HLA与免疫性疾病的研究进展

近年来,分子生物学技术的发展及其在HLA研究中的应用,使HLA研究取得了极大的进展,人类主要组织相容性复合体即HLA复合体,已完成全部基因的测序工作,基因图发表于1999年10月底的Nature杂志。HLA研究推动了HLA与疾病关联的分子机理研究,这有助于了解遗传因素在疾病发病机制中的作用,而且对促进疾病发病机理、基因调控、诊断及防治等方面的研究起到了积极作用,也是一个揭示MHC功能及其免疫调节机制的极佳切入口。     

酶联免疫法检测PAF受体RNA的聚合酶链反应产物

目的：建立PCR—ELISA法检测附受体RNA。方法：提取20例银屑病病人和20例正常对照组血液单个核细胞标本中的总RNA，用双标记的PAF—R(Biotion与Digoxin标记)及β-actin(Biotin或Fluorescein标记)引物进行RT-PCR，用ELISA检测PCR产物，用传统的琼脂糖凝胶电泳对照。结果；ELISA法和琼脂糖凝胶电泳法对β-actin检测结果均为阳性；ELISA法检测PAF-R，20例病人标本均为阳性，20例对照组16例阳性；琼脂糖凝胶电泳法检测PAF—R，20例病人标本18例阳性，20例对照组16例阳性。结论：PCR-ELISA引物双标记法检测PAF—R操作简单，有较高的敏感性。     

人IL-31基因克隆、表达及在皮肤炎症中的作用

目的 克隆人IL-31基因,构建原核表达载体,并诱导其在大肠杆菌中表达,研究hIL-31蛋白与皮肤炎症的关系.方法 采用RT-PCR克隆人IL-31基因,将其克隆到原核表达载体pET28a( ),并通过IPTG诱导目的基因在大肠杆菌中表达,用该目的蛋白刺激人表皮角质细胞HaCaT,RT-PCR检测趋化因子MIP-3β、TARC及TCA-3(I-309)mRNA的表达;小鼠皮内注射该目的蛋白,观察局部炎症表现,皮肤标本HE染色观察皮肤炎性特征,采血进行白细胞计数及分类,ELISA法检测血清IL-1βIL-6和TNF-α水平,流式细胞仪分析胸腺及脾脏T细胞亚群.结果 成功获得495bp的人IL-31基因,原核表达质粒构建正确,IPTG诱导目的基因在大肠杆菌中大量表达;该目的蛋白可刺激HaCaT表达趋化因子MIP-3β、TARC、I-309;小鼠皮肤注射部位有脱毛,HE染色可见炎性细胞浸润,外周血白细胞总数增加,中性粒细胞比例增高,血清IL-1β、IL-6和TNF-α水平增高,脾脏CD4 T细胞百分比增高,CD8 T细胞百分比减少.结论 人IL-31基因克隆及原核表达已获成功,hIL-31蛋白可刺激HaCaT细胞表达MIP-3β、TARC、I-309,诱导小鼠皮肤炎症反应.     

HLA-DR、DQ基因多态性与遵义地区汉族流行性出血热相关性的研究

目的：探讨HIA-DR、DQ基因多态性与遵义地区汉族流行性出血热（EHF）的关联性。方法：采用群体研究方法，应用聚合酶链反应-序列特异性引物（PCR-SSP）技术对100例流行性出血热患者（患者组）和100例健康对照者（健康对照组）进行HIA-DR、DQ基因分型，比较其等位基因频率（GF），并计算其相对危险度（RR）。结果：EHF患者组HLA-DRB1＊16基因频率较对照组明显增高（Pat=3．58，χ^2=4．916，P=0．0266〈0．05）；患者组HIA-DQ各等位基因频率与对照组比较差异无显著性。结论：研究提示在遵义地区汉族人群中，HLA-DRB1＊16基因与EHF呈正相关，HLA-DRB1＊16基因可能是EHF的易感基因。     

CpG基序增强DNA疫苗免疫原性研究进展

DNA疫苗广泛用于细菌、病毒性疾病以及肿瘤等的预防和治疗研究，但已报道的临床实验研究表明并未取得良好的免疫效果。未甲基化胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸(CpG)寡脱氧核苷酸(oligodeoxynucleotide，ODN)具有较强的免疫佐剂特性。近年来有不少学者作了关于CpG—ODN增强DNA疫苗免疫原性的研究，本文就有关研究进展作一综述。     

肺结核患者外周血树突状细胞亚群的变化

目的 通过对肺结核患者外周血树突细胞(dendritic cell,DC)亚群数量的观察,了解DC亚群在肺结核病程中的变化情况,探讨DC亚群在肺结核发病机制中的作用及临床意义.方法 采用流式细胞术的三色分析法检测70例肺结核患者外周血的DC1及DC2亚群. 结果肺结核活动期患者外周血DC1/PBMC(外周血单个核细胞)、DC2/PBMC及DC1、DC2的绝对数均明显低于健康者(P＜0.05),DC1/DC2值明显高于健康者(P＜0.05);肺结核非活动期患者与健康者外周血DC1/PBMC、DC2/PBMC及DC1、DC2的绝对数比较均无显著性差异(P＞0.05),与健康者比较DC1/DC2值无显著性差异(P＞0.05);肺结核活动期患者外周血DC的绝对数明显低于非活动期(P＜0.05). 结论肺结核患者外周血DC1和DC2数均明显降低.提示外周血树突细胞亚群(DC1、DC2)的检测可了解肺结核患者的免疫功能状态及反映病情变化,也说明DC在结核病免疫损伤的发生发展中发挥一定作用.     

小鼠乳腺癌实验动物模型中树突状细胞的功能检测及意义

目的观察在肿瘤生长过程中DCs的功能是否存在变化，并探讨其意义。方法建立小鼠乳腺癌动物模型，用FACS分析荷瘤早、晚期时间点肿瘤浸润淋巴细胞中DCs的比例及其MHC-Ⅱ类分子和协同刺激分子CD80、CD86的表达；用ELISA法检测DCs的细胞因子IL-4、IL-10、IFN-γ和TNF-α的分泌情况；观察DCs对CD4^＋T细胞增殖及对CD8^＋T细胞杀伤功能的影响。结果与荷瘤早期相比，荷瘤晚期肿瘤浸润淋巴细胞中DCs的比例从11．76±2．3％增加到17．45±3．2％（p〈0．05）；晚期DCs下调表达MHC分子及协同刺激分子CD86，而上调表达IL-4、IL-10；晚期DCs刺激CD4^＋T细胞增值的能力明显减弱，并且对CD8^＋T细胞的杀伤能力的刺激作用也显著降低。结论随着荷瘤时间的延长，DCs的成熟度及其对T淋巴细胞的免疫刺激作用逐渐降低，这可能与肿瘤的免疫逃逸密切相关。     

空肠弯曲菌亚单位脂质体佐剂疫苗诱导抗体产生规律的研究

目的:探索空肠弯曲菌(campylobacter jejuni,CJ)亚单位脂质体佐剂疫苗诱导抗体产生的一般规律,为该疫苗的接种打下一定基础.方法:将CJ疫苗经肌肉注射免疫新西兰家兔后动态收集血清,以ELISA间接法测其特异性IgG OD值.结果:第一次免疫后10天左右,血清中即可检测到IgG,50天左右即达到高峰,此后逐渐降低,较高抗体水平可维持6个月左右.结论:CJ亚单位疫苗在1月内接种3次最佳,6个月后应该加强免疫.     

EHF疫苗接种者 IL-12、sICAM-1、CD28分子及B7-2基因检测

目的探讨EHF疫苗接种机体后细胞免疫应答的机制.方法EHF双价灭活疫苗接种健康志愿者,采集接种前后静脉血分离血清和淋巴细胞.ELISA法检测免疫前后血清中IL-12、sICAM-1表达水平;IFA测定免疫前后淋巴细胞上CD28的表达;PCR-SSP检测免疫前淋巴细胞的B7-2基因.结果免疫后血清IL-12、sICAM-1表达水平升高,单因素方差分析有统计学差异;免疫前后淋巴细胞上CD28表达,x2检验示有显著性差异;PCR-SSP方法检测免疫前淋巴细胞B7-2基因阳性5人,其中汉族3人,侗族1人和布依族1人.结论EHF灭活疫苗接种健康志愿者后,显示机体产生了Th细胞介导的免疫应答.     

流行性出血热免疫学诊断技术研究及应用

流行性出血热(EHF)是本世纪三十年代初,在黑龙江下游,中苏国境交界地区最早发现的一种疫源性疾病。但因无特异性检测方法,以致防治研究进展缓慢。1976年朝鲜大学医学院病毒研究所所长Lee HW(李镐汪)以间接免疫荧光(IFA)技术首先检测黑线姬鼠的肾、肺组织与本病病人的恢复期血清可呈特异荧光反应