RBM8A基因对子宫内膜癌HEC-1A细胞增殖、迁移和凋亡的作用及其机制

目的探讨沉默RBM8A基因表达对子宫内膜癌HEC-1A细胞生物学行为的影响及其可能机制。方法设计RBM8A基因靶向的发夹状shRNA,筛选出最佳shRNA沉默片段,构建携带有目的基因的重组慢病毒干扰载体并感染HEC-1A细胞,通过嘌呤霉素筛选出稳定敲低RBM8A基因的细胞作为实验组(shRBM8A),同时设计无意义序列的shRNA作为对照组(shControl)。CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell检测细胞迁移和侵袭能力,流式细胞计数法检测细胞凋亡,Western blot法分析凋亡相关蛋白、上皮间质转化(EMT)信号转导通路相关蛋白的表达。结果与shControl组比较,敲低RBM8A后HEC-1A细胞增殖减慢,凋亡率增加,且迁移与侵袭能力受到明显抑制(P<0.05),凋亡相关蛋白cleaved-caspase 9和cleaved-caspase 3表达增加,EMT相关蛋白E-cadherin表达升高,Vimentin表达降低。结论沉默RBM8A基因可抑制子宫内膜癌细胞增殖、迁移、侵袭并促进细胞凋亡,抑制EMT信号转导通路可能是其作用机制。     

小儿喘宝对哮喘大鼠血清及肺泡灌洗液Th1/Th2平衡的影响

目的:研究小儿喘宝对哮喘大鼠血清及肺泡灌洗液中Th1/Th2平衡的影响,探索其治疗哮喘的作用机制。方法:采用卵蛋白(OVA)致敏、激发的方式制作大鼠慢性哮喘模型,以地塞米松为对照药。通过对哮喘大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞涂片中嗜酸性粒细胞(EOS)的计数,血清及肺泡灌洗液(BALF)中IFN-γ、IL-4含量以及IFN-γ/IL-4比值的测定,探索小儿喘宝治疗哮喘大鼠的作用机制。结果:小儿喘宝可减轻大鼠的哮喘症状,减少BALF中EOS的数量,降低血清及BALF中IL-4的含量,升高血清及BALF中IFN-γ的含量,升高IFN-γ/IL-4的比值。结论:小儿喘宝能升高哮喘大鼠血清及肺泡灌洗液中IFN-γ/IL-4的比值,从而纠正失衡的Th1/Th2,这可能是小儿喘宝调节哮喘的作用机制之一。     

补肾益髓方及其拆方对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠脑和脊髓中p-Tau和Beta-tubulin表达的影响

目的:观察补肾益髓(Bu Shen Yi Sui,BSYS)方及其拆方补肾(Bu Shen,BS)和化痰活血(Hua Tan Huo Xue,HTHX)方对实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental Autoimmune Encephalomyelitis,EAE)小鼠脑和脊髓中p-Tau和Beta-tubulin的作用。方法:C57BL/6小鼠雌性随机分为正常对照(NC)、模型(MO)、醋酸泼尼松(PA)、梓醇(CA)、BSYS、BS和HTHX组。造模当天与造模后第7天于小鼠背部两侧皮下注射抗原,即50μg髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)35-55、完全弗氏佐剂(CFA)与结核分支杆菌(TB)混合,并在免疫当天和2 d后腹腔注射500 ng的百日咳毒素(PTX)。每天对小鼠进行灌胃,观察其体重及神经功能评分,并于造模第20 d和第40 d分别取脑和脊髓进行病理检测。采用免疫组化法检测p-Tau和beta-tubulin的表达。结果:与MO组比较,BSYS、BS和HTHX组体重与神经功能评分均出现明显上升,HE染色可观察到炎细胞显著减少,核固缩减轻,同时,BSYS、BS和HTHX方均可明显下调p-Tau表达(P0.05,P0.01),上调beta-tubulin蛋白表达(P0.05,P0.01)。结论:BSYS方及其拆方BS和HTHX均对EAE小鼠有神经保护作用,表现在减少体重丢失,降低神经功能评分,减轻炎炎性细胞浸润,减轻轴突损伤及促进其修复,尤以BSYS全方更为显著。     

糖肾宁对高糖诱导的足细胞损伤模型Rho/ROCK通路的影响

目的：基于Rho/ROCK信号通路研究中药糖肾宁对高糖诱导足细胞损伤模型的影响。方法：高糖培养足细胞,以不同药物分组干预足细胞24 h,用罗丹明染色的鬼笔环肽法检测足细胞骨架,细胞免疫荧光检测足细胞标志蛋白Nephrin,Western Blotting检测RhoA、ROCK1、Nephrin蛋白的表达。比较不同药物或药物浓度对高糖诱导足细胞损伤模型的影响。结果：糖肾宁可改善足细胞骨架结构,下调高糖诱导的足细胞损伤模型中异常升高的RhoA和ROCK1蛋白表达,上调Nephrin表达。结论：中药糖肾宁可抑制高糖诱导的足细胞损伤模型RhoA/ROCK1信号通路,减轻足细胞骨架重构,改善足细胞损伤。     

补肾益髓方及其拆方对自身免疫性脑脊髓炎小鼠脑和脊髓中BDNF/TrkB的影响

目的:观察补肾益髓(Bu Shen Yi Sui,BSYS)方及其拆方补肾(Bu Shen,BS)和化痰活血(Hua Tan Huo Xue,HTHX)方对实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental Autoimmune Encephalomyelitis,EAE)小鼠脑和脊髓中脑源性神经营养因子(Brain-derived Neurotrophic Factor,BDNF)与受体Trk B的影响。方法:将EAE造模小鼠于当天和第7天背部皮下注射髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein,MOG)35-55抗原,并在免疫当天和第2天后腹腔注射百日咳毒素(Pertussis toxin,PTX)。每日对小鼠进行不同药物的灌胃,并于造模第20和40天分别取脑和脊髓,采用实时荧光定量RTPCR(qRT-PCR)与Western Blot法检测BDNF和Trk B的表达。结果:BSYS及其拆方BS方与HTHX方均可明显上调EAE小鼠脑和脊髓BDNF和Trk B mRNA与蛋白的表达,与模型组比较,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。BSYS方作用优于其BS与HTHX方,但差异无统计学意义(P0.05)。结论:BSYS及其拆方促进轴突修复的作用可能与增强BDNF/Trk B表达有关,BSYS全方更有显著趋势。