亮氨酸氨基肽酶在妊娠妇女血清中的水平变化及其意义

目的:探讨血清亮氨酸氨基肽酶(LAP)在妊娠妇女不同时期血清中的变化规律及其临床意义。方法:选取2011年1月~2013年12月在该院产检的正常妊娠妇女180例,根据孕周分为早期组、中期组和晚期组,每组各60例,另选取60例健康未孕妇女为未孕组;同时选取该院收治的妊娠期高血压疾病妇女33例为妊娠期高血压疾病组、早产孕妇22例为早产组,采用速率法分别检测各组孕妇血清LAP水平并进行比较。结果:未孕组、早期组、中期组、晚期组妇女的血清LAP、血清肝胆酸(CG)、碱性磷酸酶(ALP)、α-L-岩藻糖苷酶(AFU)水平比较,差异有统计学意义(P均<0.05)。妊娠期高血压疾病组的CG、ALP、AFU、LAP水平显著高于早期组、中期组和晚期组(P均<0.05);早产组的CG、ALP、AFU、LAP水平显著高于早期组、中期组(P均<0.05),仅CG水平高于晚期组(P<0.05)。结论:随着妊娠周期的增加,妊娠妇女的血清LAP水平逐步升高,在合并妊娠期高血压疾病时LAP升高更加显著,结合CG、ALP、AFU水平的变化能够对妊娠期高血压疾病的发病情况进行动态监测。     

GRP78在三种不同乳腺癌细胞的表达及其意义

目的：探讨葡萄糖调节蛋白78（GRP78）在高低转移对的乳腺癌细胞的表达及其意义。方法：分别采用半定量RT-PCR，蛋白免疫印迹法和细胞免疫荧光方法检测GRP78在三种不同乳腺癌细胞株（MDA-MB-231、435S和MCF-7）的mRNA蛋白表达及其亚细胞定位情况，结果：GRP78mRNA和蛋白在（MDA-MB-231细胞的表达最高，其次为（MDA-MB-435S，在MCF-7的表达最低；共聚焦显微镜下观察到GRP78蛋白主要定位在细胞浆，在细胞膜以及细胞核内也有少量的表达，，结论：GRit／8是乳腺癌的一个促癌基因，在乳腺癌的发生、发展过程中发挥着重要作用，其可作为抗乳腺腺癌治疗的一个新的分子靶点。     

TSA增强人卵巢癌顺铂耐药株C13对顺铂敏感性的体外研究

目的：本研究探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂triChoStatin A（TSA）联合化疗药物顺铂（DDP）处理人卵巢癌顺铂耐药株C13＊的协同效应。方法：MTT法观察TSA、DDP、TSA＋DDP对C13＊细胞增殖的影响；克隆形成实验分别检测DDP、TSA＋DDP处理C13＊的克隆形成率；流式细胞仪检测凋亡和分析细胞周期；Hochest33258观察凋亡细胞形态。结果：40nmol／L TSA处理C13＊12h，细胞的凋亡率为2．99％，MTT显示生长未受明显影响；TSA＋DDP组较DDP组C13＊对DDP的作用更为敏感，在DDP为20～30μmol／L时差异显著（P〈0．05）。结论：一定浓度的TSA和DDP联合应用可以增强人卵巢癌顺铂耐药株C13＊对顺铂的敏感性。     

一种与前列腺癌高转移细胞表面受体特异性结合的多肽片段的筛选及验证北大核心CSCD

目的利用细菌鞭毛肽库技术筛选与高转移潜能的前列腺癌PC-3M-1E8细胞特异结合的多肽片段。方法利用细菌鞭毛肽库对人前列腺癌高低转移配对细胞株PC-3M-1E8和PC-3M-2B4进行筛选,获得与前列腺癌高转移细胞亲和的细菌克隆。将结合能力最强细菌克隆所共同拥有的重复多肽序列挑选出来并化学合成;利用荧光染色和流式细胞仪,通过细胞亲和、竞争拮抗实验及荷瘤小鼠模型,鉴定合成肽与前列腺癌高转移细胞的体内外的结合特异性。结果筛选出一段核心序列为NVVRQ的五肽,命名为TMTP1;FITC-TMTP1可特异地与PC-3M-1E8高度亲和,且这种结合是浓度依赖并能为游离的TMTP1所拮抗;荧光显微镜检测小鼠肿瘤及正常组织器官冰冻切片显示FITC-TMTP1在肿瘤原发灶及转移灶的荧光信号强度也要显著强于正常组织器官。结论筛选获得的短肽TMTP1可以特异地与高转移潜能的前列腺癌细胞结合,为前列腺癌的靶向诊疗提供一种可能的标志物及靶向载体。     

葡萄糖调节蛋白78在乳腺癌细胞侵袭及转移中的作用

目的探讨葡萄糖调节蛋白78（GRP78）在乳腺癌细胞（231）侵袭、转移过程所起的作用。方法构建GRP78真核反义表达载体，转染入231细胞，利用PCR和蛋白印迹方法检测转染有反义GRP78的231细胞和MCF-7细胞的GRP78表达情况；并用伤口愈合实验和体外侵袭实验证验转染细胞转移和侵袭的变化。结果转染反义GRP78的231细胞内GRP78RNA和蛋白表达明显低于未转染细胞；反义GRP78基因对乳腺癌细胞231细胞的侵袭和转移有抑制作用。结论GRP78是乳腺癌的一个促癌基因，下调GRP78基因表达能明显抑制乳腺癌细胞的侵袭和转移能力。GRP78为乳腺癌基因治疗的一个新靶点。     

Suppression of EphB4 improves the inhibitory effect of mTOR shRNA on the biological behaviors of ovarian cancer cells by down-regulating Akt phosphorylation

The aim of the present study was to examine the effects of suppression of EphB4 and/or mTOR on the biological behaviors of ovarian cancer cells, and the potential regulatory pathways. An-tisense EphB4 vectors and shRNA vectors targeting mammalian target of rapamycin (mTOR) were constructed and transfected into A2780 and SKOV3 cells (two ovarian cancer cell lines). The effects of the antisense EphB4 vectors and the shRNA vectors on the proliferation, apoptosis and invasion of ovarian cancer cells were measured, and the expression of EphB4, mTOR and Akt detected. The results showed that transfection with mTOR shRNA could inhibit growth, induce apoptosis, and reduce invasive ability of ovarian cancer cells, which was accompanied by downregulation of EphB4, mTOR and Akt. The inhibitory effects on cell growth caused by mTOR shRNA alone were weaker than those by antisense pEGFP-C1-EphB4. In the antisense pEGFP-C1-EphB4-transfected cells, it was found that EphB4 knockdown could decrease the mTOR expression and slightly reduce the Akt phosphorylation. Significant suppressive effects on cell growth were observed in cells co-transfected with antisense pEGFP-C1-EphB4 and mTOR shRNA. In co-transfection group, the expression levels of EphB4, mTOR and Akt were distinctly lower than those in other groups. It was concluded that suppression of EphB4 may inhibit the growth of ovarian cancer cells by downregulation of the PI3K/Akt/mTOR pathway, and reverse Akt phosphorylation induced by mTOR shRNA. Inhibition of EphB4 and mTOR combined may cooperatively suppress the biological behaviors of ovarian cancer cells.     

新型肿瘤导向肽TMTP1融合抗菌肽抑制裸鼠胃癌和前列腺癌移植瘤的生长与转移

目的 探讨新型肿瘤导向肽TMTP1与抗菌肽D(KLAKLAK)2偶联后对胃癌、前列腺癌生长与转移的抑制效应.方法 建立人前列腺癌裸鼠皮下移植瘤模型和胃癌裸鼠原位移植瘤模型,分别腹腔注射50 μmol/L磷酸盐缓冲液(对照组)、50 μmol/L TMTP1(TMTP1组)和50 μmoL/LTMTP1-GG-D(KLAKLAK)2[TMTP1-GG-D(KLAKLAK)2组],验证新型融合多肽TMTP1-GG-D(KLAKLAK)2对肿瘤组织的亲和能力,测量瘤体大小,行形态学观察,采用原位细胞凋亡法检测肿瘤组织的凋亡并绘制生存曲线.结果 在前列腺癌皮下移植瘤中,对照组、TMTP1组和TMTP1-GG-D(KLAKLAK)2组裸鼠的中位生存时间分别为50、55和70 d(P ＜0.05),肿瘤体积分别为(2.5±0.3)cm3、(1.8±0.2)cm3和(0.3 ±0.1)cm3(P ＜0.01).在胃癌皮下移植瘤中,对照组、TMTP1组和TMTP1-GG-D (KLAKLAK)2组裸鼠的中位生存时间分别为25、30和45 d(P ＜0.05),肿瘤体积分别为(3.8±0.4)cm3、(3.2 ±0.2)cm3和(0.4±0.1)cm3(p＜0.01).在胃癌原位肿瘤中,对照组和TMTP1组裸鼠的胃组织可见巨大的原位肿瘤,而TMTP1-GG-D(KLAKLAK)2组原位肿瘤体积明显缩小.对照组和TMTP1组裸鼠的肝脏、脾脏和腹壁均可见白色转移灶,TMTP1-GG-D(KLAKLAK)2组裸鼠无肉眼可见转移灶.对照组、TMTP1组和TMTP1-GG-D(KLAKLAK)2组细胞的凋亡率分别为(31.9±1.5)％、(37.2±2.3)％和(69.7±2.1)％(P＜0.01).结论 新型肿瘤导向肽TMTP1与抗菌肽融合后可有效抑制肿瘤的生长与转移,有望成为一种新型的抗肿瘤药物.     

肿瘤靶向多肽TMTP1偶联阿霉素选择性地抑制高侵袭性宫颈癌细胞株生长的体外研究

目的:合成一种新型的抗肿瘤药物TMTP1-Dox,探讨其应用于宫颈癌化疗的潜在应用价值。方法:选取正常宫颈上皮永生化细胞系End1及宫颈癌细胞系SiHa和C-33A。Transwell试验验证侵袭转移能力。细胞亲和试验检测FITC-TMTP1对细胞株的亲和能力。流式细胞仪检测Dox及TMTP1-Dox的细胞摄入。CCK-8法检测Dox和TMTP1-Dox作用于End1、C-33A和SiHa细胞时的生长抑制率。结果:SiHa细胞的侵袭能力显著强于C-33A和End1细胞,TMTP1对SiHa细胞的亲和力高于C-33A和End1,SiHa细胞对TMTP1-Dox的摄入量显著多于C-33A和End1,差异均有统计学意义(P0.05)。作用12和24h时,TMTP1-Dox/Dox对SiHa细胞的生长抑制率无显著差异(P0.05)。TMTP1-Dox对C-33A和End1细胞的生长抑制作用明显弱于Dox细胞,差异有统计学意义(P0.05)。结论:TMTP1-Dox能选择性地抑制高侵袭能力的宫颈癌细胞的生长增殖,对正常细胞的毒性作用低。提示TMTP1-Dox对于宫颈癌的靶向治疗具有潜在应用价值。