阴离子脂质体介导的腺病毒/卡莫司汀共转运系统载药量测定

目的建立一套有效可靠的检测方法,以测定阴离子脂质体介导的腺病毒和化疗药卡莫司汀共转运载体系统中腺病毒和卡莫司汀的含量。方法以钙离子融合法制备共转运载体复合物;根据腺病毒(Ad5)的hexon基因序列设计用于Taqman探针荧光定量聚合酶链式反应(PCR)的引物和探针序列,优化反应体系,从而准确测定腺病毒含量;优化色谱条件,建立针对共转运载体复合物检测卡莫司汀含量的高效液相色谱法。结果以荧光定量聚合酶链式反应法测得共转运载体复合物中腺病毒载药量为(23.2±1.8)%;高效液相色谱法测得卡莫司汀在共转运载体复合物中的载药量为(55±2.8)%。结论本实验成功建立了分别用于测定共转运载体系统中腺病毒和卡莫司汀含量的荧光定量聚合酶链式反应和高效液相色谱法;这两种检测方法操作简便、准确可靠,具有一定的普遍适用性。     

中心组合设计法优化前阳离子脂质体的制备工艺

目的:采用中心组合设计法优化前阳离子脂质体的制备工艺,考察前阳离子脂质体的有关性质。方法:以薄膜分散膜挤压法制备前阳离子脂质体,以平均粒径、转染效率为指标,对鱼精蛋白(protamine)与质粒DNA的质量比、CHETA([2[[4-[羧甲基]二硫-1-亚氨丁基]氨基]乙基]氨基甲酸胆固醇酯)摩尔百分比浓度、CHETA与质粒DNA的质量比3个自变量的各个水平进行二项式拟合,通过响应面分析选取较佳工艺条件。以LacZ为报告基因转染HepG2细胞,定量测定β-半乳糖苷酶活性和总蛋白含量计算转染效率。结果:影响平均粒径、转染效率的3个主要因子的最佳取值分别为:protamine/DNA,2.5∶1;CHETA(mol%),45;CHETA/DNA,4∶1。优化条件制备的前阳离子脂质体形态近似于球体,平均粒径为(228.9±8)nm,多分散指数为0.122±0.02(n=3),Zeta电位为-(25.08±2.5)mV(n=3),载基因前阳离子脂质体转染HepG2肝癌细胞转染效率为(24.26±2.6)mUβ-半乳糖苷酶/mg protein。结论:中心组合设计应用简便、预测性好,制备的前阳离子脂质体符合设计要求。     

网络蠕虫研究及其可视化方法探讨

高速网络中的蠕虫能以无法预料的高速率传播,因此需要设计一个高效的自动防御系统,这需要高度可信的准确度以及实时的流量分析。针对这些问题提出了利用蠕虫的信息流量可视化进行监测。利用数据包的源IP和目标IP以及目标端口所构成的三维变量的变化来辨别蠕虫的扫描,从而设计一个高效的蠕虫检测分类规则。     

丁酸前药BBA纳米晶的构建及其对结肠癌细胞的抑制作用

目的 本研究将丁酸与5-氨基水杨酸（5-aminosalicylic acid,5-ASA）通过化学反应合成2-丁酰氧基-5-丁酰胺基苯甲酸（2-butyloxide-5-butylaminobenzoic acid,BBA）,作为治疗结肠癌的前体药物,利用纳米技术制备BBA纳米晶缓控释制剂,并探讨BBA纳米晶对结肠癌细胞的抑制作用。方法 采用溶剂反溶剂沉淀法制备BBA纳米晶,通过核磁共振扫描、红外光谱仪和透射电镜等进行物理化学表征;使用高效液相色谱法检测含量;并通过MTT实验检测不同浓度的BBA、BBA纳米晶、空白纳米晶、5-氟尿嘧啶、5-氨基水杨酸和丁酸钠与结肠癌细胞SW620共同孵育24、48、72 h后细胞的存活率,以探索BBA纳米晶对结肠癌细胞SW620的抑制效果。结果 本实验成功制备了BBA纳米晶。MTT结果显示,作用时间为24 h时,各个浓度条件下BBA纳米晶与BBA对结肠癌细胞SW620的抑制率较低,两组间差异无统计学意义（P> 0.05）;作用时间分别为48 h和72 h,药物浓度为30μm和40μm时,BBA纳米晶对结肠癌细胞SW620的体外抑制效果低于阳性对...     

脂质超声微泡增强AAV介导的致密结构细胞的基因转导

目的:探讨超声介导的脂质微泡能否增强腺相关病毒(AAV)对具有致密结构的细胞的转导效率.方法:制备载AAV-eGFP的脂质超声微泡,以Malvern粒度检测仪检测微泡粒径及分布,选用人支气管上皮细胞16HBE14o-为模型细胞,采用Transwell小室细胞培养技术培养具有紧密结构的人支气管上皮细胞16HBE14o-,利用倒置荧光显微镜定性观察转导效率,采用流式细胞技术进一步定量检测转导效率.结果:本试验制备的载AAV脂质超声微泡呈圆球形均匀分布,平均粒径为2.46±1.2 μm;脂质微泡携同超声处理能显著增强AAV对形成致密结构的人支气管上皮细胞16HBE14o-转导效率.结论:超声介导脂质微泡为AAV在基因治疗中的应用提供了一种新的途径,为AAV在体内的靶向应用奠定了基础.     

髂骨重建微型锁定接骨板内固定治疗尺骨冠状突Regan-Morrey Ⅲb型骨折的临床观察

目的探讨髂骨重建微型锁定接骨板内固定治疗尺骨冠状突Regan-Morrey Ⅲb型骨折的临床疗效。方法回顾性分析自2014-01—2018-01诊治16例冠状突Regan-MorreyⅢb型骨折,术中取肘前方内侧部S入路,切开皮肤皮下组织,显露并纵向切开肱二头肌腱膜,行取自体髂骨重建及微型锁定接骨板内固定,同时治疗相关合并损伤。结果 16例均顺利完成手术并获得完整随访,随访时间12~48个月,平均26.2个月。未出现切口感染、创伤性关节炎、关节僵硬、异位骨化、内固定松动及断裂等并发症。骨折愈合时间12~21周,平均16.3周。末次随访时肘关节功能指数:屈曲120°~136°,平均126.0°;伸直0°~9°,平均3.2°;前臂旋前75°~90°,平均86.0°;前臂旋后82°~98°,平均88.6°;Mayo肘关节功能评分82~97分,平均86.3分,疗效按Mayo肘关节功能评分评价:优6例,良10例。结论髂骨重建微型锁定接骨板内固定治疗尺骨冠状突Regan-MorreyⅢb型骨折髂骨取材区域宽广、可塑性强、易于骨融合,可获得良好疗效。     

星点设计优化非病毒载体前阳离子脂质体的制备工艺

目的 采用星点设计优化前阳离子脂质体的制备工艺并考察前阳离子脂质体的有关性质.方法 以薄膜分散膜挤压法制备前阳离子脂质体,以平均粒径、转染效率为指标,考察鱼精蛋白(Protamine)与质粒DNA的比例、脂质体骨架材料CHETA浓度、CHETA与质粒DNA的比例3个因素对制备条件的影响,将实验结果用数学方法处理并进行方程模型拟合,根据拟合方程及反应曲面图确定指标的最优值和各因素相对应的最佳取值范围.以LacZ为报告基因转染肝癌细胞HepG2,定量测定β-半乳糖苷酶活性和总蛋白含量,并计算转染效率.结果 影响平均粒径、转染效率的3个主要因子的最佳取值分别为:Protamine/DNA (2.5:1);CHETA (45%);CHETA/DNA (4:1).所制前阳离子脂质体形态近似于球体,平均粒径228.9±8 nm,多分散指数为0.122±0.02,Zeta电位为–25.08±2.5 mV,载基因前阳离子脂质体转染HepG2肝癌细胞转染效率为24.26±2.6 mU · mg-1.结论 星点设计应用简便、预测性好,制备的前阳离子脂质体符合设计要求.