增强子Ⅰ对乙型肝炎病毒DNA疫苗免疫应答的影响

目的 研究乙型肝炎病毒（HBV）自身增强子I（enhancerI，ENHI）对HBV DNA疫苗免疫应答的影响。方法 采用PCR法以HBVadr亚型全基因DNA序列为模板分别扩增表面抗原（HBsAg）和HBsA-ENHI基因片段，重组到载体VR1012中，构建两种HBV DNA疫苗，转染CADS-7细胞及HepG2细胞并免疫BALB／c小鼠。采用蛋白印迹、ELISA、ELISPOT等方法检测其在COS-7和HepG2细胞内的表达及小鼠的体液及细胞免疫应答效果。结果 转染的HepG2和COS-7细胞均表达HBsAg;连接ENHI的HBV DNA疫苗转染HepG2细胞后HBsAg表达量明显升高，两种疫苗转染COS-7细胞表达HBsAg无明显差异；免疫小鼠后第2周产生HBsAb及HBsAg特异性细胞毒T淋巴细胞（CTL），两种疫苗免疫产生的HBsAb及HBsAg特异性CTL无明显差异。结论ENHI可使HBV DNA疫苗转染HepG2细胞表达HBsAg明显增加，对转染COS-7细胞表达HBsAg及接种BALB／C小鼠引起的免疫应答无明显影响。     

增强子Ⅰ对乙型肝炎病毒DNA疫苗免疫应答的影响

目的研究乙型肝炎病毒(HBV)自身增强子Ⅰ(enhancerⅠ,ENHⅠ)对HBVDNA疫苗免疫应答的影响。方法采用PCR法以HBVadr亚型全基因DNA序列为模板分别扩增表面抗原(HBsAg)和HBsAg-ENHⅠ基因片段,重组到载体VR1012中,构建两种HBVDNA疫苗,转染COS-7细胞及HepG2细胞并免疫BALB/c小鼠。采用蛋白印迹、ELISA、ELISPOT等方法检测其在COS-7和HepG2细胞内的表达及小鼠的体液及细胞免疫应答效果。结果转染的HepG2和COS-7细胞均表达HBsAg;连接ENHⅠ的HBVDNA疫苗转染HepG2细胞后HBsAg表达量明显升高,两种疫苗转染COS-7细胞表达HBsAg无明显差异;免疫小鼠后第2周产生HBsAb及HBsAg特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL),两种疫苗免疫产生的HBsAb及HBsAg特异性CTL无明显差异。结论ENHⅠ可使HBVDNA疫苗转染HepG2细胞表达HBsAg明显增加,对转染COS-7细胞表达HBsAg及接种BALB/c小鼠引起的免疫应答无明显影响。     

慢性肾功能衰竭并发高钾血症致心跳骤停的抢救护理

慢性肾功能衰竭并发高钾血症致心跳骤停的抢救护理来艳丽，董平栓，宋润珞（洛阳医学高等专科学校附属医院内二科洛阳市４７１００３）慢性肾功能衰竭是各种慢性肾脏疾病晚期肾功能减退，尿量减少等产生的一系列严重并发症。其中以高钾血症危害最大，常导致严重的心动过缓...     

HIV核心抗原p24原核系统的高效表达、纯化及活性鉴定

目的　在原核表达系统中对HIVp2 4抗原基因进行克隆和高效表达、纯化并鉴定其活性。方法　利用PCR技术从HIV-1全基因质粒 (B2N)中扩增p2 4抗原基因 ,并克隆入T载体中。通过酶切消化后连接到表达载体pRSET上 ,用此连接产物转化大肠埃希菌BL2 1,经IPTG诱导 ,表达p2 4抗原。利用固定化金属离子 (Ni2 )配体亲和层析技术从表达蛋白中纯化目的蛋白。并运用双酶切技术、SDS-PAGE电泳、WesternBlot(WB)及ELISA法分别对插入基因片段的正确性、表达产物的活性及特异性进行检测。结果　PCR产物约为 6 90bp ,与预期p2 4抗原全基因片段大小一致。重组质粒T-p2 4和pRSET-p2 4经BamHⅠ和HindⅢ双酶切 ,其插入的外源基因片段均为 6 90bp。将纯化前与纯化后的蛋白作SDS PAGE电泳 ,均可见一条约 2 4× 10 3的外源基因表达带 ,与计算的相对分子质量相符。经WB和ELISA试验 ,证明基因工程表达的p2 4抗原具有较高的特异性及活性。结论　成功构建了HIVp2 4表达载体pRSET-p2 4 ,并在原核细胞中高效表达 ,其表达产物具有良好的特异性及活性     

抗HIV—1 gp41多肽单克隆抗体的研究

抗ＨＩＶ－１ｇｐ４１多肽单克隆抗体的研究范涛貌盼勇洪世雯梁勇冯传前何红霞（解放军３０２医院病毒研究室，北京１０００３９）爱滋病（ＡＩＤＳ）是人类免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）感染所致一种严重传染性疾病，目前对其感染还没有安全、有效的治疗方法和疫苗。１９８４年...     

合成肽抗原抗人免疫缺陷病毒1／2型抗体酶联试剂盒…

根据人免疫缺陷病毒的基因结构和氨基酸序列，采用因相法合成了ＨＩＶ－１ｇｐ４１、ｂｐ１２０、ｐ２４和ＨＩＶ－２ｇｐ３６的４条多肽，混合包被酶标板做为固相抗原，采用间接酶联免疫吸附试验，建立了检测抗－ＨＩＶ－１／２ＩｇＧ抗体的酶联诊断试剂盒。检测卫生部药品和生物制品检定所提供的４１份质控参比血清，其特异性、敏感性均为１００％，变异系数小于１０％。检测１８６份其它病种病人血清均为阴性，与华怡、巴斯德、金     

用RACE技术对一株肠道病毒3''端进行扩增和序列分析

目的 应用3′RACE技术对一株本室分离肠道病毒基因组3′末端进行扩增，并对其核苷酸序列进行比较分析。方法 提取病毒总RNA，以锚定oligdT（17）引物进行逆转录，用特异引物及锚定引物进行3′RACE扩增，将PCR产物进行克隆、测序和序列分析。结果 获得了该病毒的3′端核苷酸序列，同源性分析结果显示该肠道病毒的核苷酸序列与肠道病毒76、89、90、91型的同源性最高为90％左右，而与其他型别的肠道病毒的同源性均小于80％；推导的氨基酸同源性与肠道病毒76、89、90、91型均在90％以上。结论 用RACE技术对肠道病毒3′端进行扩增及序列分析，证明该病毒属新型肠道病毒类，为进一步研究该病毒的分子生物学特性奠定了基础。     

抑癌基因P53突变与宫颈不典型增生的相关性研究

目的：探讨抑癌基因Ｐ５３突变在宫颈不典型增生形成中的作用和意义。方法：应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）,单链构象多态性（ＳＳＣＰ）分析法检测了５０例宫颈不典型增生,２６例宫颈息肉,２５例慢性宫颈炎症组织中Ｐ５３外显子７－８的变异。结果：宫颈不典型增生,息肉,炎症组织中均未见Ｐ５３外显子７－８缺失;宫颈不典型增生,息肉组织中ＰＴ５３外显子７－８突变阳性率分别为１６％,３．８５％,二者差异显著;     

优质护理对脑血栓患者的影响分析

目的：深入研究优质护理对脑血栓患者的影响。方法：选取于2013年7月至2016年2月期间在我院接受治疗的脑血栓患者82例，将患者随机分为常规护理组（38例）和优质护理组（44例），对分别应用常规护理和优质护理的效果进行对照研究。结果：优质护理组患者的生活质量评分（活力、躯体角色、躯体功能、社会功能以及总体健康）及 MBI 评分均明显高于常规护理组，住院时间明显短于常规护理组（P ＜0.05）。结论：优质护理应用于脑血栓患者中的效果十分理想，能够大大缩短患者的住院时间，同时对于患者生活质量以及日常生活活动能力的提高具有十分重要的推动作用，值得大力推广。