益气活血方作用NGF对大鼠心肌梗死后神经重构的影响

目的观察益气活血方对心肌梗死大鼠神经重构和相关因子神经生长因子(nerve growth factor,NGF)及其受体酪氨酸蛋白激酶A(tyrosine kinase A,TrkA)、p75神经营养因子受体(p75 neurotrophic receptor,p75NTR),以及巨噬细胞表达情况的影响,探讨益气活血方作用神经重构的作用机制。方法结扎大鼠冠状动脉左前降支建里急性心肌梗死动物模型,将造模成功的大鼠进行依术后24小时心电图坏死性Q波数量随机分组,共分为4组,对照组(即假手术组)、模型组、益气活血方组、阳性药物美托洛尔组,每组20只,并以术后7天、28天作为观察时间点。按时间点处死取材,取大鼠梗死及周围组织,用HE染色法观察心肌梗死周围组织的病理情况;用免疫组化法观察交感神经阳性纤维表达,以及巨噬细胞浸润情况;用免疫蛋白印迹法检测大鼠NGF、TrkA、p75NTR的蛋白表达。结果两个时间点模型组梗死周围游离壁酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)阳性纤维的密度显著高于假手术组(P0.01);与模型组相比,各给药组TH显著降低(P0.01)。两个时间点模型组相较假手术组CD68巨噬细胞阳性计数增加(P0.01),两用药组较模型组均有减少(P0.01)。两个时间点模型组梗死周围NGF及其受体TrkA、p75NTR表达相较于假手术组均有明显升高(P0.01),术后7天,美托洛尔组的NGF、TrkA、p75NTR蛋白表达较模型组均有所降低(P0.01),益气活血组的NGF、TrkA、p75NTR蛋白表达较模型组也均有所下降(P0.05);术后28天,美托洛尔组的NGF、p75NTR蛋白表达较模型组均明显降低(P0.01),TrkA蛋白表达较模型组有所降低(P0.05);益气活血组的NGF、TrkA、p75NTR蛋白表达较模型组也均有所下降(P0.05)。结论益气活血方可以有效减少巨噬细胞浸润,降低NGF及其受体TrkA、p75NTR的分泌和表达,从而改善心肌梗死后神经重构的情况。     

益气活血方对心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡影响的研究

目的观察益气活血方对心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡和B细胞淋巴瘤-2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-Associated X protein,Bax)、活化的含半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved caspase 3,C-caspase 3)表达情况的影响,探讨益气活血方影响心肌细胞凋亡的作用机制。方法结扎左冠状动脉前降支构建心肌梗死大鼠模型,并随机分为模型组、益气活血组、培哚普利组,假手术组(即对照组,只穿线不结扎),每组大鼠10只。术后第二天开始灌胃给药,以28天作为观察时间点。小动物超声检测各组大鼠心脏结构和功能的变化,HE染色观察心肌组织病理形态变化,TdT介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)染色法检测大鼠心肌细胞凋亡指数,Western blot技术检测心肌梗死边缘区Bax、Bcl-2、C-caspase 3蛋白表达水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠左心室射血分数(left venteicular ejection fraction,LVEF)、左室短轴缩短率(left ventricular shortening fraction,LVFS)均显著降低(P<0.01),左心室收缩末期内径(left ventricular end-systolic dimension,LVESD)、左心室舒张末期内径(left ventricular end-diastolic dimension,LVEDD)均升高(P<0.01);两用药组LVEF、LVFS相较于模型组均显著升高(P<0.01),LVESD、LVEDD均降低(P<0.01)。与假手术组相比,模型组心肌细胞凋亡指数明显上升(P<0.01);与模型组比较,益气活血组与培哚普利组大鼠心肌细胞凋亡指数明显降低(P<0.01)。Western blot结果显示,模型组大鼠Bax、C-caspase 3表达与假手术组相比均有明显升高(P<0.01),Bcl-2表达及Bcl-2/Bax相较于假手术组有所降低(P<0.01)。与模型组比较,益气活血组大鼠Bax蛋白表达有所下降(P<0.01),Bcl-2蛋白表达与Bcl-2/Bax显著升高(P<0.05,P<0.01),C-caspase 3蛋白表达有所降低,但差异无统计学意义(P>0.05);相较于模型组,培哚普利组大鼠Bax表达降低(P<0.01),Bcl-2/Bax比值上升(P<0.05),Bcl-2呈升高趋势,C-caspase 3有下降趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论益气活血方能够提高心肌梗死大鼠心功能,下调促凋亡蛋白Bax的表达,上调抗凋亡蛋白Bcl-2表达及Bcl-2/Bax比值,从而减轻心肌凋亡损伤以保护心脏。     

益气活血药对心梗后心肌纤维化大鼠不同亚型血小板源性生长因子表达的影响

目的 探究益气活血药对心肌梗死后心肌纤维化大鼠血小板源性生长因子(platelet-derived growth factors,PDGF)表达的影响。方法 结扎左前降支建立心肌梗死大鼠模型,假手术组只穿线,不结扎。术后将成模动物随机分为假手术组、模型组、培哚普利组和益气活血组,每组9只,给予相应药物灌胃治疗28天后,采用超声心动图评价大鼠心脏结构和功能的变化,马松(masson)染色法观察药物对心肌纤维化的影响,蛋白质印迹法(western blot)检测collagenⅠ、collagenⅢ及PDGFs的蛋白表达水平。结果 与假手术组比较,模型组大鼠左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)、左室短轴率(left ventricular fraction shortened,LVFS)均显著降低(P0.01),左室收缩末期内径(left ventricular internal dimension systole,LVIDs)、左室舒张末期内径(left ventricular end diastolic diameter,LVIDd)、心肌胶原容积分数(collagen volume fraction,CVF)显著升高(P0.01),collagenⅠ、Ⅰ/Ⅲ型胶原比值和PDGF-B升高(P0.05,P0.01),PDGF-A和PDGF-C显著下降(P 0. 01)。与模型组相比,两给药组LVEF、LVFS均显著升高(P 0. 01),LVIDs、LVIDd、CVF显著降低(P0.01),其中益气活血组collagenⅠ、Ⅰ/Ⅲ型胶原比值和PDGF-B下降(P0.01),PDGF-A升高(P0.05)。结论 益气活血药作用于血小板源性生长因子能够通过降低PDGF-B减轻MI大鼠纤维化水平,并可上调PDGF-A发挥保护心脏功能的作用。     

益气活血药对心肌梗死后大鼠小肠黏膜屏障及肠道菌群的影响

目的观察益气活血药对心梗后大鼠肠道黏膜屏障、肠道菌群及封闭蛋白的影响。方法采用结扎左冠状动脉前降支制备SD大鼠的心肌梗死模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组、益气活血药组、酒石酸美托洛尔组,连同假手术组,每组10只。实验分为7天和28天两个时间节点。术后第2天开始灌胃给药,益气活血方组8.2 g/(kg·d)、酒石酸美托洛尔组5 mg/(kg·d),模型组和假手术组给予等量蒸馏水灌胃。分别于灌胃7天和28天后采集大鼠小肠(回肠)组织及食糜。HE染色观察小肠(回肠)黏膜结构,测量绒毛高度、隐窝深度,并计算绒毛高度/隐窝深度(Villus height/Crypt depth,V/C)比值;实时荧光定量PCR方法观察小肠有益菌(双歧杆菌、乳杆菌)和有害菌(大肠杆菌、和肠球菌)的变化;免疫组化方法检测封闭蛋白表达的变化。结果在7天和28天两个时间节点中,与假手术相比,模型组绒毛高度下降(P0.01),隐窝深度变浅(P0.01),V/C比值减小(P0.01),Occludin蛋白表达明显减少(P0.01),有益菌数量均明显减少(P0.01),有害菌数量明显增加(P0.01);与模型组相比,各给药组绒毛高度明显升高(P0.01),隐窝变浅(P0.05),V/C比值明显增大(P0.01),益气活血药组有益菌数量显著增加(P0.01),有害菌数量显著减少(P0.01),两用药组趋势相同,两者数量无统计差异,益气活血药组Occludin蛋白的表达增加(P0.01)。结论本实验发现心梗大鼠小肠形态及功能受到影响,益气活血药干预可改善心梗后大鼠肠道形态结构,提高小肠的消化与吸收能力,调节小肠菌群。     

不同深度针刺“足三里”穴对慢性胃炎大鼠消化及免疫指标的影响

目的:研究不同深度针刺"足三里"穴对慢性胃炎大鼠的治疗作用机制以及提高免疫系统功能的效果。方法:根据随机区组设计方法,将44只大鼠分为4组:正常对照组,造模组,浅刺组,深刺组。慢性胃炎大鼠模型采用碘乙酰胺溶液诱导制备。正常对照组不作任何处理,造模组用相同方法固定大鼠,但不做针刺处理,浅刺组、深刺组将毫针刺入不同深度后,分别测定各组大鼠的血清胃泌素、白介素含量及胃液p H值,观察胃部出血点及体重变化。结果:相对于正常对照组,造模组大鼠血清胃泌素浓度降低,针刺后深刺组大鼠血清胃泌素浓度较造模组有显著提高(P0.01)且深刺组作用优于浅刺组(P0.05);比较正常对照组、造模组、浅刺组、深刺组的白介素IL-1β,其差异均无统计学意义(P0.05)。对正常对照组、造模组、浅刺组、深刺组的组间互相比较,p H值差异均无统计学意义(P0.05)。结论:深刺大鼠"足三里"穴治疗慢性胃炎,相较于浅刺,有着更明显刺激机体内血清胃泌素释放的功能;针刺"足三里"穴对于调节慢性胃炎大鼠的血清白介素浓度及胃液p H值无明显影响。