2水平(P 0. 01),显著逆转上述子宫的病理变化,上调ERα受体蛋白的表达(P 0. 01)。结论:二仙汤能改善围绝经期大鼠的心脏电生理变化,其机制可能与提高大鼠体内雌激素活性和雌激素受体表达有关。     

二仙汤对去卵巢大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

目的探讨二仙汤对去卵巢大鼠离体心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的作用及初步机制。方法36只雌性SD大鼠随机分成假手术组、模型组、戊酸雌二醇组(戊酸雌二醇,8×10^-4g·kg^-1)、二仙汤低剂量组(4 g生药·kg^-1)、二仙汤中剂量组(8 g生药·kg^-1)、二仙汤高剂量组(12 g生药·kg^-1)。除假手术组外,各组动物均摘除卵巢复制更年期综合征大鼠模型,每日给药1次,连续90 d,通过Langdroff心脏灌流系统进行离体心脏灌注,生理信号采集系统记录心率,生化方法检测冠状动脉流出液乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(AST),心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、肌酸激酶(CK-MB)、Ca^2+-ATP酶和Na^+-K^+-ATP酶活力。结果与模型组相比,二仙汤给药组能改善去卵巢大鼠MIRI的心率变化,减少冠状动脉流出液LDH、AST的含量,减少心肌组织MDA的含量,增加心肌组织SOD、Ca^2+-ATP酶和Na^+-K^+-ATP酶活力。结论二仙汤可防治去卵巢大鼠离体MIRI,其机制可能与抗氧化有关。     

甘草附子汤对大鼠骨关节炎及关节软骨蛋白质组学的影响

采用碘乙酸钠膝关节腔注射复制大鼠骨关节炎模型,探究甘草附子汤对大鼠骨关节炎防治作用及关节软骨蛋白质组的影响。将60只体质量230~250 g的SD大鼠随机分为正常组、模型组、硫酸氨基葡萄糖组以及甘草附子汤高、中、低剂量组。除正常组外其余各组均进行碘乙酸钠(每侧腿给药3 mg)膝关节腔注射诱导骨关节炎模型。造模后,各给药组灌胃1个月,给药期间每周进行关节疼痛测试、关节宽度测量,观察大鼠自主行为。应用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠关节灌洗液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP-1)的含量;应用苏木精-伊红(HE)染色法观察骨关节形态;应用Nano-LC-LTQ-Orbitrap系统检测关节软骨蛋白。结果显示,与模型组比较,甘草附子汤能显著改善骨关节炎大鼠的关节疼痛和关节肿胀;显著降低关节腔灌洗液中TNF-α,IL-1β,MMP-3的含量,升高TIMP-1的含量;减轻关节腔间隙变大、软骨边缘破裂粗糙、软骨层厚薄不一、软骨细胞排列紊乱等炎性病变;各组之间的蛋白进行比较后筛选出差异蛋白273个,KEGG分析发现上述差异蛋白共涉及systemic lupus erythematosus等43条信号通路,其中与骨关节炎相关的信号通路有11条。以上结果表明,甘草附子汤对骨关节炎有防治作用,其作用机制可能是通过调节骨关节炎相关信号通路的蛋白表达来完成的。     

二仙汤对去卵巢大鼠认知障碍的影响

目的:观察二仙汤对去卵巢大鼠引起的认知障碍作用及初步机制探讨。方法:将雌性SD大鼠按体质量随机分成假手术组,模型组,阳性药戊酸雌二醇组(0.8 mg·kg~(-1)·d~(-1)),二仙汤高、中、低剂量组(相当生药量12,8,4 g·kg~(-1)·d~(-1))。除假手术组外,其他组动物均以去卵巢复制认知障碍模型,经阴道涂片筛选后,每日1次给药,连续90 d后,以Mirrors水迷宫实验检测大鼠认知能力,比色法检测大鼠大脑皮质乙酰胆碱酯酶(Ach E),乙酰胆碱转移酶(Ch AT),总超氧化物歧化酶(T-SOD),丙二醛(MDA)水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马和大脑皮质区域的雌激素α受体蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组逃避潜伏期随着试验次数显著增多(P0.01),在原平台象限停留时间减少(P0.05),Ch AT活性降低(P0.01)且Ach E活性升高(P0.05),大脑皮质区域的雌激素α受体表达显著减少(P0.01);与模型组比较,二仙汤能缩短模型大鼠逃避潜伏期,增加空间探索试验时穿过原目标平台的次数和原目标平台象限停留时间比例,以及增加Ch AT活性,降低Ach E活性,雌激素α受体表达显著增加(P0.01)。结论:二仙汤能改善去卵巢致大鼠认知障碍,其机制可能与中枢胆碱活性和雌激素等有关。     

二仙汤改善去卵巢大鼠学习记忆能力的海马蛋白质组学研究

基于蛋白质组表达的差异性探讨二仙汤改善去卵巢大鼠学习记忆能力的作用机制。实验动物按体质量随机分为3组,即假手术组、模型组、二仙汤组,其中假手术组和模型组灌服生理盐水,二仙汤组则按生药量12 g·kg-1灌服二仙汤,连续给药90 d后,采用Morris水迷宫考察大鼠的学习记忆能力,以Nano-LC-LTQ-Orbitrap系统检测海马蛋白,Protein Discovery软件进行蛋白质鉴定,SIEVE软件对蛋白进行相对定量分析,DIVAD数据库对差异蛋白进行生物学功能分析。结果显示,与模型组相比,二仙汤组逃避潜伏期明显缩短,穿越平台次数、平台象限的停留时间(TP)和TP与总游泳时间(T)的百分比(TP/T)均增加。与模型组相比,二仙汤组共发现216个与假手术组趋势一致的差异蛋白,主要富集于Ca2+信号通路,Rab3A与Rab14为functional classification富集分值最高的基因组中的关键基因。结果表明,二仙汤能提高去卵巢大鼠的学习记忆能力,Ca2+信号通路以及Ras-related protein Rab-3A,Ras-related protein Rab-14等相关差异蛋白质可能与二仙汤的干预效应有关。     

二仙汤含药血清对过氧化氢诱导成骨细胞骨形成的影响

目的探讨二仙汤治疗骨质疏松症的可能作用机制。方法成骨细胞以5×103/孔接种于96孔板,分为正常组、模型组、戊酸雌二醇组和二仙汤高、中、低剂量组,每组6孔。除正常组外其余各组用含600μmol/L过氧化氢(H2O2)的完全培养基培养3h诱导成骨细胞骨形成模型。正常组用空白对照血清培养,戊酸雌二醇组给予8%戊酸雌二醇含药血清培养,二仙汤高、中、低剂量组分别给予8%、4%、2%二仙汤含药血清培养48h,检测成骨细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)活力、钙结节生成以及骨形成蛋白2(BMP-2)和骨保护素(OPG)蛋白表达。另外以钙离子通道阻断剂Nifdipine(10μmol/L)进行干预,观察Nifdipine对H2O2刺激成骨细胞后细胞增殖、ALP活性及BMP-2、OPG蛋白表达以及Nifdipine干预下二仙汤含药血清对H2O2刺激成骨细胞后细胞增殖、ALP活性及BMP-2、OPG蛋白表达的影响。结果与正常组比较,模型组细胞增殖、ALP活性、钙结节及BMP-2表达降低(P0.05或P0.01)。二仙汤各剂量组能不同程度促进成骨细胞增殖,提高ALP活力和钙结节生成,促进BMP-2、OPG蛋白表达(P0.05或P0.01)。Nifdipine能提高H2O2刺激下成骨细胞BMP-2、OPG蛋白表达(P0.05或P0.01)。与Nifdipine组比较,二仙汤含药血清和Nifdipine合用则显著提高H2O2刺激下的成骨细胞增殖,降低BMP-2、OPG蛋白表达(P0.01)。结论二仙汤含药血清能明显改善氧化刺激对成骨细胞骨形成的影响,其机制可能与调节钙离子通道有关。     

二仙汤对去卵巢骨质疏松大鼠股骨蛋白质组的影响

该实验为探究二仙汤防治骨质疏松的作用及对去卵巢骨质疏松模型大鼠股骨蛋白质组的影响。将雌性SD大鼠按体重随机分为4组,即假手术组、模型组、阿仑膦酸钠组(阿仑膦酸钠,1 mg·kg~(-1))、二仙汤组(生药量8 g·kg~(-1)),其中假手术组和模型组灌服生理盐水,阿仑膦酸钠组按1 mg·kg~(-1)剂量灌服阿仑膦酸钠,二仙汤组按生药量8 g·kg~(-1)灌服二仙汤,每日1次,连续给药90 d后检测股骨骨密度,同时应用Nano-LC-LTQ-Orbitrap系统检测股骨骨蛋白,Protein Discovery软件进行蛋白质鉴定,SIEVE软件对蛋白进行相对定量分析。实验结果显示,二仙汤能显著提高去卵巢大鼠股骨骨密度。二仙汤组与模型组相比较共发现41个与假手术组趋势一致的差异蛋白,主要包括生物氧化相关蛋白、信号转导通路相关蛋白、脂肪酸代谢相关蛋白、细胞骨架相关蛋白、能量代谢相关蛋白、糖代谢相关蛋白等。二仙汤能防治骨质疏松症,碳酸酐酶2、整合素β1等相关差异蛋白质可能是其作用靶点。