氢酯对人胚肺成纤维细胞中DNA及细胞核的影响

目的 研究氢酯(HQ)对人胚肺成纤维细胞(HLF)DNA及细胞核的损伤作用，探讨其遗传毒性。方法 分别用0、10、20、40和80μmol/L的HQ染毒HLF细胞3h，用慧星试验检测DNA损伤。再用相同剂量组HQ染毒HLF细胞1h，继续培养24h后进行微核试验。结果 慧星试验结果表明，各剂量组细胞DNA拖尾率分别为12％、19％、42％、79％和95％，慧星尾长分别为7.87、9．35、11．03、19．28和23．32μm，有明显的剂量效应关系，其中20、40和80μmol/L剂量组的拖尾率和慧星尾长明显增加；且随着HQ剂量的升高，高度、重度DNA损伤的比例也逐渐增加。HQ也可致微核、核异常形成，各剂量组的微核率分别为2％、3％、10％、9％和15％，核异常率分别为6％、7％、16％、27％和28％，剂量效应关系显著，其中20、40和80μmol/L剂量组的微核率和核异常率显著增加。结论 HQ可致LF细胞DNA和细胞核损伤，产生遗传毒性作用。     

无义突变通读诱导剂研究进展

随着大量新化学物的合成,以及各种工业废物的排放,人类接触环境化学致突变物的机会越来越多。化学致突变物可在人体内诱导各种基因突变,包括无义突变[1]。在人类所有致病基因的突变类型中,30%的突变属于无义突变[2]。无义突变可使mRNA形成提前终止密码子(Premature stop codon,PTC),从而导致mRNA翻译在突变位置提前终止,生成无功能或功能不完全的蛋白质,甚至造成编码蛋白缺失,导致疾病     

长链非编码 RNA 在卵巢癌研究中的进展

卵巢癌是女性生殖系统3大恶性肿瘤之一,发病率低于宫颈癌和子宫内膜癌,但死亡率却高居妇科肿瘤首位,每年在全世界均是主要的肿瘤死因之一。早期卵巢癌通常没有特异性的临床表现,起病隐匿,临床确诊时肿瘤一般已发生转移。据统计,高达70．00％的卵巢癌患者在晚期才被发现。     

双链断裂修复蛋白hKu70缺陷细胞株的建立及其生物学特性

目的 建立并鉴定DNA双链断裂(DSB)修复蛋白hKu70缺陷细胞株,并观察该缺陷细胞的某些生物学效应,用于AKu70基因功能及职业有害因素对DNA双链断裂修复影响的研究。方法 用构建的AKu70基因反义RNA绿色荧光蛋白真核表达载体(pEGFP—CI—K)转染人胚肺成纤维细胞(HLF),用蛋白兔疫印迹法鉴定转染细胞中AKu70基因的表达水平。同时观察转染细胞生长形态,绘制生长曲线,软琼脂培养法鉴定恶性程度。结果 pEGFP—CI—K载体在转染细胞内可较稳定表达,hKu70蛋白缺陷细胞株AKu70基因的蛋白表达水平下降了42％,转染后hKu70蛋白缺陷细胞生长形态、生长速度无明显变化,软琼脂培养未见细胞集落。结论 成功建立和鉴定了hKu70蛋白缺陷细胞株,该缺陷不足以单独引起可观察的某些生物学效应。     

聚合酶链反应-增强化学发光检测结核分枝杆菌

目的探讨微孔板杂交技术结合增强化学发光(ECL)检测结核分枝杆菌(MTB).方法同时应用聚合酶链反应(PCR)-ECL、PCR-比色法与PCR电泳检测60例活动性肺结核和54例健康对照痰标本,比较结果.结果 PCR-ECL、PCR-比色法与PCR电泳总阳性率分别为76.7%、63.3%、50.0%,其中PCR-ECL阳性率显著高于PCR电泳(P<0.05);对涂片阳性标本,阳性率分别为85.7%、85.7%、71.4%,差异无显著性(P>0.05);对涂片阴性标本,阳性率分别为73.9%、56.5%、43.5%,PCR-ECL阳性率高于PCR电泳(P<0.05).另外PCR-ECL、PCR-比色法与PCR电泳特异性分别为92.6%、96.3%、96.3%,差异无显著性(P>0.05).结论 PCR-ECL灵敏度高,能提高临床标本MTB检出率,尤其是对涂片阴性痰标本,并且该方法操作简单,结果客观.     

聚合酶链反应—增强化学发光检测结核分枝杆菌

目的 探讨微孔板杂交技术结合增强化学发光（ECL）检测结核分枝杆菌（MTB）。方法 同时应用聚合酶链反应（PCR）－ECL、PCR－比色法与PCR电泳检测60例活动性肺结核和54例健康对照痰标本，比较结果。结果 PCR－ECL、PCR－比色法与PCR电泳总阳性率分别为76.7%、63.3%、50.0%，其中PCR－ECL阳性率显著高于PCR电泳（P＜0.05)；对涂片阳性标本，阳性率分别为85.7%、85.7%、71.4%，差异无显著性（P＞0.05)；对涂片阴性标本，阳性率分别为73.9%、56.5%、43.5%，PCR－ECL阳性率高于PCR电泳（P＜0.05)。另外PCR－ECL、PCR－比色法与PCR电泳特异性分别为92.6%、96.3%、96.3%，差异无显著性（P＞0.05)。结论 PCR－ECL灵敏度高，能提高临床标本MTB检出率，尤其是对涂片阴性痰标本，并且该方法操作简单，结果客观。     

正己烷接触工人的早期生物标志物含量变化

目的探讨正己烷接触工人的早期生物标志物。方法分别检测正己烷接触工人63名及对照组50名工人的尿2，5-己二酮、血清神经元特异烯醇化酶（NsE）及髓鞘碱性蛋白（nap）水平。结果接触组工人尿2，5-己二酮含量为0．31-10．38mg／gCr，对照组未检出；接触组血清NSE和MBP含量分别为（9．02±3．87）ug／L和（1．47±0．41．）ug／L，均显著高于对照组（P〈0．05）。结论正己烷接触可导致血清NSE及MBP水平的升高，尿2，5-己二酮、血清NSE和MBP水平可作为正己烷接触的早期生物标志物。     

线粒体细胞色素C氧化酶RNAi慢病毒载体的构建

目的：通过构建携带细胞色素C氧化酶基因的RNAi慢病毒载体，获得可供转染的滴度，为下一步研究该基因缺陷在真核细胞中的影响提供物质基础。 方法： 根据线粒体细胞色素C氧化酶设计的两条互补的单链寡核苷酸退火后形成双链，插入到pENTR/U6质粒缺口末端，连接在质粒上生成含RNAi盒的pENTR/U6载体；通过重组作用将pENTR/U6载体的RNAi盒重组到pLenti6/BLOCK-iT-Dest 载体上,构建含U6启动子、靶序列和Pol Ⅲ终止子表达框的MTCOX-I shRNA表达重组体；经脂质体导入293FT细胞，包装成慢病毒，收集病毒上清并检测其滴度。Western blotting检测干扰后细胞内线粒体细胞色素C氧化酶I亚基的表达。 结果： 将目的序列成功连接到载体上，并经测序分析证实载体构建成功；成功包装成高滴度的慢病毒。Western blotting检测结果证实构建的MTCOX-I shRNA表达重组体可显著抑制线粒体细胞色素C氧化酶I亚基的表达。 结论： 成功构建了携带细胞色素C氧化酶基因的RNAi慢病毒载体。     

外泌体lncRNA H19在miR-7/KLF4/VEGF调控人肺腺癌细胞迁移和侵袭中的作用研究

目的 探讨外泌体长链非编码RNA H19（lncRNA H19）调控人肺腺癌细胞迁移和侵袭作用及机制。方法 收集确诊肺腺癌并经影像学诊断已发生远处转移患者（转移组）或无远处转移患者（非转移组）以及正常人群（正常对照组）各30例外周血标本,分离单核细胞获得血浆上清液分离外泌体,同时取培养人肺腺癌细胞系A549细胞时收集的培养上清液分离外泌体,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测并比较组间外泌体lncRNA H19 mRNA表达差异。并采用慢病毒介导的lncRNA H19特异性小干扰RNA（shRNA）构建稳定敲低lncRNA H19的人肺腺癌A549细胞模型,荧光素酶验证lncRNA H19通过吸附结合微RNA-7（miR-7）,划痕实验、Transwell实验检测稳定敲低lncRNA H19对A549细胞迁移、侵袭能力的影响,蛋白免疫印迹法检测稳定敲低lncRNA H19对miR-7及其下游的信号通路蛋白Kruppel样因子4（KLF4）和血管内皮生长因子（VEGF）蛋白表达水平的影响。结果 外泌体被成功分离。与非转移组肺腺癌患者相比,转移组肺腺癌患者外周血外泌体lncRNA H19 mRNA表达增加（P < 0.01）。A549细胞中,与对照细胞相比,稳定敲低lncRNA H19细胞的外泌体lncRNA H19 mRNA表达减少（P <0.01）。 细胞划痕实验和Transwell实验显示,敲低lncRNA H19的A549细胞迁移和侵袭的能力下降。野生型 lncRNA H19 与 miRNA-7共转染后A549细胞荧光度值下降（P < 0.01）,突变型lncRNA H19与miRNA共转染后A549细胞荧光度值未见明显变化（P > 0.05）。A549细胞中,稳定敲低lncRNA H19后KLF4和VEGF蛋白表达水平均有所下调（P均< 0.05）。结论 外泌体lncRNA H19可能在肺腺癌细胞迁移和侵袭过程中发挥作用,且这种作用可能与竞争性结合miR-7及KLF4/VEGF信号通路有关。     

武汉市人感染H7N9禽流感流行病特征及外环境H7亚型禽流感病毒监测分析

目的分析2017年武汉市人感染H7N9禽流感流行病学特征,结合外环境中H7亚型禽流感病毒分布,为防控决策提供实证依据。方法对11例人感染H7N9禽流感患者禽类接触史调查并进行溯源分析;采集的外环境标本用实时荧光定量PCR进行标本检测。结果 11例病例均有活禽市场暴露史或活禽接触史;病例集中在1、2月份,占全部病例的90.91%(10/11);50岁以上中老年人感染发病占63.64%(7/11);病例均有多个医疗机构转诊救治史,发病-就诊间隔时间平均为4d,发病-死亡间隔时间平均为9d,死亡病例占54.55%(6/11);共采集外环境标本1 794份,检出H7亚型禽流感核酸阳性107份(阳性率6.00%)。结论冬春季是人感染H7N9的高发季节,活禽市场暴露或接触活禽是感染高危因素,早发现、早检测、早诊治能降低死亡风险;对活禽市场关闭或休市,落实活禽市场外环境清洁消毒、开展外环境H7亚型禽流感病毒核酸检测、开展健康教育宣传等综合措施是预防控制人感染H7N9禽流感的有效措施。