新型冠状病毒中和抗体生物学活性的测定

目的 开发针对新型冠状病毒中和抗体生物学活性及免疫学特性分析的方法。方法 使用生物膜层干涉法(biolayer interferometry, BLI)分析9MW3311中和抗体Fab和S1-RBD的亲和力常数;分别使用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)和流式细胞分选法评价中和抗体结合片段(antibody binding fragment, Fab端)和S蛋白的相对结合活性和对ACE2的阻断结合活性;使用假病毒体系评价中和抗体的体外细胞学活性;使用表面等离子共振法(surface plasmon resonance, SPR)测定抗体Fc段与Fcγ和FcRn受体的亲和力常数;使用ELISA法测定抗体Fc段和C1q受体的结合活性;采用PBMC法确定中和抗体的体依赖细胞介导的细胞毒性作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity, ADCC)、补体(First subcomponent of the C1 complex)介导的细胞毒性作用(complement depend...     

报告基因法测定重组人白细胞介素-2产品生物学活性的研究

目的:建立测定重组人白介素-2(recombinant human interleukin-2, rhIL-2)制品生物学活性的报告基因法(reporter gene assay, RGA)。方法:根据ICH Q2和《中华人民共和国药典》 2020年版指导原则,构建慢病毒转染表达荧光素酶(luciferase, Luc)的C8166细胞,进行rhIL-2生物学活性测定方法学优化与验证,优化内容包括孵育时间、细胞数量、待测样品的初始浓度和稀释比例;验证内容包括特异性、线性和准确性、精密度和耐用性。结果:优化后的检测条件为：孵育时间为24 h;细胞接种密度为1×10⁵细胞·孔^-1;待测样品以10 000 IU·mL^-1为起始浓度1∶3稀释10个梯度。荧光信号值强度与待测样品浓度拟合四参数曲线,计算相对效价。选用不同作用类型的细胞因子进行特异性验证均符合应用要求。采用50%,75%,100%,125%和150%的5个浓度点验证线性和部分准确性,实测与理论效价线性回归分析相关系数R²=0.993 1,各浓度...     

手持拉曼光谱仪在抗体类药物鉴别中的应用研究

目的：基于主成分分析（PCA）算法的Trutools模式，利用手持拉曼光谱仪建立快速鉴别抗体类药物的方法。方法：通过选取抗PD-1抗体、抗VEGF抗体、抗Her-2抗体，采集拉曼光谱数据，建立数据模型，分别对3种抗体进行鉴别。选择其中一种抗PD-1抗体，采用加热和光照两种条件对其进行加速降解处理，利用手持拉曼光谱仪对加速降解的抗体进行检测，研究所建方法能否检出加速降解的抗体。并通过分子排阻色谱（SEC-HPLC）、离子交换色谱（IEC-HPLC）及竞争结合酶联免疫吸附测定（ELISA）法对加速降解的抗体进行检测，与拉曼光谱检测结果进行比较。结果：通过建立的拉曼光谱数据模型可以鉴别3种不同类型的抗体，且拉曼光谱可以鉴别加速降解后的抗PD-1抗体。结论：手持拉曼光谱仪可以用来快速鉴别抗体类药物。本研究首次将手持拉曼光谱仪引入到抗体药物大分子检测中，为抗体类药物的现场快速鉴别及打假工作提供了新的工具与方法。