基因芯片筛选抗胸腺细胞血清性肾炎大鼠肾组织基因表达差异的初步研究

目的： 利用基因芯片检查大鼠系膜增生性肾炎，即抗胸腺细胞血清性肾炎(ATSN)模型大鼠发病 40 min 和 5 d 时肾组织相关基因的表达情况，探讨ATSN大鼠不同时相肾组织基因表达的差异并作功能分析。 方法： 用抗胸腺细胞抗血清（ATS）复制大鼠ATSN模型，抽提发病 40 min 和 5 d 时肾组织RNA，分别用逆转录合成荧光分子掺入的cDNA作探针进行基因芯片杂交。用Agilent 扫描仪扫描，Imagene软件读取数据，最后用Genespring进行normalize处理和差异表达基因的筛选。差异基因筛选标准为实验组/对照组比值（ratio）>或=2为上调基因，实验组/对照组ratio<或=0.5为下调基因。然后选取上调和下调基因登录GenBank查找其相关功能。 结果： 在 9 234 个大鼠基因中（去除质控基因），ATSN大鼠 40 min 时肾组织上调基因为341个，其中部分为凋亡相关的调控基因，部分为增生相关基因及一些与信号转导有关的基因；下调基因为392个，其中一些是酶类基因，部分为生长因子和细胞因子受体基因等，其余大多上调和下调基因功能不详。ATSN发病 5 d 时，肾组织上调基因是213个，包括增生相关基因、信号转导相关基因等；下调基因119个，其中部分为酶类和细胞因子相关基因。5 d 时上调和下调基因大多功能不清楚。 结论： 大鼠ATSN发病早期（40 min），致病相关基因已被激活（如凋亡和增生相关基因），其中相关信号转导分子基因也表达上调，而在ATSN大鼠发病 5 d 时，基因表达谱有所改变，其中涉及的基因多为增生相关基因和信号转导相关基因。     

抗胸腺细胞血清性肾炎模型大鼠肾小球中C5b-9的沉积及NO、TNFα含量分析

目的: 探讨抗胸腺细胞血清性肾炎(ATSN)大鼠肾小球内C5b-9复合物的沉积与某些炎症介质和细胞因子如:一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子α(TNFα)的含量情况。 方法: 大鼠一次性静脉注射抗胸腺细胞抗血清(ATS)建立ATSN模型,定期对ATSN大鼠肾小球中的补体C5b-9复合物进行免疫组化染色定位、显微图像扫描半定量分析;并对有C5b-9包绕的肾小球系膜细胞(MC)进行计数。测定ATSN大鼠肾中诱生型NO合酶(iNOS) mRNA的表达、尿液中NO的代谢产物(NO^-₂／NO^-₃)及TNFα的排泄量。 结果: ATSN模型大鼠肾小球MC先溶解坏死后继发增生,病变早期(溶解时相)补体C5b-9复合物主要定位于肾小球系膜区及MC表面;随着病程的进展,被C5b-9包绕的MC逐渐减少, 病程初期ATSN大鼠肾小球MC有明显的 iNOS mRNA表达, 尿液中NO^-₂／NO^-₃ 和TNFα的排泄量也明显增加。在ATSN病变的增生阶段(一般7 d后),上述指标的变化逐渐趋缓。 结论: ATSN模型大鼠肾小球中MC逐渐溶解与补体C5b-9沉积及NO和TNFα的合成与释放有一定关系。     

亚溶解剂量的补体C5b-9复合物诱导肾小球系膜细胞增生及其NF-κB活化的作用

目的：研究亚溶解剂量补体C5b-9（SC5b-9）复合物刺激大鼠肾小球系膜细胞（GMCs）增生和细胞外基质（ECM）分泌的作用，并探讨NF-κB核转录因子是否介入SC5b-9的促增生效应。方法：体外纯培养大鼠GMCs，并行光镜、电镜及功能鉴定。质控SC5b-9后，将GMCs分为5组，即SC5b-9刺激组、SC5b-9＋PDTC组（吡咯啉烷二甲基硫脲）、ATS组、灭活人血清组及完全营养液组。应用RT-PCR检测40min PCNA和FN mRNA水平；同时应用免疫组化检测18 h GMCs增殖细胞核抗原（PCNA）、平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和纤维粘连蛋白（FN）及细胞核内NF-κBp65表达情况。结果：实验40min，SC5b-9刺激组PCNA和FN mRNA表达上调，PDTC处理后表达则明显下降，其余3组PCNA均呈阴性，另3组FN则均有一定基础表达。SC5b-9刺激组，GMCs免疫组化显示：PCNA、α-SMA、FN、NF-κBp65表达增加，PDTC处理后则4者表达明显下调，其余各组，PCNA、α-SMA、NF-κRn65均呈阴性，FN亦有一定的基础表达．结论．SC5b-9可能通过激活NF-κR促讲GMCs增生和ECM分泌.     

内镜下钛夹钳夹治疗Dieulafoy病出血的体会

目的观察Dieulafoy病内镜下钛夹止血的临床效果。方法对11例Dieulafoy病患者在内镜下确诊后即行钛夹止血,其中胃大部切除毕氏II术后吻合口4例,胃底1例,胃窦1例,胃底体交界2例,十二指肠球部2例,回肠末段1例。其中1例肝癌晚期合并重度食管静脉曲张。结果所有病例均在内镜下行钛夹止血,一次成功11例,其中1例第2天,1例第25d再次出血,行急诊胃镜见钛夹脱落再行钛夹止血成功。平均随访90d,未见复发。结论内镜下钛夹止血治疗Dieulafoy病疗效确切,组织损伤小,复发率低,值得开展推广应用。     

慢性阻塞性肺疾病急性加重期机械通气病人早期肠内营养的循证护理

慢性阻塞性肺疾病(COPD)病人因呼吸负荷重、能耗大,常因进食少、缺氧、心功能衰竭等原因,容易发生营养不良。而营养不良会导致呼吸肌作功无力,肺顺应性下降,严重影响呼吸功能,使病人难以脱离机械通气,产生恶性循环。因此,对于COPD     

芽孢杆菌外毒素保护性抗原与上游强启动子穿梭载体的构建

目的 构建携带炭疽芽孢杆菌保护性抗原（PA）的两种穿梭载体与上游强启动子。方法 将解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶启动子克隆到载体pblueseript—sk（＋）上，构建载体pBLKSP；以A16R疫苗株（Tox＋，Cap-，弱毒株）DNA为模板，设计合成内外侧引物巢式PCR扩增获得保护性抗原（PA）的全基因，先克隆到载体pBLKSP，再将其和质粒PUB110重组构建成两种穿梭载体。结果 酶切鉴定显示所切下的片段大小均与预计相符。测序结果与文献报道序列及预计结果一致。结论 成功构建了带有强启动子的两种穿梭载体。为在无毒炭疽疫苗株中的高效表达和炭疽芽孢杆菌的分子疫苗研究奠定了基础。     

NGFI-B在大鼠抗胸腺细胞血清性肾炎模型肾组织的表达

目的:观察NGFI-B mRNA在大鼠抗胸腺细胞血清性肾炎(anti-thymocyte serum induced nephritis,AT- SN)不同发病时相肾组织的表达水平,从基因层面上探讨ATSN大鼠肾小球系膜细胞(mesangial cell,MC)凋亡的可能原因。方法:复制ATSN动物模型,应用RT-PCR分析NCFI-B的表达水平。结果:应用RT-PCR检查,结果显示,实验40min,NGFI-B mRNA表达显著高于对照组,且实验40min,NGFI-B mRNA水平较5d时明显增多。结论:NGFI-B基因表达上调可能与肾小球MC的早期凋亡存在一定的联系。     

高效液相色谱梯度洗脱法测定大鼠胆汁中9-硝基喜树碱含量

目的建立大鼠胆汁中 9 硝基喜树碱的高效液相色谱梯度洗脱方法。方法胆汁样品经乙腈 水 ( 1∶1 )稀释后 ,直接进样。检测波长为 370nm ,采用HypersilBDSC18柱 ( 5 μm,1 5 0mm× 4 6mmI D )分离 ,使用以乙腈 2 %甲酸水溶液为流动相的二元梯度洗脱方法。结果线性范围为 0 5～2 5 μg/mL,定量限为 0 5 μg/mL。结论本法操作简便 ,成功应用于胆汁中 9 硝基喜树碱的含量的测定及胆汁中 9 硝基喜树碱代谢物的初步研究。     

内镜下尼龙绳套扎联合高频电治疗消化道大息肉

目的探讨内镜下尼龙绳套扎联合高频电凝电切术治疗消化道大息肉的使用方法 ,并评价其疗效及安全性。方法对40枚消化道大息肉（〉10mm）先行尼龙绳套扎,再行高频电凝切除;2周后内镜复查创面愈合情况。结果 40例中38例一次性套扎并切除成功,成功率为95%;2例无法套扎而改其他方法治疗。术中发生渗血2例,均微波和钛夹止血成功,无大出血及穿孔病例。2周后复查发现31例创面完全愈合,5例创面处形成浅溃疡,2例创面仍有残留组织。结论内镜下尼龙绳套扎联合高频电凝电切术治疗消化道大息肉是一种有效、安全的好方法 。     

胶囊内镜50例临床分析

目的通过对胶囊内镜检查情况分析,评价胶囊内镜检查在临床上应用的效果。方法对50例怀疑小肠疾病或不能耐受胃镜检查的患者或体检者行胶囊内镜检查,并对其结果进行分析。结果所有患者检查无不适感,49例完成小肠检查,1例胶囊滞留于胃,未完成检查。13例不明原因胃肠道出血中患者12例完成全小肠检查,10例发现小肠病变。结论胶囊内镜是一种无痛苦、无创、安全的上消化道检查手段,是小肠疾病尤其是不明原因胃肠道出血诊断的首选方法。