基于UHPLC-Q-Orbitrap HRMS和HPLC-DAD法研究不同干燥方式对马蓝叶化学成分的影响

目的 研究阴干、晒干、真空冷冻干燥、热风干燥4种干燥方式对马蓝Baphicacanthus cusia叶化学成分的影响,寻找差异成分,并建立HPLC-DAD同时定量分析5种吲哚类生物碱成分的方法,以期为建立规范的马蓝叶干燥方式提供理论依据。方法 利用UHPLC-Q-Orbitrap HRMS对4种干燥处理的马蓝叶进行定性分析,并结合热图聚类分析（heat map clustering analysis,HCA）、主成分分析（principal component analysis,PCA）和正交偏最小二乘-判别分析（orthogonal partial least squares-discriminant analysis,OPLS-DA）筛选差异成分。结果 共鉴定出67个共有化合物。HCA和PCA将阴干和热风干燥归为一类。OPLS-DA筛选出14个差异成分,多为生物碱类,且呈现出不同的变化规律。HPLC-DAD结果表明,不同干燥方式马蓝叶中的5种吲哚类生物碱含量存在明显差异。其中,热风干燥样品的靛蓝含量最高,靛玉红含量最低;阴干样品的靛红、色胺酮、靛玉红含量最高。结论 不同的干燥方式对马蓝叶的品质有明显影响。热风干燥和晒干有利于吲哚苷水解合成靛蓝,但靛红和靛玉红的含量较低。而阴干和真空冷冻干燥样品的靛蓝含量较低,而靛玉红含量较高。阴干和热风干燥能显著提高马蓝叶药效成分的总含量。建议在初加工马蓝叶时使用阴干或热风干燥,为进一步探究马蓝叶的产地加工方式提供了数据支持,同时也为评估马蓝叶的质量提供了技术支持。     

高压酒蒸黄连质量标准研究

目的:制定高压酒蒸黄连饮片的质量标准。方法:分别对高压酒蒸黄连饮片进行性状、薄层鉴别、显微鉴别、水分、总灰分和醇溶性浸出物测定;采用高效液相色谱法对酒蒸黄连饮片中的生物碱进行含量测定。结果:本品表面棕黄色至深棕色,微带焦斑,断面淡黄色至棕黄色,质硬,易折断;薄层鉴别与供试品和对照药材在相同位置有相同颜色的斑点;拟定酒蒸黄连饮片水分不得超过12.0%,总灰分不得超过3.5%,醇溶性浸出物不得少于15.0%;本品按干燥品计算,以盐酸小檗碱(C_(20)H_(18)ClNO_4)计,含小檗碱(C_(20)H_(17)NO_4)不得少于5.0%,含表小檗碱(C_(20)H_(17)NO_4)、黄连碱(C_(19)H_(13)NO_4)和巴马汀(C_(21)H_(21)NO_4)的总量不得少于3.3%。结论:初步建立了高压酒蒸黄连质量标准。     

基于体内外关联的六神曲酶活力效价检测方法研究

目的:建立基于酶活力检测的六神曲生物检定方法,完善六神曲质量控制体系。方法:选择Folin法、pNPP法分别作为消食药六神曲胃蛋白酶和脂肪酶酶活力生物效价测定方法,以消化酶片为阳性药,药物剂量间距为1∶0.6,根据简化概率单位法计算35个批次六神曲的生物效价和可信限度,对精密度、重复性、中间精密度和可靠性进行考察,优化并确定检测条件;采用营养性半固体糊粘度测定方法验证不同酶活力六神曲降低粘度的活力差异;对比研究小鼠胃肠推进与酶活力的相关性差异,评价酶活力效价与体内活力的相关性。结果:建立了基于酶活力检测的六神曲生物检定方法,方法学考察均符合要求,测定了35个批次六神曲样品胃蛋白酶活力效价范围为151.549 U/mg～337.840 U/mg,平均效价为230.622 U/mg,RSD为22.61%;脂肪酶的活力效价范围为31.944 U/mg～616.165 U/mg,平均效价为278.936 U/mg,RSD值为63.67%。营养糊粘度随着六神曲酶活力效价的升高而降低;与正常对照组比较,除S7组外,六神曲各给药组小鼠胃残留率降低,小肠推进率显著提高(P<0.01);小鼠胃残留...     

九蒸九晒人参质量标准研究

目的:建立九蒸九晒人参的质量标准。方法:采用经验、显微鉴别法对该饮片性状、粉末显微特征进行描述;采用薄层色谱法,分别以人参皂苷Rh4、20S-人参皂苷Rg3及20R-人参皂苷Rg3作为对照,对该饮片进行定性鉴别,检查了水分和总灰分;参考《中国药典》(2015年版)人参总皂苷的方法建立了特征图谱,HPLC条件为Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C_(18)(4.6mm×150mm,5μm),乙腈(A)-水(B)为流动相梯度洗脱,0min(30%A),80min(80%A),检测波长203nm,柱温25℃,流速0.8mL/min,进样量20μL,以20S-人参皂苷Rg3、20R-人参皂苷Rg3、人参皂苷Rk1和人参皂苷Rg5色谱峰保留时间与人参皂苷Rh4保留时间的比值,确定该饮片特征图谱;采用紫外分光光度法,对该饮片的人参总皂苷含量进行测定。结果:该饮片性状、粉末显微鉴别、薄层鉴别方法具有较好的专属性,水分为6.88%～10.22%,总灰分为3.18%～3.51%,特征图谱方法可靠,人参总皂苷含量为2.4854%～3.0964%。结论:根据实验结果建立了九蒸九晒人参的质量标准,其定性定量方法可靠,结果准确科学,所建标准可以用于九蒸九晒人参的质量控制。     

蛋黄油的超临界CO2萃取工艺和乙醇提取工艺考察

目的:优选超临界CO_2提取蛋黄油和乙醇提取蛋黄卵磷脂的工艺条件。方法:采用HPLC-ELSD测定磷脂酰胆碱含量,甲醇-水-冰乙酸-三乙胺(85∶15∶0.45∶0.05)作为流动相A,正己烷-异丙醇-流动相A(20∶48∶32)作为流动相B,梯度洗脱。在单因素试验基础上,分别以蛋黄油收率和PC质量分数为评价指标,通过正交试验优选超临界CO_2提取蛋黄油和乙醇提取蛋黄卵磷脂的工艺条件。结果:蛋黄油最佳萃取工艺条件为含水量≤5%的蛋黄粉在温度50℃,压力35 MPa,流量50 L·h-1的条件下萃取2 h,蛋黄油收率42.65%;超临界CO_2萃取后的蛋黄残粉加4倍量90%乙醇提取4次,每次1.5 h,磷脂酰胆碱质量分数17.24%。结论:优选的蛋黄油提取工艺稳定可行,为蛋黄油的开发和应用提供参考。     

基于“生消熟补”理论的三七补血作用及其机理研究

目的：对比生、熟三七粉对环磷酰胺所致血虚小鼠的治疗作用,并研究其机理。方法：108只KM小鼠按体重随机分为空白组,模型组,阳性组,生、熟三七低、中、高剂量组,每组12只。其中生、熟三七粉按低、中、高剂量（585 mg·kg-1,1170 mg·kg-1,2340 mg·kg-1）、阳性组以8 mL·kg-1剂量灌胃复方阿胶浆,连续12 d,自给药起前3 d以70 mg·kg-1剂量连续腹腔注射环磷酰胺生理盐水溶液制作血虚模型,试验结束后以外周WBC、RBC、Hb、PLT及脏器指数（脾脏、胸腺）为指标对生、熟三七补血作用进行比较;并以流式细胞技术测定骨髓DNA含量及骨髓细胞CD34+的表达,结合CFU-GM、BFU-E、CFU-E、CFU-Meg的培养研究熟三七的补血机制。结果：与空白组相比,模型组小鼠外周WBC、RBC、HB及PLT、脏器指数均有极显著下降（P<0.01）,骨髓DNA含量及CD34+均显著下降（P<0.01）;与模型组相比,熟三七高、中、低剂量组均能显著升高外周WBC、RBC、Hb、PLT（P<0.05）,并均能显著提高脏器指数（胸腺、脾脏）（P<0.05）,同等剂量生三七则无明显效果;与模型组相比,熟三七组骨髓DNA及细胞CD34+表达率均有显著升高（P<0.05）,CFU-GM、BFU-E、CFU-E、CFU-Meg集落数均有显著增加（P<0.05）。结论：熟三七可通过促进骨髓细胞增殖而达到补血的功效。     

熟三七对Lewis肺癌的抑制及对联合用药的增效减毒作用研究

目的：考察熟三七粉对Lewis肺癌的抑制作用及与紫杉醇、培美曲塞二钠联合用药的增效减毒作用。方法：首先将接种Lewis肺癌的C57BL/6小鼠按体重随机分为模型组,阳性组,生、熟三七低、中、高剂量组,每组13~14只。其中生、熟三七粉按低、中、高剂量（585 mg·kg-1,1170 mg·kg-1,2340 mg·kg-1）连续灌胃15 d,阳性组以60 mg·kg-1剂量于第1天腹腔注射CTX 1次,试验结束后计算抑瘤率,并统计给药前后体重、体重比值（FBW/IBW）、死亡情况;再将新接种Lewis肺癌的C57BL/6小鼠按体重随机分为9组,每组10只,即模型组（0.5% CMC-Na溶液）、熟三七组、生三七组、紫杉醇组、熟三七联合紫杉醇组、生三七联合紫杉醇组、ALIMTA组、熟三七联合ALIMTA组、生三七联合ALIMTA组。生、熟三七以1170 mg·kg-1连续灌胃给药15 d,紫杉醇（10 mg·kg-1）、ALIMTA（120.3 mg·kg-1）自给药第1天起每3 d腹腔注射1次,共3次。试验结束后计算抑瘤率,测定外周血象,并考察给药前后体重、体重比值（FBW/IBW）、死亡情况。结果：与模型组相比,熟三七（1170 mg·kg-1）具有极显著抑瘤率41%（P<0.01）、生三七（2340 mg·kg-1）具有显著抑瘤率（P<0.05）,但无临床意义,且表现出一定不良反应;生、熟三七与紫杉醇、ALIMTA连用均能提高抑瘤率,且熟三七表现出降低紫杉醇毒副作用的趋势,而生三七却表现出一定不良反应。结论：熟三七能显著抑制Lewis肺癌生长,与化药联合使用可表现出较好协同作业用,并可拮抗紫杉醇毒副作用;生三七对肿瘤生长的抑制不具有临床意义,虽在联合用药中表现出较好的协同作用,但不良反应明显。