CRISPR/Cas系统在分子检测中的应用

近年来,成簇规律间隔短回文重复序列/成簇规律短回文重复序列相关蛋白(CRISPR/Cas)系统凭借其简单、高效的基因编辑能力,已被广泛应用于生物、医学等多个研究领域。随着CRISPR技术的快速发展,CRISPR/Cas系统已被开发为一种快速、便携、低成本、高灵敏度的分子检测工具,在病原体检测、耐药性分析、单核苷酸多态性(SNP)分型、肿瘤基因突变检测等方面取得重大突破。文章就不同Cas蛋白在分子检测中的最新研究进展进行综述,并对其应用前景进行展望,以期为从事相关领域的科研工作者提供参考与帮助。     

维拉帕米对心肌及红细胞Ca2+-ATPase的不同作用

 本文研究了维拉帕米对心肌及红细胞Ca²⁺-ATPase的作用。将40只家兔随机分为2组，分别给予维拉帕米（0.5mg/kg）和等量20%GS静脉注射，结果发现：维拉帕米可使兔心肌Ca²⁺-ATPase活力升高，使红细胞Ca²⁺-ATPase的活力明显下降。     

儿童幕上恶性神经胶质瘤化疗与放疗之结果

脑瘤是儿童最常见的实质性肿瘤,16岁以下其发生率约为2.5/10万,占儿童全部恶性肿瘤的16%。幕上神经胶质瘤占原发性脑肿瘤的60%,且复发率高,预后差,平均生存期通常少于45周。儿童幕上肿瘤的早期治疗一般是手术切除或活检,继之以放疗,神经胶质瘤放疗后亦易复发。而化疗辅以放疗可以延长成年人恶性脑瘤的存活时间,故有人提倡用类似疗法治疗儿童幕上神经胶质瘤.作者于1975年1月至1982年6月将治27例年龄在1.2～17.9岁之间的幕上恶性神经胶质瘤,其中女17例,男10例.组织学检查诊断:4例为多形性胶     

人乳头瘤病毒16和18型核酸检测用质控品制备及其应用

目的制备可模拟真实临床标本的HPV-16和HPV-18核酸检测用质控品,并用于上海地区临床实验室的室间质量评价。方法分别选择整合有HPV-16和HPV-18 L1基因的宫颈癌细胞系(Siha和Hela)进行培养,收集细胞后用HPV国际标准品定值并分装,对其均匀性和稳定性进行评价,然后将样本盘发送至参评实验室,对回报结果进行分析评价。结果均匀性评价结果显示质控品间均匀性良好,稳定性评价结果表明质控品检测结果随时间延长无明显趋势变化。参评实验室对高浓度样本的检测符合率较高,低浓度样本的检测符合率较低。对于不分型项目,26%参评实验室由于上报假阴性结果导致出错。对于分型项目,不同检测方法的结果间没有显著差异,样本检测出错主要是因为错检或漏检某一亚型所致。结论制备的核酸检测用质控品的均匀性和稳定性良好,可有效用于临床实验室室间质量评价。质评结果显示上海地区参评实验室HPV核酸检测质量整体较好,个别实验室检测能力尚需提高。     

CYP3 A5基因检测质控品制备及其应用研究

目的通过构建体外质粒DNA作为质控样品开展他克莫司代谢基因——细胞色素P450 3A5(CYP3A5)基因检测室间质量评价计划(简称室间质评),评估参评实验室检测能力及存在的问题,提高临床实验室CYP3A5基因的检测质量。方法利用基因工程技术体外构建含CYP3A5*3(rs776746)位点上、下游序列的重组质粒,筛选CYP3A5*3 AA和GG基因型分别作为野生型和突变型样品,两者等比例混合后作为杂合突变型样品,并制备质控样品盘开展室间质量评价。依据回报结果计算各实验室成绩,汇总不同样品的总体符合率,并分析不同检测方法的符合率和检测错误类型。结果体外构建的重组质粒经Sanger测序验证分别含CYP3A5*3位点野生型和突变型序列。2017年两次室间质评中成绩满分的实验室分别为93.33%(14/15)和100%(17/17)。两次室间质评中,样品检测的总体符合率分别为96%(72/75)和100%(85/85)。荧光分子杂交法检测的样品符合率均为100%; Sanger测序法检测样品符合率为90%(27/30)和100%(40/40)。结论制备的质控样品能够有效监测试剂检测性能,具有良好的适用性。各实验室在CYP3A5*3基因位点检测总体准确率较高,但个别实验室检测能力有待提高。室间质评计划能帮助实验室发现检测中存在的问题,提高检测质量。     

AFP和AFP异质体对405例原发性肝癌的诊断价值探讨

目的 探讨甲胎蛋白（AFP）和甲胎蛋白异质体（AFP Variants,AFP-V)对原发性肝癌（PHC）的诊断价值。方法 用酶联免疫吸附试验（ELISA）和交叉免疫电泳、放射性自显影法分别检测AFP和小扁豆凝集素亲和性甲胎蛋白异质体（LCA－AFP－V）的血清含量。结果 405例PHC患者中，AFP阳性占75．8％，LCA－AFP－V阳性占54．3％；210例AFP低浓度阳性患者中，LCA－AFP－V阳性125例，而97例AFP高浓度阳性患者，有95例伴有异质体的升高；98例AFP阴性患者中，35例LCA－AFP－V阳性；223例非PHC中AFP阳性占42．2％，LCA－AFP－V阳性占25．6％。结论 单独应用AFP或AFP－V均有一定的局限性，两者联合使用将有助于提高原发性肝癌的检出率。     

血浆Septin9基因甲基化检测质控品制备及其应用

目的制备可模拟临床标本的血浆Septin9基因甲基化(mSEPT9)质控品并用于室间质量评价。方法选择Septin9区域已发生/未发生甲基化的HeLa/Jurkat细胞进行培养,收集并抽提细胞基因组DNA,经mSEPT9试剂盒检测,依据检测Ct值用阴性血浆稀释分装成含有不同浓度的质控品,对质控品均匀性和稳定性进行评价后,将5个样品随机编号后发送至参评实验室,分析评价回报结果。结果抽提得到的细胞基因组DNA纯度和浓度均可满足使用需求,且可用作mSEPT9检测的质控品。均匀性和稳定性均符合中国合格评定国家认可委员会对能力验证样品要求。部分参评实验室出现假阳性和假阴性情况,仅有约55.6%实验室的检测结果(Ct值)呈良好线性相关。9家参评实验室中,7家实验室(77.8%)成绩优秀,1家实验室(11.1%)成绩合格,1家实验室(11.1%)成绩不合格。结论成功研制血浆mSEPT9检测的质控品并应用于室间质评,有利于评估并提升临床实验室检测能力。     

乙型肝炎病毒YMDD突变室间质量评价调查品制备及应用

目的制备乙型肝炎病毒(HBV)YMDD突变室间质量评价(EQA)调查品,评估上海地区临床实验室检测HBV YMDD突变的能力。方法筛选HBV DNA5×104 IU/ML的临床样本,经稀释制成含HBV YMDD不同突变类型的样本盘。采用实时荧光聚合酶链反应(PCR)、高温连接酶反应(LDR)和测序法筛选EQA候选样本,并采用PCR评估样本均匀性和稳定性。2017年2次EQA各制备5份样本,要求参评实验室在规定时间内检测样本并上报检测结果。对回报结果进行分析。结果 2017年2次EQA分别收到12份和10份有效回报结果,66.67%的实验室检测结果完全正确。HBV YIDD、YVDD、YIDD+YVDD和YMDD不同突变样本的检测符合率分别为90.63%、86.36%、77.27%和88.24%。结论制备的调查品均匀、稳定,可用于EQA;部分临床实验室HBV YMDD突变检测能力尚需提高,应加强质量控制以保证检测结果的准确性。     

食品药品安全应急处置技术支撑能力的建设与实践

本文针对食品药品安全应急处置的需要,建立了上海市食品药品检验所（下面简称我所）处置食品药品突发事件的操作流程和技术流程（组织能力建设）,列出了我所在食品药品领域的关键技术建设（技术能力建设）,指出了继续建设的方向,并建立了所外的合作实验室,作为我所的技术支撑能力的补充,提出了我所及我市建立信息数据库建设的可行性和迫切性（信息能力建设）。同时列举了今年我所有意识加强案件应急处置技术支撑的事例,对食品药品安全应急处置技术支撑能力进行了实践,验证了建立的食品药品安全应急处置能力。     

极量运动对红细胞Ca~(++)-ATP酶Mg~(++)-ATP酶及Ca~(++)、Mg~(++)的影响

运动可对人体产生一系列影响,可使血液成份发生相应的改变。目前了解较多的血液成份变化包括血K~+、Na~+、Mg~(++)、血清酶、血糖、乳酸、激素和血容量变化等、但运动对红细胞ATPase及细胞内离子的变化国外尚未见报道。本文旨在了解极量运动对红细胞Ca~(++)-ATPase、Mg~(++)-ATPase及Ca~(++)、Mg~(++)的影响及其意义。