基于形态学的均值平移算法的神经元干细胞图像的自动分割

在神经元干细胞的图像分析中,准确快速的图像分割是干细胞分化增值自动追踪系统的基础。为了准确地分割低对比度的灰度神经元干细胞图像,本研究提出一种基于形态学运算和均值平移算法的神经元干细胞分割方法,称其为形态学的均值平移算法。此算法可以快速地获得任意形状细胞的图像,并且能检测到图像中多连接边缘不封闭的细胞。将此方法应用于神经元干细胞序列图像分割中并且将其与门限分割、水线分割和活动轮廓进行对比。实验结果证明,与其它的方法相比,此方法获得的细胞分割形状更接近于真实细胞的形状,并且能获得或接近于原始图像中准确的独立细胞数目。此方法可以获得正确的分割结果,为进一步图像处理奠定了良好的基础。     

基于几何活动轮廓的神经元干细胞序列图像的自动分割

一个快速稳定的分割系统是研究神经元干细胞变化的基础，为完善此系统，针对多连接边缘模糊的细胞分割提取问题，根据曲线进化原理，我们提出了一种基于水平集方法的改进的几何活动轮廓算法。此算法能自动解决图像的拓扑变化，并能获得更加真实的细胞轮廓边缘。将此方法应用于神经元干细胞的序列图像分割，实验结果证明了此算法的有效性与准确性。     

多西紫杉醇纳米结构脂质载体中主药含量及包封率测定

目的:建立测定多西紫杉醇(DTM)纳米结构脂质载体(NLC)中主药含量及包封率的方法。方法:采用高效液相色谱法测定药物含量,色谱柱为DiamonsilTMODS,流动相为乙腈-水(55:45),流速为1.0mL.min-1,检测波长为228nm;分别采用超速离心法及超滤法分离DTX-NLC中游离药物以测定包封率。结果:DTM检测浓度的线性范围为0.024～2.4μg.mL-1(r=0.9996),平均回收率为99.29%(RSD=0.37%);2种方法所测药物的平均包封率均>96.5%。结论:本方法简便、准确、可靠,灵敏度高,可用于该制剂的质量控制。     

3种方法制备硫酸卷曲霉素脂质体及其药剂学性质考察

目的:制备硫酸卷曲霉素脂质体并对其性质进行考察。方法:分别采用pH梯度法、硫酸铵梯度法和醋酸钠梯度法3种主动载药法制备硫酸卷曲霉素脂质体并将其制成冻干制剂,通过测定包封率、粒径和ζ电位及考察稳定性等研究脂质体的性质。结果:3种方法制备硫酸卷曲霉素脂质体的包封率冻干前、后分别为65.7%、65.2%,20.1%、18.6%,34.6%、32.4%,粒径分别为136、145nm,144、153nm,142、159nm,ζ电位分别为—20.2、—19.5mV,—24.4、—22.9mV,—18.7、—17.8mV。稳定性考察各项指标均无明显改变。结论:3种方法中pH梯度法更适于制备硫酸卷曲霉素脂质体。     

老年退变性腰椎管狭窄动物模型的制作

目的探索制作腰椎管狭窄动物模型的方法。方法以SD大鼠为模型分别行全椎板切除及切除后自体碎骨粒回植,并与正常对照组一同进行运动和感觉功能检查、影像学及病理检查,计算机分析结果数据以验证模型的效果。结果模型组和椎板切除组的椎板再生,椎管均较正常对照组狭窄(P<0.05),并引起间歇性跛行及体表诱发电位(SEP)改变(P<0.05),模型组椎管狭窄重于椎板切除组(P<0.05)。结论椎板切除碎骨粒植骨是制作腰椎管狭窄的动物模型的简便有效方法。     

GL1-EGFP融合蛋白的原核表达及对神经胶质瘤细胞的靶向作用分析

[目的]构建、纯化神经胶质瘤靶向肽GL1和EGFP融合蛋白表达载体(GL1-EGFP),并且分析其靶向作用。[方法]通过PCR扩增目的基因GL1-EGFP,并连接到pET-22b(+)载体上构建原核表达质粒,重组体转到感受态大肠杆菌BL21(DE3)中进行蛋白诱导表达,重组蛋白利用Ni2+-树脂柱亲和层析纯化,利用SDS-PAGE和Western blotting鉴定表达纯化蛋白,激光共聚焦显微镜检测GL1-EGFP对神经胶质瘤细胞的靶向作用。[结果]构建了GL1-EGFP原核表达载体,在IPTG诱导下获得了高效表达。Western blotting分析证明纯化蛋白为目的蛋白GL1-EGFP。体外细胞实验表明GL1-EGFP融合蛋白对神经胶质瘤细胞U87△EGFR具有靶向作用。[结论]GL1-EGFP靶向融合蛋白对恶性神经胶质瘤细胞有明显的靶向定位作用。     

椎板再生的实验研究

目的:探讨大鼠椎板切除后的再生机制和后果.方法:以SD大鼠为模型行L5全椎板切除,与对照组一同进行运动和感觉功能检查、影像学及病理学检查,计算机分析结果数据.结果:病理学检查见椎板缺损处首先形成纤维组织,继而椎板边缘松质骨以软骨内成骨的方式向对侧再生形成椎板,椎板皮质骨则以膜内成骨的方式再生,此外纤维组织中出现软骨岛并骨化成椎板.术后16周L5椎管截面积测量结果显示,椎板再生引起实验组椎管狭窄15.6%(P＜0.05),同时实验组出现了明显间歇性跛行(P＜0.05).体感诱发电位(SEP)结果还显示实验组出现了下肢感觉障碍--潜伏期延长(P＜0.05),波幅下降(P＜0.05).结论:椎板再生包括纤维组织软骨内成骨和椎板切缘的骨再生,再生造成椎管狭窄.     

重组质粒pSecTag2/B-OPG在Beagle犬骨髓基质细胞中表达与鉴定

目的转染骨保护素（OPG）基因至Beagle犬骨髓基质细胞（BMSCs）中,并检测其表达能力,为基因工程技术治疗牙周病提供物质基础。方法穿刺抽取成年Beagle犬骨髓2～3ml,通过全骨髓贴壁法获取BMSCs。传代至第3代,脂质体瞬时转染经鉴定的重组pSecTag2／B-OPG,并用RTPCR、Western blot检测OPG的表达水平。结果重组质粒pSecTag2／B-OPG经HindⅢ单酶切及EcoRⅠ、BamHⅠ双酶切,电泳显示切下的片段均与预期大小相符,经测序证实此基因与GenBank中提供的序列[gi：33873056]一致;RTPCR、Western blot结果显示：重组pSecTag2／B-OPG在骨髓基质细胞中有表达。结论成功建立了OPG基因修饰的骨髓基质细胞瞬时基因表达体系。     

纳米粒子药物输送系统与实体脑肿瘤的诊断和治疗

目前,对包括多形性成胶质细胞瘤在内的脑肿瘤的治疗效果不佳。血脑屏障限制了放化疗药物以有效的浓度到达肿瘤细胞。常用的方法是通过外科手术切除大部分肿块及对浸润部分的辅助治疗,以多功能纳米粒子为基础的药物输送系统(drug delivery system,DDS)的发展为实体脑肿瘤的诊断和治疗提供了新的思路。以氧化铁、量子点等为代表的纳米粒子可以作为核磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)探针、光学探针以及结合多种成像方法的探针为实体脑肿瘤的诊断提供更加敏感的分辨能力和更加清晰的成像。此外,多柔比星、紫杉醇等化疗药物的肿瘤内输送,也从最初的脂质体转运系统和多聚物组成的非磷脂纳米粒逐步发展到兼具多种功能的新型纳米粒子转运治疗系统。通过改变其大小、组成和表面化学性质,纳米粒子能够发展成为结合检测、成像、药物靶向导入的多功能平台,尤其是靶向分子修饰的纳米粒子,在实体脑肿瘤的治疗中具有极大的发展前景。本文针对利用纳米粒子进行诊断和治疗脑肿瘤的最新研究进展作一综述,并展望其在肿瘤治疗领域的发展前景。     

他克莫司在非感染性葡萄膜炎及实验性自身免疫性葡萄膜炎治疗中的应用及展望

他克莫司为一种新型强效的免疫抑制剂,通过与内源性细胞内受体胞浆结合蛋白FKBP-12结合,阻断淋巴因子基因转录从而抑制T淋巴细胞活化.他克莫司口服给药对治疗非感染性葡萄膜炎效果显著,眼局部应用脂质体、控释药膜、植入体等制剂,局部给药治疗实验性自身免疫性葡萄膜炎均有较好疗效.其中,FK506缓释制剂经巩膜给药可能有良好的应用前景.这些制剂的临床应用及其效果,尚需更多的经验积累.