3种含酚羟基化合物对蘑菇酪氨酸酶活性影响及动力学研究

选取3种具有酚羟基的芳香类化合物,测定其对酪氨酸酶的活性影响。结果表明,1,5-二羟基萘在120~600 μmol·L-1范围内对酪氨酸酶的激活活性＞450%,最高为537%;2,2′-联苯酚的激活活性最大为284%;2,2′-联吡啶-3,3′二醇无激活活性。动力学研究表明,1,5-二羟基萘表现为非竞争性激活;2,2′-联苯酚为混合性激活作用,在酶促反应体系中,既影响底物与酶的结合,又改变酶的空间构型,综合提高反应速度。     

慢性阻塞性肺病患者外周血中0D34^＋细胞数量变化

目的：观察中、重度慢性阻塞性肺病（COPD）患者外周血中CD34^＋细胞数量变化。方法：按入选标准收集25例中、重度COPD患者外周血,应用密度梯度离心法分离单个核细胞,采用CD34^＋正分选试剂盒进行磁珠纯化,用流式细胞分析仪分析其纯度,同时对入选患者行常规心电图、肺功能、心动超声及血气检查。同期16例性别、年龄无差异志愿者作为对照组,入选标准：年龄〈70岁;肺功能正常;没有临床症状;无吸烟史。结果：经过分离纯化可得到93％表达CD34^＋细胞。COPD患者组与对照组外周血中的CD34^＋细胞数分别是（19．99±11．11）×10^4、（32．75±18．25）×10^4,患者组CD34^＋细胞数明显少于对照组（P〈0．05）,CD34^＋细胞数与患者病程呈负相关（r=-0．689,P〈0．05）。结论：COPD患者外周血中CD34^＋细胞数降低,与患者病程呈负相关。     

不同临床分型的Wilson’s病临床特点分析

探讨不同亚型Wilson’s病（WD）的临床特点及肝型患者预后转归。方法收集256例WD患者的临床资料并随访，根据临床表现将患者分为不同的临床亚型，进一步分析比较肝型、脑型和混合型WD患者的临床特点差异和随访追踪肝型WD患者的预后。结果在256例WD患者中，以混合型（152例，59.4%）和肝型（74例，28.9%）患者常见，而脑型（27例，10.5%）和其他亚型（3例，1.2%）较少；肝型WD患者失代偿期肝硬化比例（78.4%）高于混合型患者（22.0%，P〈0.001）；肝型WD患者肝脏血清生化学指标（转氨酶、ALP、GGT、胆红素以及球蛋白水平）高于混合型WD患者（P〈0.05）；肝型WD患者血清铜[（1.04±1.50） mg/L]水平明显低于脑型WD患者[（2.96±2.88） mg/L]和混合型WD患者[（2.34±2.68） mg/L，P〈0.001]，但两者铜蓝蛋白和尿铜水平无统计学差异（P〉0.05）；肝型WD患者K-F环检出率（64.9%）低于脑型WD患者（92.6%）和混合型WD患者（90.1%，P〈0.05）；经Logistic回归分析显示角膜K-F的有无与年龄（OR=0.922，P=0.014）、血清铜蓝蛋白（OR=35902.1，P=0.015）相关；平均随访31例肝型WD患者（8.3±5.8）年，3例（9.7%）进展为混合型WD患者。结论 WD以混合型和肝型最多见，肝型患者肝脏损害比混合型更为严重，提示肝脏是WD最主要的靶器官。     

M3R激动剂通过激活PI3K/AKT信号途径促进肺癌细胞A549的上皮间质转化

目的:探讨毒蕈碱胆碱受体3(muscarinic receptor 3,M3R)激动剂卡巴胆碱促进人肺癌A549细胞上皮间质转化的可能信号通路。方法:用400μmol/L卡巴胆碱刺激人肺癌A549细胞,在倒置相差显微镜下观察细胞形态的变化,应用划痕愈合实验和Transwell实验观察细胞迁移和侵袭能力;应用q PCR技术检测上皮间质转化相关蛋白波形蛋白(vimentin)和E钙黏蛋白(E-cadherin)m RNA水平的变化;应用Western blot技术检测p-AKT、vimentin和E-cadherin蛋白水平的变化。结果:卡巴胆碱刺激人肺癌A549细胞后,细胞形态发生明显改变,由不规则多边形逐渐向梭形转化、细胞间紧密结合逐渐变得松散,细胞迁移和侵袭能力增强;vimentin的m RNA和蛋白表达量明显增加,E-cadherin的m RNA和蛋白水平降低,磷酸化的AKT蛋白水平增加,且这些变化均可被M3R特异性抑制剂4-DAMP所抑制(P0.05)。结论:卡巴胆碱可通过激活PI3K/AKT信号途径促进人肺癌A549细胞发生上皮间质转化。     

COPD患者外周血中EPCs增殖、迁移、黏附及血管形成功能研究

目的：观察慢性阻塞性肺病（COPD）患者外周血中内皮祖细胞（EPCs）增殖、迁移、黏附及小管形成等功能。方法：体外培养分离COPD患者及对照组外周血中EPCs,采用MTT测定细胞不同时间段的OD值,观察EPCs增殖情况。应用Transwell测定细胞对基质细胞衍生因子-1（SDF-1）的迁移能力。通过对细胞HUVEC的黏附及late-EPCs小管形成实验判断COPD患者外周血中EPCs对血管内皮的修复能力,并用NOS/SCID下肢股动脉内皮损伤模型观察患者EPCs修复功能。结果：COPD患者的EPCs和对照组单个集落细胞数量分别是22.0±7.0、62.0±12.9（100倍,10个随机视野）,两者存在明显差异（P〈0.001）。细胞迁移实验中发现,COPD患者组early-EPCs对SDF-1迁移细胞数量明显少于对照组,两组迁移的细胞数量分别是0.425×104、0.775×104（P=0.039）,通过流式分析发现COPD患者组early-EPCs表达C-X-C家族趋化因子受体4（CXCR4）数量较对照组少,两者分别是（55.1±9.9）%、（91.5±6.7）%。Late-EPCs对HUVECs形成小管黏附实验中,两者有明显差异（P〈0.001）,分别是26.4±8.1、35.2±7.3/×10（10随机视野）。小管成形实验中,COPD患者的late-EPCs不能形成完整的小管;动物在体实验中发现,COPD患者组late-EPCs在受损血管处黏附较对照组少。结论：COPD患者外周血中EPCs增殖、迁移、黏附等功能降低,血管形成功能异常。     

COPD患者early-EPCs β2-肾上腺素受体的表达及其对细胞迁移的影响

 目的：探讨慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者外周血中的早期内皮祖细胞（early-EPCs）是否表达β2-肾上腺素受体（β2AR）及其对细胞迁移的影响。方法：晨起从COPD患者与对照组抽取20 mL静脉血，用Ficoll密度梯度+磁珠分离法提取CD34+细胞。通过Western blotting、RT-PCR及流式细胞术测定early-EPCs的β2AR表达。体外培养early-EPCs，应用β2AR的激动剂、抑制剂及下调β2AR的表达量，通过Transwell法测定early-EPCs的迁移能力。结果：来自COPD患者的early-EPCs可见β2AR mRNA及蛋白的表达强于对照组细胞（P<001）。两组细胞均表达β2AR，但COPD组明显高于对照组，流式细胞术分析两组的β2AR阳性细胞分别是82.9%和55.7%。外源性β2AR抑制剂、β2AR抗体及下调β2AR的表达均可改善COPD患者early-EPCs的迁移能力。结论：β2AR在COPD患者及对照组外周血中的early-EPCs均有表达。降低β2AR的表达可影响COPD患者early-EPCs的迁移功能。     

毒蕈碱胆碱受体3在肺癌的研究进展

毒蕈碱胆碱受体3(M3受体)在多种肿瘤组织均有表达,并与多种细胞重要信号通路相关联,在肿瘤的增殖、侵袭、转移等方面起到重要作用;同时,M3受体参与多种肺部疾病如COPD 的病理生理过程。近年来,M3受体在肺癌中的研究受到较大的重视,M3受体有可能成为肺癌预防治疗的新靶点。     

X线电离辐射通过上调c-Myc表达促进肺癌A549细胞上皮间质转化

目的:探讨电离辐射对肺癌A549细胞上皮间质转化(EMT)的影响及其可能机制。方法:采用不同剂量(0 Gy、1 Gy、2 Gy、4 Gy和8 Gy)的X射线分别照射肺癌A549细胞不同时间,通过倒置显微镜观察X射线照射12 h、24 h和48 h时肺癌A549细胞形态的改变;Western blot检测X射线照射12 h与24 h时EMT相关蛋白vimentin、N-cadherin及E-cadherin和转录因子c-Myc的表达。结果:照射后肺癌A549细胞轮廓不清,突起增多,边缘不规则且呈煎蛋样塌陷,以8 Gy X射线照射48 h时肺癌A549细胞上皮间质化形态最明显。与0 Gy照射剂量对照组相比,vimentin虽然于4 Gy剂量照射12 h时下调,但是处理24 h时各剂量照射组vimentin均表现为上调,其中2 Gy剂量照射组其上调最明显(P0.01);与0 Gy照射剂量对照组相比,1 Gy、2 Gy及4 Gy照射组照射肺癌A549细胞24 h后其N-cadherin表达上调(P0.05);各照射剂量对肺癌A549细胞E-cadherin表达没有显著影响。照射24 h后肺癌A549细胞c-Myc表达上调,以4 Gy剂量照射组表达差异最明显(P0.01)。结论:X线电离辐射可能通过上调c-Myc表达促进肺癌A549细胞发生上皮间质转化。