抗人CD86单链抗体的基因克隆、表达及结合活性分析

目的 构建并在CHO细胞中表达抗人CD86单链抗体(CD86-scFv),研究该抗体与抗原的结合特性及介导的生物学功能.方法 从分泌鼠源CD86抗体的杂交瘤细胞中克隆出VH和VL基因,构建含有前导肽L-VH-Linker-VL抗体编码基因的表达载体并转染CHO细胞.经筛选高分泌株并扩大培养后收集上清进行纯化.流式细胞术分析CD86-scFv对不同细胞膜型CD86分子的识别及与鼠源亲本抗体1D1的竞争抑制效应.MTT法分析CD86-scFv与Raji细胞表达的CD86结合后对细胞生长的影响.结果 获得了稳定表达抗人CD86-scFv的CHO细胞株及相应抗体.CD86-scFv与CD86基因转染细胞株L929-CD86、天然表达CD86分子的人B系淋巴瘤细胞Raji和Daudi细胞的阳性结合率分别为67.0％、72.3％和80.5％.CD86-scFv对鼠源亲本抗体1D1具有竞争结合能力,将CD86-scFv(终浓度20μg/mL)加入Raji细胞共同培养72 h时的细胞生长抑制率为28.3％.结论 成功构建了稳定分泌抗人CD86-scFv的CHO细胞株(命名为SA-IV).该抗体能够识别CD86分子并具有良好的生物学活性.     

呼末二氧化碳监测在30例高位硬膜外阻滞患者中的体会

目的需要行高位硬膜外阻滞的30例患者，通过面罩给氧，PaO2可维持正常，但明显的呼吸抑制可致二氧化碳蓄积，通过对PETCO2监测，了解高位硬膜外阻滞中PETCO2监测的必要性及准确性及与PaCO2变化的相关性。结果30例患者PaCO2都出现了增高且差异有统计学意义（P〈0．05）。最高一例达8．7kPa（65mmHg）；PETCO2和PaCO2二者间存在良好的正相关（r=0．821，P〈0．01），PETCO2能真实反映PaCO2值。结论PETCO2，监测对于高位硬膜外阻滞患者值得应用。     

抗人CD80单链抗体对不同肿瘤细胞膜型CD80分子的识别与体外增殖的影响

目的:制备真核细胞CHO表达的CD80单链抗体(CD80-scFv)并研究其对不同肿瘤细胞膜型分子的识别及增殖的影响。方法:将表达CD80-scFv的CHO细胞大规模无血清培养收集上清,采用IMAC亲和层析法纯化获取抗人抗体。采用免疫荧光及流式细胞术分析其对人恶性B系淋巴瘤细胞株Daudi、人黑色素瘤细胞株A375、神经胶质瘤细胞株U251及人多发性骨髓瘤细胞株8266及U266细胞膜型CD80分子的识别。在上述肿瘤细胞的培养体系中加入不同浓度的CD80-scFv,MTT法分析其对肿瘤细胞增殖的影响。以天然高表达CD80分子的8266细胞经丝裂霉素处理后作为APC,人PBMC作为效应细胞,分析抗体通过阻断共刺激信号对PBMC增殖的影响。结果:从CHO细胞培养上清中获取的抗人CD80-scFv纯化品的量为6.67 mg/L;该抗体与Daudi、U251、A375、8266及U266的阳性结合率分别为96.8%、39.6%、20.5%、99.9%及3.8%。抗体对高表达CD80分子的Daudi及8266细胞具有增殖抑制作用,加入抗体(终浓度为25μg/mL)培养72 h时的抑制率分别为24.04%及24.16%。同时,抗体通过阻断CD80-CD28介导的共刺激信号,抑制PBMC的增殖。结论:CD80-scFv能够特异识别细胞膜型CD80分子,并对高表达细胞的体外增殖具有抑制作用。     

不同进箱温度对冻干甲肝疫苗的影响

目的：评价冻干进箱板层温度．20℃与5℃对冻干甲肝减毒活疫苗的CCID50、外观的影响。方法：选择同一批号,采用两种不同进箱温度,其余冻于工艺均相同的的冻于甲肝疫苗,分别比较CCID50、外观、废品率。结果：两种进箱温度的冻干甲肝疫苗的感染性滴度CCID50没有明显差异,5℃进箱外观要好于．20℃进箱,5℃进箱废品率更低。结论：5℃进箱冻干甲肝疫苗外观更饱满,废品率更低,利于大规模生产。     

曲马多与布托啡诺在剖宫产术后镇痛中的合理配伍探讨

目的:通过曲马多和布托啡诺在剖宫产术后静脉镇痛中的合理配伍及运用,探讨它们在术后产生最佳镇痛效果。方法:150例腰硬联合下择期剖宫产手术,随机分成三组,每组50例,Q组(曲马多800 mg),B组(布托啡诺8 mg),L组(混合组曲马多400 mg+布托啡诺4 mg)进行术后静脉镇痛。用VAS评分评价镇痛效果,用Ramsay评分评价镇静效果,同时观察并发症。结果:三组镇痛结果无明显差异(P>0.05),但B组的镇静效果优于Q组和L组,有显著性差异(P<0.05)。Q组的恶心呕吐等不良反应发生率明显高于B组、L组,有显著性差异(P<0.05)。结论:曲马多和布托啡诺联合应用在剖宫产手术后静脉镇痛中,效果最佳,不良发生率低,可以在临床上推广应用。     

鼠抗人CD86 单克隆抗体的制备及对肿瘤细胞生长与迁移的影响

目的:制备鼠抗人CD86分子的单克隆抗体(m Ab),分析其对天然表达CD86分子的恶性肿瘤细胞株的生长与迁移的影响。方法:采用小鼠腹水诱生法制备CD86 m Ab,Protein A亲和层析法纯化抗体。采用流式细胞术(FCM)检测抗体对细胞膜型CD86分子的识别。以Raji、Daudi和8266细胞为观察对象,加入CD86 m Ab共同孵育,用FCM检测抗体对细胞凋亡的诱导作用,MTT检测抗体对细胞增殖的影响,Transwell~(TM)研究抗体对细胞迁移的影响。结果:本实验获得的CD86 m Ab能很好地识别细胞膜型分子,其与Raji、Daudi和8266细胞的结合率分别为96. 5%、99. 0%和83. 9%。FCM结果显示,共同孵育24 h,当抗体浓度为20μg/ml时,上述细胞的凋亡率分别为16%、18%及14%,均明显高于同型对照组(P0. 05)。MTT结果显示,共同孵育48 h,20μg/ml抗体对细胞的增殖己可产生抑制作用,40μg/ml抗体对上述细胞增殖的抑制效果更明显(P0. 05),抑制率依次为23%、25%及26%。TranswellTM结果显示,共同孵育48 h,20μg/ml抗体组的Raji、Daudi和8266细胞的迁移率分别为26%、23%和24%,均明显低于同型对照组(P0. 05)。结论:本实验制备的抗体能很好地识别细胞膜型分子,其对表达CD86分子的肿瘤细胞的增殖及迁移具有抑制作用,同时可诱导肿瘤细胞发生凋亡,提示该抗体对表达相应抗原分子的肿瘤具有一定的抗瘤效应。     

小鼠B7-1 基因RNAi 慢病毒载体的构建及其沉默效应研究

目的:构建介导小鼠B7-1 基因RNAi 的慢病毒载体,研究其对L929 细胞表面B7-1 分子表达的沉默效应。方法:从小鼠B7-1 基因编码区选择3 段RNA 干扰靶序列,制备转录双发夹RNA 的前体DNA,并克隆至慢病毒穿梭质粒,构建B7-1 的RNAi 慢病毒穿梭载体,测序鉴定。将重组质粒及辅助质粒共转染293T 细胞产生慢病毒,经超速离心获得浓缩慢病毒颗粒。通过测定293T 细胞GFP 表达水平确定病毒滴度,流式细胞术检测感染效率以及对细胞表面B7-1 的干扰效率。病毒感染细胞经嘌呤霉素筛选及克隆培养获得小鼠B7-1 基因RNAi 慢病毒稳定感染的L929 细胞,流式细胞术分析细胞中GFP 及B7-1 分子表达的状况;将感染细胞与分离的小鼠脾脏T 细胞混合培养,分析B7-1 稳定沉默细胞刺激T 细胞增殖的能力。结果:成功了构建小鼠B7-1 基因RNA 干扰的重组慢病毒载体;获得了滴度达(3 ~ 5) 108 TU/ ml 的浓缩重组慢病毒,重组慢病毒可有效感染L929 细胞介导GFP 表达以及沉默其表面的B7-1。经筛选获得慢病毒稳定感染的L929 细胞,该细胞表面B7-1分子表达受到抑制,刺激T 细胞增殖的能力显著下降(P<0.05)。结论:构建了能够高效感染及沉默小鼠B7-1 分子的RNAi 慢病毒载体,该载体可稳定沉默L929 细胞表面B7-1 分子表达,抑制B7-1/ CD28 信号诱导的T 细胞增殖效应。     

丙泊酚TCI在阴道取卵术中EC50和脑电双频指数的测定

目的 测定丙泊酚靶控输注(TCI)在阴道取卵术时半数有效效应室浓度(EC50)以及脑电双频指数(BIS)变化.方法 阴道取卵术患者22例,采用序贯法测定丙泊酚EG50:设定初始靶浓度3 μg/ml,增减梯度为0.3 μg/ml,记录相应的BIS值和其他生命体征.结果 丙泊酚TCI的EC50为2.95 μg/ml,95％的可信区间为2.63-3.31 μg/ml.取卵术中BP、HR、RR、SpO2均有轻度下降,但无须处理.术后无一例患者出现恶心、呕吐等不良反应.结论 阴道取卵术中,丙泊酚TCI的EC50为2.95 μg/ml、BIS值62.36±7.45比较合适.     

视频下引导气管插管的临床应用

为提高困难气管插管的成功率和安全性,我们应用带引导槽的可视喉镜下气管插管,并与不带引导槽的可视喉镜下气管插管及传统喉镜气管插管进行对比,现报道如下。