广泛耐药铜绿假单胞菌耐药基因和oprD2基因检测及同源性分析

目的探讨本院短期内分离的广泛耐药铜绿假单胞菌药物耐药基因和外膜蛋白基因opr D2携带情况,并分析其分子流行病学特征。方法收集本院2012年10月分离的对临床常用7类抗菌药物耐药或中介的非重复铜绿假单胞菌,采用K-B法检测药物敏感性,选出广泛耐药株和泛耐药株。采用PCR法检测β-内酰胺酶基因(OXA、CTX-M、TEM、PER、GES、DHA、IMP、VIM、NDM、SPM、CARB和KPC)、16S rRNA甲基化酶基因(arm A、rmt A、rmt B)、氨基糖苷类修饰酶基因(aac(6')-Ⅱ、aac(3)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ)及opr D2基因,PCR扩增阳性产物进行DNA测序,用Blast进行序列比对分析。应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对泛耐药铜绿假单胞菌进行同源性分析。结果共筛选出23株广泛耐药铜绿假单胞菌,其中泛耐药菌10株。23株广泛耐药铜绿假单胞菌中,耐药基因检测阳性的有OXA-1群、OXA-10群、TEM、PER、CARB、VIM、arm A、rmt B、aac(6')-Ⅱ、aac(3)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ,阳性率分别为21.7%、39.1%、47.8%、87.0%、26.1%、4.3%、8.7%、47.8%、60.9%、52.2%、47.8%。opr D2基因阳性8株,阴性15株,基因缺失率达65.2%(15/23)。阳性基因与Gen Bank中已知序列同源性均大于99%。10株泛耐药菌的PFGE图谱分为4个型,其中主流型A型有6株,B型2株,C型、D型各1株,且A型、B型均来自烧伤外科。结论我院2012年10月分离的广泛耐药铜绿假单胞菌携带多种耐药基因和外膜蛋白opr D2基因缺失是其耐药的主要原因之一,且存在多种耐药基因组合模式。同时我院发生了小规模的泛耐药铜绿假单胞菌克隆株的传播。     

人猪链球菌感染致脑膜炎1例

本文报道一例猪链球菌感染所致脑膜炎病例。患者为屠宰工,主要症状为头痛、意识障碍,发热。因脑脊液中分离出猪链球菌而确诊。患者采用药敏试验敏感的万古霉素和青霉素治疗后痊愈出院。     

革兰阴性杆菌TEM型β-内酰胺酶耐药基因研究

目的 了解中南大学3所附属医院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)革兰阴性杆菌TEM型耐药基因的检出及流行情况.方法 收集254株多重耐药革兰阴性杆菌,采用双纸片协同法(DDS)进行ESBLs表型确证,多重PCR.法扩增blaTEM、blaSHV、blaOXA-1基因,TEM特异性引物对其整个开放阅读框进行扩增并对PCIL产物测序,通过BLAST分析确定基因型;并对携带有TEM基因的革兰阴性菌株用随机扩增多态DNA(RAPD)方法进行菌株的同源性分析.结果 经多重PCR扩增,105株肠杆菌获得阳性结果,其中85株菌携带TEM基因,26株菌携带SHV基因,10株菌携带OXA-1基因;6株非发酵菌获得阳性结果,均携带TEM基因,且全部为TEM-1型广谱β-内酰胺酶.携带blaTEM耐药基因的菌株所含RAPD类型:大肠埃希菌12种,肺炎克雷伯菌6种,阴沟肠杆菌7种.结论 TEM-1型β-内酰胺酶是湖南地区主要流行的TEM型酶;大肠埃希菌产TEM酶情况尤为突出;在同一医院以及同一病区存在TEM-1型β-内酰胺酶的克隆传播.     

鲍曼不动杆菌的同源性及碳青霉烯酶基因分析

目的:研究临床分离鲍曼不动杆菌的耐药性演变、同源性、产碳青霉烯酶类型及碳青霉烯酶基因型.方法:收集临床分离的72株鲍曼不动杆菌,采用VITEK-Ⅱ药敏分析系统对72株鲍曼不动杆菌进行18种抗菌药物的敏感性检测.采用肠杆菌科基因间一致重复序列聚合酶链技术(ERIC-PCR)进行基因分型和同源性比对.用改良Hodge试验检测杆菌的产碳青霉烯酶表型,对碳青霉烯酶基因blaOXA-23,blaOXA-40和blaOXA-58进行PCR扩增及序列分析.结果:72株鲍曼不动杆菌对头孢哌酮/舒巴坦的耐药率最低,为8.33％,其次是阿米卡星,对其余抗菌药物的耐药率均高达70％以上.ERIC-PCR技术将其分为7个基因型,同源性分析显示其中4个基因型在医院内流行.产碳青霉烯酶的菌株有56株,blaOXA-23扩增阳性的有61株,blaOXA-58扩增阳性的有1株.结论:鲍曼不动杆菌耐药严重,且存在院内感染传播的现象;产碳青霉烯酶的菌株较多,主要的碳青霉烯酶基因型为blaOXA-23;湖南省存在blaOXA-58阳性鲍曼不动杆菌株.     

湖南地区SHV型超广谱β-内酰胺酶的研究

目的 了解湖南地区产SHV型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肠杆菌科细菌的检出情况,确定其基因型,并对其流行病学特征进行研究.方法 收集、鉴定分离菌株,进行ESBLs检测;PCR扩增blaSHV基因;对PCR产物测序确定其基因型;并通过随机扩增多态性DNA(RAPD)进行菌株同源性分析.结果 171株多药耐药的肠杆菌科中共有26株菌携带blaSHV基因,PCR产物经测序共检出5种基因型:9株携带SHV-28、7株携带SHV12、7株携带SHV-1、2株携带SHV-11和1株携带SHV-5;RAPD结果显示,19株肺炎克雷伯菌有6种RAPD类型,5株阴沟肠杆菌分别为不同的RAPD类型.结论 SHV-12是湖南地区主要流行的SHV型ESBLs,并且在产SHV型β-内酰胺酶的肺炎克雷伯菌中存在菌株间的克隆传播,未发现产SHV型ESBLs的大肠埃希菌.     

变性高效液相色谱对CTX-M型超广谱β内酰胺酶基因分型研究

Objective To investigate the genotype distribution of CTX-M-type extended-spectrum β-1actamase(ESBLs) by denaturing high-performance liquid chromatography(DHPLC) in Hunan Province and the accuracy of DHPLC assay. Methods The blaCTX-M genes of standard strains and clinical ESBLs-producing Enterobacteriaceae were amplified by multiplex PCR followed by DHPLC and genotype determination. 25 isolates randomly selected were sequenced to assess the accuracy of DHPLC method. Results Among 142 ESBLs-producing isolates, 109 isolates carried blaCTX-M gene (76. 8% ). Four different CTX-M genotypes were detected by DHPLC, including CTX-M-3 (33 isolates), CTX-M-15 (19 isolates), CTX-M-14 (52 isolates) and CTX-M-9 (5 isolates). The DHPLC typing of 25 isolates suggested that 24 isolates were verified uniformly by the sequencing, but one CTX-M-15 isolate typed by DHPLC was shown to be CTX-M-82 by sequencing. Conclusion DHPLC is a powerful tool for genotyping of the resistance gene and is worth being applied in the clinical and scientific research with accurate, rapid and economic advantages.     

变性高效液相色谱对CTX-M型超广谱β内酰胺酶基因分型研究

Objective To investigate the genotype distribution of CTX-M-type extended-spectrum β-1actamase(ESBLs) by denaturing high-performance liquid chromatography(DHPLC) in Hunan Province and the accuracy of DHPLC assay. Methods The blaCTX-M genes of standard strains and clinical ESBLs-producing Enterobacteriaceae were amplified by multiplex PCR followed by DHPLC and genotype determination. 25 isolates randomly selected were sequenced to assess the accuracy of DHPLC method. Results Among 142 ESBLs-producing isolates, 109 isolates carried blaCTX-M gene (76. 8% ). Four different CTX-M genotypes were detected by DHPLC, including CTX-M-3 (33 isolates), CTX-M-15 (19 isolates), CTX-M-14 (52 isolates) and CTX-M-9 (5 isolates). The DHPLC typing of 25 isolates suggested that 24 isolates were verified uniformly by the sequencing, but one CTX-M-15 isolate typed by DHPLC was shown to be CTX-M-82 by sequencing. Conclusion DHPLC is a powerful tool for genotyping of the resistance gene and is worth being applied in the clinical and scientific research with accurate, rapid and economic advantages.     

肺炎支原体快速培养法在小儿支原体肺炎诊断中的应用

目的:评价肺炎支原体快速培养法在小儿肺炎支原体(MP)肺炎诊断中的应用价值。方法:采用咽拭子MP快速培养法和ELISA半定量检测血清MP-IgM抗体同时检测248例呼吸道感染小儿患者,对检查结果进行统计学分析。结果:248例患儿中,快速培养法检出21例阳性,阳性率22.98%;ELISA法检出MP-IgM阳性25例,阳性率27.42%,两种方法检测阳性检出数差异有统计学意义(P=0.000);两种方法一致性较好(kappa=0.819>0.75,T=12.982,P=0.000);以临床诊断结果评价两种实验室检测方法绘制ROC曲线,AUC快速培养=0.880,AUC血清MP-IgM=0.820。结论:MP快速培养快速简便,较血清MP-IgM检测更适用于早期和免疫系统尚未发育完善及免疫缺陷患者的诊断,与血清MP-IgM检测联合应用可提高MP的诊断效率。     

新生儿病房病原菌分布及耐药性分析

目的了解本院新生儿病房病原菌的分布及耐药性,为临床用药提供依据。方法回顾性调查分析2010年6月至2011年12月新生儿病房送检标本中分离的245株病原菌,用Vitek-2全自动微生物鉴定系统进行鉴定及药敏试验。结果 245株病原菌中,革兰阳性球菌84株(占34.3%),革兰阴性杆菌158株(占64.5%),以咽拭子检出率最高(40.0%)。主要病原菌为肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌。革兰阴性杆菌和葡萄球菌属对常用抗菌药物耐药严重,且呈多药耐药。革兰阴性杆菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的检出率为70.9%;未检出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)检出率为58.5%,无耐万古霉素葡萄球菌检出。结论新生儿病房病原菌以革兰阴性杆菌为主,对常用抗菌药物耐药严重,应动态监测病原菌流行株及其耐药情况,合理使用抗菌药物。     

血流感染O16-ST131和O25b-ST131型大肠埃希菌的流行、系统发育群及耐药性

目的探讨大肠埃希菌ST131型菌株的流行,及其与非ST131耐药性是否存在差异,ST131感染者与非ST131感染者临床 特征是否存在差异。方法通过收集中南大学湘雅医院2016年1月~12月血流感染患者大肠埃希菌非重复菌株144株,采用多 重PCR方法进行系统发育分群,采用等位基因特异性PCR进行ST131菌株筛选及O血清型分型,收集144例患者的临床信息, 比较ST131感染者与非ST131感染者的临床特征有无差异,采用Vitek2 compact药敏分析仪检测细菌的耐药性。结果系统发 育分群结果显示,144株大肠埃希菌菌株以B2群为主,占41.0%（59/144）,其次分别为F群、B1群和E群,分别占16.7%（24/144）、 13.9%（20/144）和13.2%（19/144）;其中9株（6.3%）属于ST131型,包括8株O25b-B2-ST131和1株O16-B2-ST131;9例ST131患 者中,医院感染患者有7例,占77.8%。ST131感染者的人口特征和临床特征与非ST131感染者相似。ST131型菌株对哌拉西 林/他唑巴坦、亚胺培南、厄他培南、阿米卡星耐药率较低,但对头孢唑林、头孢曲松、环丙沙星、左氧氟沙星、庆大霉素以及复方新 诺明耐药率>50%,ESBLs阳性率达77.8%,多重耐药率高达88.9%,并高于非ST131型菌株,但差异并无统计学意义。结论本 地区血液分离大肠埃希菌中,B2 群和F群为最常见系统分群,ST131 型菌株检出率较低,国内首次在血流感染中分离出O16- ST131菌株,ST131感染者的临床特征与非ST131感染者相似,ST131型菌株多重耐药率及ESBLs阳性率高,应引起重视。