樟芝多糖对免疫抑制小鼠的免疫调节作用

目的探究樟芝多糖对于环磷酰胺构建的免疫抑制小鼠模型的免疫功能的调节作用。方法利用水提醇沉原理提取得到3种樟芝多糖,环磷酰胺构建免疫抑制小鼠模型。应用3种樟芝多糖进行干预,分别检测细胞免疫和体液免疫的相关指标,包括胸腺指数、脾脏指数、T淋巴细胞亚群、淋巴细胞增殖活性、自然杀伤(NK)细胞杀伤能力以及血清中白介素-2(IL-2)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、免疫球蛋白A(IgA)、IgG、IgM的表达。结果环磷酰胺构建的免疫抑制小鼠的免疫功能得到全面抑制,而3种樟芝多糖可以不同程度的提高免疫抑制小鼠的免疫功能,且相同剂量下,90%乙醇沉淀得到的多糖效果优于其他两种(P0.05)。结论樟芝多糖可以提高免疫抑制小鼠的免疫能力,且90%乙醇沉淀的多糖效果更优。     

樟芝多糖通过调节肠黏膜浸润的Th9及IL-9的表达调控小鼠慢性结肠炎的机制研究

目的 研究樟芝多糖调节结肠黏膜浸润的Th9及其细胞因子IL-9的表达,从而减轻小鼠慢性结肠炎的机制。方法 利用葡聚糖硫酸钠（dextran sulfate sodium,DSS）构建小鼠慢性结肠炎模型,设置正常组、模型组、阳性对照组（抗IL-9抗体注射组）以及樟芝多糖组（20 mg·kg^-1）。DAI评分综合评价小鼠1个月内活动能力,测定小鼠1个月内的体质量变化,流式细胞术检测外周血、结肠黏膜固有层中单个核细胞中CD4+IL-9+T细胞的比例,ELISA法检测外周血及结肠黏膜中IL-9、TGF-β以及IL-4的表达,实时荧光定量PCR检测小鼠结肠黏膜中IL-9、TGF-β、smad3及IL-4的表达,HE染色观察小鼠结肠组织病理。结果 DSS可以引起小鼠慢性结肠炎性病变,DAI评分结果显示模型组小鼠活动能力明显下降,而樟芝多糖干预后DAI评分显著降低（P<0.05）,模型组小鼠外周血及结肠黏膜固有层中Th9比例相比正常组显著增高（P<0.05）,外周血及结肠黏膜中IL-9、TGF-β及IL-4的蛋白及mRNA表达也显著增高（P<0.05）。阳性对照组及樟芝多糖组小鼠外周血及结肠黏膜固有层中Th9比例相比模型组显著下调（P<0.05）,且外周血及结肠黏膜中IL-9,TGF-β以及IL-4的蛋白及mRNA表达也显著下调（P<0.05）,HE染色结肠病理情况明显好转。结论 樟芝多糖可以通过调节Th9比例和IL-9表达改善小鼠慢性结肠炎,其作用与免疫调节及抗炎作用有关。     

丁苯酞对神经干细胞向神经细胞分化的促进作用

目的 研究丁苯酞通过PI3K-AKT信号通路促进神经干细胞向神经细胞分化的作用。方法 分离培养SD大鼠胚胎脑皮质层的神经干细胞,采用分化专用完全培养基培养后,通过光镜下观察和Nestin蛋白免疫荧光法进行鉴定。设置对照组和实验组,其中实验组添加丁苯酞辅助分化,分为丁苯酞低剂量组（1 μmol·L^-1）、中剂量组（5 μmol·L^-1）和高剂量组（10 μmol·L^-1）,作用24 h后,CCK-8法检测神经干细胞的细胞活力,碱性磷酸酶染色法检测神经干细胞的分化能力,免疫荧光法检测神经细胞分化程度,RT-qPCR法检测转录因子SOX2、PAX6和NeuN的mRNA表达水平,Western-blot及RT-qPCR检测PI3K-AKT信号通路的表达。结果 丁苯酞干预后神经干细胞活力提高,分化能力提高,碱性磷酸酶试验呈强阳性,转录因子SOX2、PAX6和NeuN的mRNA表达水平增高,PI3K-AKT信号通路蛋白和mRNA表达水平均增高,且呈现剂量依赖性。结论 丁苯酞可以促进神经干细胞向神经细胞分化,其作用机制可能与PI3K-AKT的激活有关。     

羟氯喹逆转慢性髓性白血病细胞K562/IMA对伊马替尼耐药的作用机制研究

目的探讨羟氯喹逆转慢性髓性白血病细胞K562/IMA对伊马替尼（IMA）耐药的作用机制。方法体外培养人慢性髓性白血病细胞K562/IMA（对10滋mol/L的IMA耐药）,将细胞分为对照组（Con组）、IMA干预组（IMA组）、羟氯喹+IMA干预组（HCQ+IMA组）,并在含相关药物的培养基中继续培养。采用CCK-8法检测细胞增殖率的变化,AnnexinV-FITC/PI染色后流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,免疫荧光法染色检测细胞自噬激活标志蛋白LC3Ⅰ/Ⅱ的表达,MDC染色检测细胞自噬酸性囊泡的产生,Westernblot法检测细胞自噬相关蛋白p62、Beclin-1及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9的表达。结果IMA组细胞增殖率明显高于HCQ+IMA组（P＜0.05）,细胞凋亡率明显低于HCQ+IMA组（P＜0.05）。HCQ+IMA组细胞侵袭能力明显低于IMA组（P＜0.05）。HCQ+IMA组细胞LC3Ⅰ/Ⅱ蛋白表达下调,酸性囊泡形成水平降低,与IMA组比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）。HCQ+IMA组细胞p62蛋白表达水平高于IMA组（P＜0.05）,而Beclin-1蛋白表达水平低于IMA组（P＜0.05）,同时凋亡蛋白Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达水平高于IMA组（均P＜0.05）,抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达水平低于IMA组（P＜0.05）。结论羟氯喹可以逆转IMA耐药CMLK562细胞对IMA的敏感性,其作用机制或与抑制细胞自噬有关。     

TPI教学模式在临床本科大课中的应用探究

目的探讨TPI(理论-实践-互动式教学方法)在临床医学教学中的应用。方法对承德医学院2013及2014级临床医学专业4个大班(n=544)第4学年第2学期疼痛诊疗学课程的教学进行研究,抽签分组,2013级临床医学专业1大班及2014级临床医学专业2大班(A组,n=273)采用TPI教学法,2013级临床医学专业2大班及2014级临床医学专业1大班(B组,n=271)采用传统理论教学法(LBL),学期末,对于两个班同学的期末成绩以及对课程的评价进行统计学分析。结果经统计学分析,TPI教学法与传统教学法相比较,能够提高课堂活跃度(P0.05),增强课后记忆度(P0.05),提高学生自身解决问题能力(P0.05)。经统计学分析,TPI教学法与传统教学法相比较,在教学设计、教学内容、教学方法、情感教育、教学基本功、教学效果、教学特色、考试模式等方面比较(P0.05),差异具有统计学意义。经统计学分析,对于两组同学的综合学习成绩进行比较,A组综合学习成绩明显优于B组,比较结果具有统计学意义(P0.05)。结论 TPI教学法,充分发挥了教师知识传播作用与学生互动作用,取得良好教学效果,适合在我国高校医学临床大课授课中推广使用。     

Bioz.com用于心脏手术围术期监测的临床价值研究

目的 评价无创血流动力学监测系统（Bioz.com）用于心脏手术患者围手术期心功能评估的准确性及可靠性。方法 选取在2017年12月~2018年6月于承德医学院附属医院行择期心脏手术患者35例,包含瓣膜性疾病23例,冠心病12例。选取“肺动脉漂浮导管”及“超声心动图”作为比较指标,严格按照Bioz.com系统操作规范进行操作,对心排出量（CO）、每搏输出量（SV）、心指数（CI）进行监测,分别记录手术前后患者血流动力学变化情况,并进行相关统计学分析。结果 心脏手术前后,采用 Bioz.com系统及超声心动图两种方法对患者血流动力学参数CO、SV、CI进行监测并比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）。心脏手术中,采用Bioz.com系统及漂浮导管两种方法对患者血流动力学参数CO、SV、CI进行监测并比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论 在心脏手术中Bioz.com系统与肺动脉漂浮导管,Bioz.com系统与超声心动图监测的精确度与准确度具有一致性,是一种较为可行的心功能监测方法。     

HPGPC联合HPLC-ELSD测定樟芝子实体中多糖分子量、多糖组成和单糖含量

目的:建立高效凝胶色谱法(HPGPC)测定樟芝子实体中多糖分子量,HPLC-ELSD法测定樟芝子实体多糖组成和单糖含量的分析方法。方法:HPGPC法采用ShodexOHPak SB-803HQ色谱柱(300 mm×8 mm);流动相:0.70%硫酸钠溶液(含0.02%的叠氮钠);柱温:35℃,流速:0.5 mL/min。HPLC-ELSD法采用Zorbax Carbohydrate色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-水(80∶20);柱温:30℃;流速:0.5 mL/min。联合上述两种方法进行测定。结果:采用上述HPGPC法可以成功计算出樟芝子实体多糖的分子量,采用HPLC-ELSD法可以测定樟芝多糖的组成及单糖的含量。结论:HPGPC联合HPLC-ELSD法可以简单快速的测定樟芝子实体多糖的分子量、多糖的组成和单糖的含量,可以用于樟芝子实体多糖提取纯化后的质量控制。     

来那度胺抑制小鼠Lewis瘤作用机制的研究

目的通过观察来那度胺对Lewis荷瘤小鼠T淋巴细胞亚群/树突状细胞比例和程序性死亡受体1及其配体（PD1/PD-L1）通路的影响,探讨来那度胺经免疫途径治疗实体瘤的作用机制。方法细胞实验中,采用CCK8法和Hoechst33258染色检测来那度胺对细胞凋亡的影响。动物实验中将小鼠设置为对照组、模型组、低剂量组和高剂量组4组,每组10只,对照组为正常小鼠,模型组、低剂量组、高剂量组为移植Lewis肺癌细胞的荷瘤小鼠,低剂量组采用1mg/kg来那度胺、高剂量组采用10mg/kg来那度胺灌胃,连续14d后处死小鼠,取肿瘤组织并称重。流式细胞术测定肿瘤浸润组织和外周血中T淋巴细胞亚群/树突状细胞比例。Westernblot法测定PD1、PD-L1蛋白表达水平。结果来那度胺对Lewis肺癌细胞株无明显细胞毒性,但在小鼠体内可以抑制肿瘤的生长,增加肿瘤浸润组织和外周血中T淋巴细胞亚群/树突状细胞比例,且高剂量组效果优于低剂量组（均P＜0.05）。来那度胺还可以降低肿瘤组织中PD1、PD-L1蛋白表达水平。结论来那度胺对Lewis肺癌细胞株无细胞毒性,抗肿瘤作用与提高体内免疫功能,减小免疫抑制有关。     

樟芝多糖辅助bFGF对于大鼠机械性脊髓损伤后神经功能修复的作用研究

目的 研究樟芝多糖联合碱性成纤维细胞因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）对于机械性脊髓损伤的大鼠神经功能修复的作用。方法 采用改良的Allens法构建大鼠脊髓机械性损伤模型,将大鼠分为对照组、模型组、bFGF组、樟芝多糖组、bFGF+樟芝多糖组,药物干预时间为30 d。在药物干预后第1,7,14,21,30天对大鼠进行脊髓损伤（Basso-Beattie-Bresnahan,BBB）评分、诱发电位（somatosensory evoked potential,SEP）试验、运动诱发电位（motor evokedpotential,MEP）试验,30 d后处死大鼠,提取脊髓组织后进行HE染色和Nissl染色,Elisa检测组织中炎症因子肿瘤坏死因子（TNF-α）、白介素1β（IL-1β）、趋化因子10（CXCL-10）、集落刺激因子（GM-CSF）和白介素10（IL-10）的表达。结果 bFGF、樟芝多糖单一使用对小鼠神经功能BBB评分和SEP、MEP试验结果均优于模型组（P<0.05）,而bFGF+樟芝多糖组的BBB评分和SEP、MEP试验优于单一用药组（P<0.05）。bFGF组、樟芝多糖组、bFGF+樟芝多糖组的脊髓组织中炎症因子TNF-α、IL-1β、CXCL-10的表达显著低于模型组（P<0.05）,而GM-CSF和IL-10的表达高于模型组（P<0.05）,且bFGF+樟芝多糖组显著优于bFGF组和樟芝多糖组（P<0.05）。结论 樟芝多糖辅助bFGF对于机械性脊髓损伤大鼠有着良好的神经功能修复作用,且优于使用单一的bFGF,其作用可能与抗炎症因子的表达,促进神经细胞的存活有关。     

丁苯酞对糖氧剥夺条件下人脑微血管内皮细胞炎症反应的调节作用

目的 研究丁苯酞调节糖氧剥夺（oxygen-glucose deprivation,OGD）条件下人脑微血管内皮细胞（human brainmicrovascular endothelial cells,HBMEC）炎症反应的机制。方法 采用OGD方法处理HBMEC,将细胞分为对照组、模型组和丁苯酞低、中、高剂量组。其中对照组为正常培养的HBMEC,模型组为OGD处理的细胞,低剂量组为OGD+5 μmol·L^-1的丁苯酞,中剂量组为OGD+10 μmol·L^-1的丁苯酞,高剂量组为OGD+20 μmol·L^-1的丁苯酞。采用流式细胞术检测细胞凋亡水平,CCK-8法检测细胞活力的变化,Western-Blot法检测细胞中HMGB1、TLR4、NF-κB （p-P65）、caspase-1和procaspase-1的表达水平,免疫酶联法检测上清中白细胞介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）,白细胞介素6（IL-6）的分泌水平。实时荧光定量PCR检测HMGB1、TLR4、NF-κB（P65）、caspase-1、IL-1β的mRNA表达。结果 OGD处理可以诱导HBMEC活力下调和HBMEC细胞凋亡,且具有时间依赖性,相比对照组具有显著性差异（P<0.05）;而丁苯酞干预后,HBMEC细胞活力比模型组显著上调（P<0.05）,细胞凋亡率比模型组显著下降（P<0.05）。OGD处理可以导致HBMEC中HMGB1-TLR4-NF-κB信号的激活,诱导炎症因子caspase-1、IL-1β的表达上调,相比对照组具有显著性差异（P<0.05）;而丁苯酞干预可以显著下调HMGB1-TLR4-NF-κB信号的表达,下调caspase-1、IL-1β的表达。结论 丁苯酞可能通过抑制HMGB1-TLR4-NF-κB信号的表达调节OGD下HBMEC细胞炎症反应。