恶性血液病患者外周血中性粒细胞CD64指数检测方法初探

目的:改进部分恶性血液病患者的nCD64指数检测方法,提高nCD64指数在恶性血液病患者中的检出率及其准确性。方法:采用队列研究方法,对血液科病房可疑细菌感染的恶性血液病患者(255例次)进行nCD64指数检测。入组在检测过程中因异常细胞干扰而影响标本nCD64指数的检测,则通过在应用原试剂盒常规检测的基础上加入抗体CD45、CD15和CD10,以更准确地区分出中性粒细胞以进行分群,测得改良后nCD64指数。比较检测方法改良前后nCD64指数及nCD64指数、PCT、CRP对于脓毒症的诊断效力。结果:60例样本在检测过程中受到异常细胞干扰,其中18例样本因细胞分解困难导致检测失败。方法改良后18例样本均得到有效的检测结果。脓毒症组恶性血液病患者检测方法改良前后nCD64指数、PCT、CRP均高于非脓毒症组(P0.05)。改良后nCD64指数对于脓毒症诊断效率优于PCT、CRP;改良后nCD64指数具有与改良前nCD64指数相当的诊断效率,且结果可靠性更高。结论:对于nCD64指数检测过程中受异常细胞干扰的恶性血液病患者样本,可根据患者的血液病类别加入相应抗体以更精准对外周血中性粒细胞进行设门,从而通过准确识别中性粒细胞群以提高nCD64指数检测的检出率及准确性。     

炎调方对脓毒症急性肺损伤大鼠肺组织热休克蛋白70 mRNA和p38丝裂原活化蛋白激酶的影响

目的 探讨炎调方对脓毒症急性肺损伤（ALI）大鼠肺组织热休克蛋白70（HSP70）mRNA和p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）的调控作用。方法 将清洁级健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、炎调方（生药量9.9 g/kg）组、谷氨酰胺组、槲皮素组,采用盲肠结扎穿孔术法（CLP）建立脓毒症ALI模型。观察大鼠一般状况,各组分别于术后4、6、8、10、12、18、24 h采集肺组织标本,HE染色观察肺组织病理学改变;实时荧光定量PCR法检测肺组织HSP70 mRNA的表达水平;Western Blotting法检测肺组织p38 MAPK的蛋白表达水平。结果 炎调方组、谷氨酰胺组大鼠与模型组比较,术后不同时间点的精神状态、活动量等明显好转,可见少量稀便;肺组织损伤程度明显减轻,腔内出血较少,肺实变较轻。炎调方组不同时间点的肺组织HSP70 mRNA表达水平显著高于假手术组、模型组（除24 h时间点外）、槲皮素组（P<0.01）,在8、12、18、24 h时间点显著低于谷氨酰胺组（P<0.01）;炎调方组不同时间点的肺组织p38 MAPK的蛋白表达量显著低于模型组、槲皮素组（P<0.01）,在4、6、10 h时间点明显低于谷氨酰胺组（P<0.05、0.01）。结论 炎调方可通过上调肺组织HSP70 mRNA的表达,下调肺组织p38 MAPK的蛋白表达,改善肺组织损伤,对脓毒症ALI发挥保护作用。     

小鼠IL-4重组质粒的构建及目的蛋白的表达和纯化

目的 构建重组小鼠白细胞介素-4(rmIL-4)原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,纯化目的蛋白并鉴定.方法 将优化后的小鼠IL-4 cDNA片段克隆到原核表达载体pET-32a (+)上,获得重组质粒pET32/rmIL-4,转入BL21(DE3)中经IPTG诱导表达得到包涵体.经复性处理后,依次用阴离子交换柱和分子筛纯化蛋白.对纯化得到的蛋白用Western blot检验免疫学特异性,用mIL-4生长依赖性细胞株CTLL-2增殖实验和动物实验测定其生物学活性.结果 经酶切和测序证实重组质粒pET32/rmIL-4构建成功.诱导得到的包涵体用3 mol/L盐酸胍溶液洗涤后溶于加有β-巯基乙醇的7 mol/L盐酸胍溶液中变性,在pH9.5的条件下梯度透析复性.纯化出的蛋白经Western blot鉴定,能与抗小鼠IL-4抗体特异性结合;经细胞和动物实验鉴定,rmIL-4蛋白具有生物学活性,能刺激mIL-4生长依赖性细胞株CTLL-2增殖,使小鼠体内细胞因子发生从TH1到TH2的漂移.结论 成功制备了高纯度、具有生物学活性的小鼠IL-4,为进一步研究其生物学功能提供了条件.