脑力智宝对PC12细胞缺血性损伤的保护作用

用ＮａＣＮ加缺糖造成的ＰＣ１２细胞缺血性损伤模型,研究脑力智宝含药血清对细胞的保护作用。并对所取含药血清时不同的给药次数,采血时间和含药血清加入量等实验方法进行了探讨。结果表明,单次给药后０．５、１．２、３ｈ所采集的含药血清不具有细胞保护作用,而两次给药（间隔２ｈ）后１ｈ,２ｈ的含药血清具有明显的保护作用。每日两次给经连续３．５ｄ（７次给药）各时间点的含药血清均有明显的细胞保护作用。血清加入量以５     

脑力智宝对D-半乳糖所致亚急性衰老小鼠的作用

目的:观察脑力智宝对D-半乳糖致亚急性衰老小鼠的影响.方法:以D-半乳糖制备亚急性衰老小鼠模型,测定脑中脂褐素、ATPase活性及皮肤羟脯氨酸含量;并进行脑病理组织学检查.结果:脑力智宝可明显降低脂褐素的含量,升高羟脯氨酸的含量,改善脑能量代谢,改善蛋白质的结构组成,改善D-半乳糖所引起的神经元变性等病理组织学改变.结论:脑力智宝具有明显的抗衰老作用.     

脑力智宝对乳鼠脑皮质神经细胞和PC12细胞生长发育的影响

目的:从细胞学角度研究脑力智宝在维持神经元存活和促进神经突起生长方面的保护作用。方法:将SD大鼠分为脑力智宝提取物高剂量组(0.63g/L)、低剂量组(0.04g/L)和对照组,连续给药7次后眼球取血制备含药血清,用MTT法检测脑力智宝对原代培养神经细胞生长发育的影响;用分散培养法培养PC12细胞,测定加入不同浓度脑力智宝提取物(0.63和0.04g/L)、脑力智宝含药血清(6和3g/kg)、神经生长因子后PC12细胞在24,48和72h的突起阳性细胞百分比。结果:脑力智宝对PC12细胞具有营养作用,使细胞突起增加增长,阳性细胞数增多,48h时0.63g/L脑力智宝提取物可使阳性细胞百分数从模型组的17.2%提高到38.4%(t=4.89,P<0.01),3g/kg脑力智宝含药血清可使阳性细胞百分数达到69.0%(t=9.37,P<0.01),并可促进原代培养鼠脑皮质神经细胞的生长发育,MTT法检测A值明显增加,尤以0.63g/L脑力智宝提取物(t=4.79,P<0.01)和3g/kg脑力智宝(P<0.01,t=8.81)组作用明显。0.63g/L脑力智宝提取物可显著促进PC12细胞增殖,在2,4和6d时分别可使PC12细胞数目较对照组分别增加1.56,1.85和2.96倍,差异均有显著性意义(t=2.67,5.27,3.12;P<0.05～0.01),均与对照组比较有显著性差异;6g/kg含药血清组亦显著增加。脑力智宝提取物和含药血清均可促进无血清培养神经     

丁酸钠通过维持乙酰化平衡改善帕金森病模型鼠认知功能和情感障碍

目的研究丁酸钠对帕金森病(Parkinson’s disease,PD)模型小鼠认知功能和情感障碍影响及机制。方法C57BL/6J鼠随机分为对照组、MPTP组、丁酸钠组、MPTP+丁酸钠组,通过悬尾实验和Morris水迷宫实验研究丁酸钠对PD模型鼠认知功能和情感障碍的影响;Western blot和RT-PCR检测酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)和组蛋白去乙酰化酶1(histone deacetylase 1,HDAC1)蛋白表达和mRNA水平。结果与对照组比较,PD模型鼠表现为学习记忆能力下降和抑郁样行为;丁酸钠能够改善PD模型鼠抑郁行为,并明显提高PD模型鼠学习记忆能力;丁酸钠可使PD模型鼠脑组织TH和HDAC1蛋白表达和mRNA水平明显升高。结论 MPTP诱导TH蛋白表达明显降低,引起PD模型鼠认知和情感障碍,可能是干扰了组蛋白乙酰化平衡;丁酸钠能够使PD模型鼠脑组织TH表达明显升高,改善PD模型鼠认知功能和情感障碍,主要是通过保护多巴胺神经元、修复和维持组蛋白乙酰化和去乙酰化动态平衡来完成的。     

Engrailed基因对中脑多巴胺能神经元发育的影响

神经系统在结构和功能上都是一个高度复杂的系统,发育生物学虽为生物学中重要的领域,近20年来因新技术的引进,使得发育研究进人基因层次,能更清楚地了解控制机制。中脑多巴胺（midbrain dopamine,mDA）能神经元是哺乳动物中枢神经系统多巴胺的主要来源,对中脑多巴胺神经元的发育过程及其调节机制的研究是神经发育生物学的重要问题,多巴胺神经元的发育是一包括多种转录因子和生长因子参与的严格控制过程。     

表达CTLA4抗体的重组流感病毒构建及溶瘤效果研究

目的拯救表达免疫检查点CTLA4抗体的重组流感病毒,全面鉴定并体内外实验评价其溶瘤效果。方法利用流感病毒反向遗传学(reverse genetics,RG)技术,以A/Puerto Rico/8/34(PR8)为载体,分别在PR8病毒PB1和PA基因片段插入免疫检查点CTLA4抗体的重链和轻链构建重组质粒pFlu-CTLA4-PB1、pFlu-CTLA4-PA,与PR8病毒的其余6个质粒pHW191-PB2、pHW194-HA、pHW195-NP、pHW196-NA、pHW197-M、pHW198-NS共转染COS-Ⅰ和MDCK细胞,经拯救、筛选、鉴定获得重组溶瘤流感病毒,命名为rFlu-muCTLA4。通过血凝试验、EID_(50)、PCR等方法全面鉴定;ELISA测定anti-CTLA4抗体含量;3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulphophenyl)-2H-tetrazolium 3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5(MTS)细胞活力测定重组病毒对小鼠肝癌H22细胞的杀伤效果;利用小鼠肝癌模型,评价重组病毒在体内对肿瘤的抑制效果。结果 rFlu-muCTLA4的血凝效价为2~9～2~(10),且能够在鸡胚中稳定传代;EID_(50)为10~(-8)EID_(50)/ml;重组病毒的PB1、PA片段与预期大小一致;重组病毒接种鸡胚培养2 d可检测到anti-CTLA4抗体,4天达到高峰值。MTS结果显示,rFlu-muCTLA4能特异性杀伤H22细胞活力,呈现剂量依赖性。动物实验表明,重组病毒能显著减小小鼠肝癌肿瘤体积,提高动物存活率并延长存活时间。结论表达免疫检查点CTLA4抗体的重组流感病毒rFlu-muCTLA4在体内外能靶向杀伤肝癌细胞,有望为溶瘤病毒靶向治疗肝癌提供新的思路。     

神经干细胞分化的表观遗传学调节

<正>中枢神经系统(central nervous system,CNS)主要由神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞组成。长期以来认为成年哺乳动物的CNS缺乏再生能力,神经系统损伤后不能通过神经系统的增殖来替代丢失的神经元。1992年Renyolds等[1]从成年小鼠纹状体分离得到能在体外不断增殖,且具有多种     

叶酸对母婴分离引起小鼠成年焦虑样行为影响的初探

目的：探究叶酸对母婴分离小鼠的行为学影响。方法：将新生昆明小鼠分为对照组、模型组和叶酸组，待成年后进行行为学测试。结果：与对照组比较，模型组小鼠在旷场实验中的活动和探索行为减少，叶酸可以逆转这一状况；模型组小鼠在十字高架实验中的活动和探索行为下降，叶酸组与模型组比较未有统计学差异；在新事物识别实验中，模型组小鼠的识别率显著低于对照组，表现出识别新事物能力明显减弱，而叶酸可以明显改善母婴分离小鼠的识别新事物能力；在明暗箱实验中，母婴分离使小鼠更趋向在暗箱活动，而叶酸组小鼠不仅活动增加，且更倾向于在明箱活动。结论：母爱剥夺可引起小鼠成年期焦虑样行为和学习记忆能力下降，而叶酸可以改善这些状况。     

血脑屏障上的P—糖蛋白

Ｐ－糖蛋白是由多药耐药性基因编码的一个ＡＴＰ依赖性的药物外排泵，首先在肿瘤细胞上发现，也存在于脑毛细血管内皮细胞的腔面，使用体外培养的脑毛细血管内皮细胞、体内脑灌流技术、脑微透析技术和ｍｄｒ１ａ基因缺失鼠模型研究表明，Ｐ－糖蛋白主动排出许多化合物，如长春新碱、环孢素Ａ、秋水仙碱等，使它们的脑通透性降低，给予Ｐ－糖蛋白逆转剂可增加它们的脑浓度。因此，详细了解这个外排泵的作用机制，对研究靶药到脑或减少     

脑力智宝及其含药血清对硝普钠诱导的PC12细胞凋亡的影响

目的探讨中药脑力智宝对PC12细胞凋亡的抑制作用及机制。方法以硝普钠(sodium nitro- prusside,SNP)诱导的PC12细胞凋亡为模型,采用血清药理学方法,用荧光显微镜观察细胞形态学的改变,流式细胞仪检测DNA含量及凋亡细胞百分率,免疫组织化学检测Bcl-2蛋白的表达,以DPH为荧光探针检测细胞膜的流动性。结果脑力智宝提取物及含药血清能减轻SNP引起的细胞核形态学的改变,减少凋亡细胞数,使SNP诱导的PC12细胞凋亡百分率明显下降,凋亡峰显著降低,并能提高Bcl-2蛋白的表达,增加细胞存活率,增加膜流动性。结论脑力智宝对SNP诱导的PC12细胞凋亡具有抑制作用。并可能是通过促进Bcl-2蛋白表达,增加细胞膜流动性等途径而抑制细胞凋亡的。