黄芪甲苷改善高糖受损内皮祖细胞生物学功能的实验研究

目的:研究黄芪甲苷(Astragaloside IV,AS-IV)干预高糖受损人内皮祖细胞(Endothelial Progenitor Cells,EPCs)增殖的最佳浓度,并探讨AS-IV对高糖受损EPCs生物学功能的影响。方法:取足月新生儿脐带血分离、培养并鉴定EPCs,将鉴定成功的EPCs用30 mmol/L的葡萄糖预处理120 h后,随机分为实验组(HG+AS-IV组)和对照组(HG组),同时设置正常组(NC组)。用CCK8检测不同浓度AS-IV(0、25、50、100、200、400 mg/L)干预EPCs 24 h后的增殖情况,绘制增殖曲线,初步得出AS-IV干预高糖受损人EPCs增殖的最佳浓度。进而通过CCK-8增殖实验、黏附能力测定试验、细胞划痕试验及Matrigel体外成血管实验检测最佳浓度的AS-IV对高糖受损EPCs增殖、黏附、迁移和成管功能的影响。结果:AS-IV促高糖受损EPCs增殖的最佳浓度为100 mg/L;与对照组比较,100 mg/L AS-IV干预后的高糖受损EPCs增殖能力、黏附细胞数、细胞迁移率、体外成管数均明显增加,差异均有统计学意义(P1<0.05);同时检测实验组与正常组差异无统计学意义(P2>0.05)。结论:AS-IV可显著改善体外高糖受损的人EPCs的生物学功能,恢复其原有活力并具有介导血管新生的潜能。     

黄芪甲苷对高糖受损人内皮祖细胞分泌SDF-1α和CXCR4的影响

目的:研究黄芪甲苷(astrological Ⅳ,AS-Ⅳ)对高糖受损人内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)分泌基质细胞衍生因子-1α(stromalcell-derived factor-1α,SDF-1α)和CXC趋化生长因子受体4(CXC chemokine receptor 4,CXCR4)的影响。方法:从足月健康新生儿脐带血中分离培养出单个核细胞,采用CD31抗体联合DAPI核染及FITC-UEA-I和Dil-ac-LDL双荧光染色法鉴定EPCs。用30 mmol/L葡萄糖预处理EPCs得到高糖受损EPCs。用不同浓度梯度(25、50、100、200、400 mg/L)的AS-Ⅳ干预EPCs,经ELISA法检测分别确定AS-Ⅳ促SDF-1α和CXCR4分泌的最佳浓度。用最佳浓度AS-Ⅳ干预受损的EPCs,分别于6、12、24、48、72 h收集样本以确定AS-Ⅳ的最佳作用时间。将受损EPCs随机分为实验组和对照组,同时设置空白组。实验组用最佳浓度AS-Ⅳ干预,对照组及空白组用等容量的PBS液处理,用ELISA法检测各组SDF-1α和CXCR4的含量。结果:100 mg/L的AS-Ⅳ作用24 h时受损的EPCs分泌SDF-1α的量达最佳;50 mg/L的AS-Ⅳ作用48 h时受损的EPCs分泌CXCR4的量达最佳。与对照组比较,实验组EPCs分泌SDF-1α、CXCR4的含量明显增多,差异有统计学意义(P0.05)。实验组EPCs分泌SDF-1α和CXCR4的含量与空白组比较,差异无统计学意义(P≥0.05)。结论:AS-Ⅳ能促进高糖受损人EPCs分泌SDF-1α和CXCR4,且分泌量能达到正常生理状态。     

黄芪甲苷促人内皮祖细胞分泌血管生长因子的实验研究

目的:观察黄芪甲苷对人内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)分泌血管生长因子的影响,分析黄芪甲苷调节EPCs介导的血管新生的作用机制。方法:取足月健康新生儿脐带血,用密度梯度离心法获取单个核细胞,进行传代培养,当细胞呈现梭形时对细胞进行CD31抗体和DAPI核染鉴定,获得EPCs。将获得的EPCs随机分为实验组和对照组,实验组用质量浓度为100 mg·L~(-1)的黄芪甲苷干预,对照组用等量的PBS液处理,培养24 h后,通过酶联免疫吸附实验检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)a、VEGFb、VEGFc、成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factors,FGF)、血管生成素-1(angiogenin-1,Ang-1)的吸光度。结果:经CD31抗体和DAPI核染检测证实成功获取EPCs。实验组人EPCs分泌的血管生长因子VEGFa、VEGFb、VEGFc、FGF、Ang-1水平均高于对照组(分别t=9.84、45.24、14.51、6.27、6.57),差异均有统计学意义(P0.01)。结论:黄芪甲苷可促进人EPCs分泌大量VEGF,具有调节EPCs介导血管新生的巨大潜能。     

黄芪甲苷改善人内皮祖细胞生物学功能的实验研究

目的探讨黄芪甲苷(AstragalosideⅣ,AS-Ⅳ)对人内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)生物学功能的影响,为深入研究AS-Ⅳ调节EPCs介导的血管新生的作用机制奠定基础。方法取足月健康新生儿脐带血,采用密度梯度离心法分离得到单个核细胞,经传代培养,采用CD31抗体联合DAPI核染以及FITC-UEA-I和Dil-ac-LDL双荧光染色法鉴定EPCs。将鉴定成功的EPCs随机分为实验组和对照组,实验组采用100 mg/L的AS-Ⅳ干预,对照组用等容量的PBS液处理,两组细胞培养24 h后,通过CCK-8细胞增殖检测试剂盒、黏附能力测定试验、细胞划痕试验及Matrigel体外成血管试验观察AS-Ⅳ对EPCs增殖、黏附、迁移和成管功能的影响。结果与对照组相比,实验组细胞增殖的OD值增大,细胞黏附数增多,细胞迁移宽度增加(即细胞迁移率增大),体外成管数增多,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论黄芪甲苷能改善体外人EPCs的生物学功能,具有调节EPCs介导血管新生的潜能。     

黄芪甲苷对高糖受损人脐静脉内皮细胞分泌SDF-1α和CXCR4的影响

目的:探讨黄芪甲苷(AS-IV)对高糖受损人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分泌基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)、CXC趋化生长因子受体4(CXCR4)的影响,为进一步研究AS-IV通过内皮细胞调节SDF-1α/CXCR4轴改善血管新生奠定基础。方法:从足月健康新生儿脐静脉中分离、培养出HUVECs,采用血管性假性...