反义PCNA与反义bcl-2脱氧寡核苷酸抑制人视网膜色素上皮生长

目的　观察反义增生细胞核抗原 (PCNA)和反义 bcl-2脱氧寡核苷酸对培养的人视网膜色素上皮细胞 (RPE)生长的作用 .方法　用 DNA合成仪合成有 1 8个核苷酸的反义PCNA和 1 5个核苷酸的反义 bcl- 2脱氧寡核苷酸片段 ,以不同浓度加入 RPE培养液 ,培养 2～ 4d,用 SABC法检测细胞PCNA和 bcl- 2的表达 ,用 MTT法及流式细胞仪测定细胞抑制率 .结果　 6 .2 5～ 1 0 0μm ol· L- 1 的反义 PCNA对 RPE的抑制率为 8.3%～ 38.4% ,呈剂量依赖性 ,并抑制细胞 PCNA的表达 .反义 bcl- 2未显示抑制作用 .结论　反义 PCNA脱氧寡核苷酸可抑制近 40 %的 RPE生长 ,其临床应用值得进一步研究     

胰高血糖素样多肽-1对2型糖尿病大鼠心肌损伤的保护作用研究

目的观察胰高血糖素样多肽-1(GLP-1)对大鼠2型糖尿病性心肌病心肌损伤的影响。方法采用高脂高糖膳食合并链脲佐菌素(40 mg/kg)诱导的方法建立2型糖尿病大鼠模型。将糖尿病大鼠模型随机分为模型组和GLP-1组,采取皮下包埋缓释泵,分别给两组大鼠连续灌注生理盐水或GLP-1 30 pmol/(kg·min 1),7 d后,处死取心脏,利用Langendorff离体心脏灌流系统进行心脏功能检测和心肌细胞形态学观察。结果糖尿病大鼠在建模成功后第10天出现左心室功能异常。3周后,与正常相比,左室发展压(LVDP)、心率–左心室发展压乘积值(RPP)、dp/dtmax、m-dp/dtmax分别降低40.80%、51.50%、50.87%、52.81%;心肌组织炎性细胞浸润增加,血管周围及心肌细胞间纤维化增加,心肌细胞凋亡指数增加。GLP-1处理组LVDP、RPP、dp/dtmax、m-dp/dtmax分别较模型组增加25.36%、10.90%、22.62%、30.07%,心肌细胞炎症、凋亡减少,心肌组织间及血管周围纤维化降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论糖尿病可直接诱发以间质性纤维化、代偿性纤维化、炎症细胞浸润和凋亡细胞增多为特点的心肌组织损伤,形成糖尿病性心肌病。体内持续释放GLP-1可缓解糖尿病引发的心肌组织损伤,对其心肌组织有保护作用。     

逆转录病毒载体表达的TGFα反义RNA对人脑胶质瘤细胞BT325的生长抑制作用

逆转录病毒载体表达的ＴＧＦα反义ＲＮＡ对人脑胶质瘤细胞ＢＴ３２５的生长抑制作用惠宏襄，王成济，金明，赵小宁，胡敏西安第四军医大学（７１００３２）转化生长因子α（ＴｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒ，ＴＧＦα）是一种小肽分子，其成熟体由５０...     

反义bcl-2 RNA促进膀胱癌BIU-87细胞的凋亡

为探讨反义ｂｃｌ２对膀胱癌ＢＩＵ８７细胞凋亡的作用，应用Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ将插有反义ｂｃｌ２基因片段的重组逆转录病毒载体转染ＢＩＵ８７细胞，使细胞在体外标准培养条件下生长速率降低，用流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果显示：Ｇ期细胞比率增高，细胞周期分析可见凋亡峰，细胞形态学观察凋亡细胞增多，ＤＮＡ凝胶电泳出现梯状电泳带。结果提示：反义ｂｃｌ２瞬时表达可促进ＢＩＵ８７细胞凋亡     

可诱导型真核表达载体的构建及其表达效率的测定

目的：利用ＭＴ－Ⅱ启动子的Ｚｎ＾２＋诱导表达特性,构建含多克隆位点的可诱导型真核表达载体ｐＭＤＮＡ３－ｎｅｏ,并用荧光素酶报告基因（ｌｕｃ）检测其表达效率。方法：用分子克隆方法构建载体,并将ｌｕｃ基因克隆到其多克隆位点内,转染胃癌细胞ＳＧＣ７９０１,Ｇ４１８筛选出稳定克隆,分别在不同浓度ＺｎＳＯ４级不同诱导时间下进行诱导表达和测定,并检测不同单细胞株的表达效率。     

TGFα的检测方法原理及临床意义

生长因子或/和其受体的合成失控常与某些人和动物肿瘤的发生有关.例如转化生长因子(Transforming Growth Factor,TGFα)及与此有关,成熟TGFα是由50个氨基酸残基组成的单链多肽分子,它通过与细胞的表皮生长因子受体(EGFR)结合而发挥其生理作用,除少数组织(如银屑病皮肤细胞等)外,正常组织一般难以检测到TGFα,但是,许多肿瘤和肿瘤细胞株中却有TGFα的过量合成.它是肿瘤细胞以自分泌方式发展过程中     

Cloning and sequencing of the fourth exon of transforming growth factor α gene

Ｃｌｏｎｉｎｇａｎｄｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｏｆｔｈｅｆｏｕｒｔｈｅｘｏｎｏｆｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒαｇｅｎｅ￥ＨｕｉＨｏｎｇｘｉａｎｇ（惠宏襄）；ＪｉｎＭｉｎｇ（金明）；ＨａｎＨｕａ（韩骅）；ＷａｎｇＣｈｅｎｇｊｉ（王成济）（...     

人白细胞介素－2基因真核表达载体pDORIL－2的构建

目的：构建逆转录病毒载体介导的人白细胞介素－２（ＩＬ－２）基因真核细胞表达载体．方法：合成带有和表达载体克隆位点相匹配酶切位点的聚合酶链式反应（ＰＣＲ）引物，用ＰＣＲ方法从质粒ｐＨＩＧ５３中扩增出人的ＩＬ－２ｃＤＮＡ，将其定向克隆人表达载体ｐＤＯＲ－ｎｅｏ．结果：ＰＣＲ扩增出的ＩＬ－２ｃＤＮＡ片段约４７５ｂｐ，酶切鉴定该片段已被克隆人ｐＤＯＲ－ｎｅｏ的多克隆位点，构建成人ＩＬ－２基因真核表达载体ｐＤＯＲＩＬ－２．结论：用ＰＣＲ扩增目的基因片断，有快速、获得量大、可改变酶切位点等优点；ｐＤＯＲＩＬ－２的构建成功，为开展基因治疗的研究打下了基础。