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目的 通过基因克隆在巴斯德毕赤酵母中表达人自身抗原Sm B'.方法 PCR扩增Sm B'基因,与酵母表达载体pPIC9k重组,构建表达质粒pPIC9k-Sm B'.用电穿孔法转化酵母菌Sm D1168,在MD平板上筛选重组克隆,用G418快速筛选高拷贝转化子,阳性克隆经甲醇诱导表达后,培养上清液用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(WB)鉴定,并用免疫酶斑点法和免疫印迹法(immunoblot,IBT)检测与评价分析30例系统性红斑狼疮(SLE)患者、30例混合结缔组织病患者和30名健康体检者血清中抗-Sm B'水平差异.结果 PCR产物约700 bp,与预期657 bp接近,pPIC9k-Sm B'重组阳性克隆测序结果与核酸数据库报道完全一致,双酶切鉴定正确,表达产物Sm B'的相对分子质量约32 000,WB法证实表达产物具有天然Sm B'分子的免疫原性,阴性对照菌未见目的 表达条带.免疫酶斑点法检测阳性率为46.7%(42/90),IBT的检测阳性率为51.1%(46/90);2种方法检测结果一致性较佳(Kappa值=0.911 2,P<0.01).结论 Sm B'在巴斯德毕赤酵母中分泌表达成功,这为Sm B'试剂盒研究奠定了基础. 相似文献
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目的了解17株亚胺培南耐药肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌相关耐药基因及分子流行病学状况。方法采用Hodge试验检测碳青霉烯酶表型;采用PCR法检测碳青霉烯酶、I类头孢菌素酶(AmpC)和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)耐药基因,进行测序及网上比对确定基因型;采用肠杆菌科基因间重复序列(ERIC)和多位点序列分型(MLST)对菌株进行同源性和遗传相关性分析。结果 15株肺炎克雷伯菌检出KPC-2、TEM-1、SHV和CTX-M型基因,SHV12和CTX-M-24为主要基因亚型;2株大肠埃希菌检出KPC-2基因,其中1株大肠埃希菌检出TEM-1和CTX-M-24基因,另一株大肠埃希菌检出CMY-42和OXA-1基因;17株菌未检测到IMP、VIM和NDM碳青霉烯酶。15株肺炎克雷伯菌分为A、B和C三个ERIC类别,12株A类为ST11型,2株B类为ST290和ST147型,1株C类为ST967型,2株大肠埃希菌是同一ERIC类别。结论 17株菌亚胺培南耐药主要与KPC-2基因有关,产KPC-2肺炎克雷伯菌在本院神经外科病区呈克隆传播流行,ST11型为此次流行的主要型别;17株菌同时也是产ESBLs株或产ApmC酶株;首次在世界范围内发现ST290和ST967型产KPC-2肺炎克雷伯菌;临床科室应加强院内感染控制措施。 相似文献
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钾钠火焰光度计本身虽有压缩空气滤水器,但常因使用环境湿度较大时不能有效控制,进入气路系统的压缩气体仍带入不少水汽,在气路的各接口处及阀门处贮积水珠,可影响仪器的稳定性及临床标本检测的准确性.为克服上述影响,作者经反复研究及实 相似文献
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癌抗原在胸腹腔积液及相关疾病诊断与治疗中的应用 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:探讨癌抗原125在胸腹腔积液及相关肝胆、肺及心血管疾病中的临床价值。方法:采用美国Bayer全自动化学发光免疫分析法测定健康对照组及患者血清标本的癌抗原125、癌胚抗原含量,并用日本OLYMPUS全自动生化分析仪检测相应患者血清γ-谷氨酰转肽酶的含量。结果:癌抗原125升高次序为:腹水、胸水、胸腔恶性肿瘤、心力衰竭、腹腔积液-血清、肝硬化、胸腔积液-血清、肺癌、肝癌/胆管癌。癌抗原125在胸腔积液、腹腔积液患者胸水、腹水比血清升高更显著。肺癌、肺炎患者血清癌抗原125联合测定癌胚抗原可鉴别诊断。对肝胆疾病联合测定血清癌胚抗原、γ-谷氨酰转肽酶可提高阳性率。心脑血管疾病主要是心力衰竭癌抗原125升高。结论:血清癌抗原125在良性与恶性疾病中均有升高,在胸腔积液、腹腔积液升高显著。肝硬化癌抗原125升高,肝癌癌胚抗原升高。 相似文献
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目的 探讨肝功常用6种血清酶ALT、AST、LDH、GGT、ALP、HBDH,监测肝移植.方法 分析49例原位肝移植术后72 h内AST或ALT>2000 IU/L作为移植物初期功能不良(IPGF)组,<2000 IU/L作为非IPGF组.分析存活>3个月组34例(>34M组)和<34M组15例及移植后12天肝酶的动态变化.结果 IPGF组11例,非IPGF组38例.6种肝功酶IPGF组降ALP外其余均显著高于非IPGF组,且IPGF组的存活率较低.移植后12天后期LDH>250 U/L预后不好,<250 U/L预后较好.GGT升高峰值出现早的预后较好,反之差.结论 转氨酶对判别IPGF和预后有重要意义.LDH和GGF也是较好的预后指标. 相似文献
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人干燥综合征B抗原在巴斯德毕赤酵母菌中的高效分泌表达研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:通过基因克隆在巴斯德毕赤酵母菌中表达人干燥综合征B(SS—B)抗原。方法:PCR扩增SS—B基因,与酵母菌表达载体pPIC9k重组,构建表达质粒pPIC9k—SS—B。用电穿孔法转化酵母菌SMD1168,在MD平板上筛选重组克隆,用G418快速筛选高拷贝转化子,阳性克隆经甲醇诱导表达后,培养上清用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)和免疫酶斑点法鉴定。结果:PCR产物约为1200bp,与预期1224bp接近;pPIC9k—SS-B重组阳性克隆测序结果与GenBank核酸数据库报道完全一致,双酶切鉴定正确。表达产物SS-B的相对分子质量约48000,高拷贝毕赤酵母菌转化菌显著高于低拷贝的表达水平,表达量占分泌总蛋白的60%以上,产物浓度为800~900mg/L。免疫酶斑点法证实表达产物具有天然SS—B分子的免疫原性。阴性对照菌未见目的表达条带。结论:SS—B存巴斯德毕赤酵母菌中获得高效分泌表达,为下一步研究打下了基础。 相似文献