接受TACE治疗的肝细胞癌患者血清miR-335水平变化及其对预后判断的价值分析

目的探讨肝细胞癌(HCC)患者血清miR-335水平变化及其在经肝动脉栓塞化疗术(TACE)治疗后,对判断预后的价值。方法 2014年5月～2016年5月收治的HCC患者60例,慢性乙型肝炎患者50例,乙型肝炎肝硬化患者50例和选择的健康人50例,采用实时荧光定量反转录PCR法检测血清miR-335水平。给予HCC患者TACE治疗,并随访2年。计算受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC),分析应用血清miR-335水平预测HCC患者预后的价值。结果 HCC患者血清miR-335水平为(1.18±1.35),显著低于乙型肝炎(1.91±2.11)和肝硬化患者(2.01±0.75),也显著低于正常人【(2.07±1.25),P=0.001】,肝硬化和慢性乙型肝炎患者血清miR-335水平与正常人比,差异均无统计学意义(P0.05);22例存在门静脉癌栓的HCC患者血清miR-335水平显著低于38例无癌栓患者(t=4.586,P0.001),13例死亡患者血清miR-335水平显著低于47例生存患者(t=3.324,P0.001),而不同性别、年龄、肿瘤大小、TNM分期、有无淋巴结转移和血清AFP水平高低患者,血清miR-335水平差异无统计学意义(P均0.05);随访2年,本组HCC患者死亡13例(21.7%)。以血清miR-335水平小于或等于0.820为截断点,判断患者2年内死亡的敏感性为83.0%,特异度为100.0%。结论 HCC患者血清miR-335水平显著降低,其水平越低,预后越差,该结论需要进一步研究。     

接受TACE治疗的肝细胞癌患者血清miR-335水平变化及其对预后判断的价值分析*

目的 探讨肝细胞癌（HCC）患者血清miR-335水平变化及其在经肝动脉栓塞化疗术（TACE）治疗后,对判断预后的价值。方法 2014年5月~2016年5月收治的HCC患者60例,慢性乙型肝炎患者50例,乙型肝炎肝硬化患者50例和选择的健康人50例,采用实时荧光定量反转录PCR法检测血清miR-335水平。给予HCC患者TACE治疗,并随访2年。计算受试者工作特征（ROC）曲线下面积（AUC）,分析应用血清miR-335水平预测HCC患者预后的价值。结果 HCC患者血清miR-335水平为（1.18±1.35）,显著低于乙型肝炎（1.91±2.11）和肝硬化患者（2.01±0.75）,也显著低于正常人【（2.07±1.25）,P=0.001】,肝硬化和慢性乙型肝炎患者血清miR-335水平与正常人比,差异均无统计学意义（P>0.05）;22例存在门静脉癌栓的HCC患者血清miR-335水平显著低于38例无癌栓患者（t=4.586,P<0.001）,13例死亡患者血清miR-335水平显著低于47例生存患者（t=3.324,P<0.001）,而不同性别、年龄、肿瘤大小、TNM分期、有无淋巴结转移和血清AFP水平高低患者,血清miR-335水平差异无统计学意义（P均>0.05）;随访2年,本组HCC患者死亡13例（21.7%）。以血清miR-335水平小于或等于0.820为截断点,判断患者2年内死亡的敏感性为83.0%,特异度为100.0%。结论 HCC患者血清miR-335水平显著降低,其水平越低,预后越差,该结论需要进一步研究。     

Fkbp38基因缺失导致小鼠早发性卵巢功能不全：基于激活mTOR通路并诱导细胞凋亡

目的 探讨他克莫司结合蛋白38（Fkbp38）在卵泡发育中的作用及其缺失导致早发性卵巢功能不全（POI）的机制。方法 采用Cre-loxp系统构建卵母细胞特异性敲除Fkbp38转基因小鼠,并应用PCR鉴定小鼠基因型,然后在蛋白水平上验证Fkbp38在卵母细胞中的敲除效果。通过HE染色在显微镜下计数敲除小鼠与同窝对照小鼠卵巢原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡及窦卵泡数量分析卵母细胞缺失Fkbp38基因对小鼠卵泡发育的影响。通过繁殖实验及ELISA实验检测小鼠繁殖能力及血清性激素水平,明确卵母细胞敲除Fkbp38基因对卵巢功能的影响。TUNEL法检测敲除小鼠与同窝对照小鼠卵巢颗粒细胞凋亡情况。检测雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路下游靶蛋白磷酸化核糖体S6（PS6）活性验证Fkbp38基因对mTOR信号通路的影响。IF检测凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）及Bcl2-Associated X（BAX）表达明确Fkbp38基因敲除对卵母细胞发育的影响。结果 卵母细胞特异性敲除Fkbp38转基因小鼠模型构建成功。敲除小鼠较对照小鼠表现出生育力下降,性激素水平紊乱,卵巢内原始卵泡、初级卵泡和次级卵泡数均显著减少（P<0.05）,引起POI样改变。卵母细胞特异性敲除Fkbp38基因后,mTOR信号通路激活,颗粒细胞凋亡增加,卵母细胞内BAX蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达减弱,BAX/Bcl-2蛋白比值显著升高（P<0.05）。结论 Fkbp38在卵泡发育中发挥重要作用,其缺失致POI发生的机制可能是通过激活mTOR信号通路诱导细胞凋亡而引起的。     

miR-483-5p通过靶向FKBP4加重顺铂诱导的小鼠卵巢损伤

目的 探讨FKBP4蛋白在顺铂诱导的早发性卵巢功能不全（POI）中的作用及其机制研究。方法 采用ITRAQ技术测定4对顺铂诱导的小鼠POI模型组及生理盐水对照组卵巢组织的差异蛋白。使用TargetScan软件进行靶点预测,利用qRT-PCR和Western blot方法确定顺铂诱导组及生理盐水对照组miR-483-5p及FKBP4的表达水平。收集POI患者及正常患者血清各 6 例,并利用 qRT-PCR 检测 miR-483-5p 表达水平。利用细胞转染及双荧光素酶实验验证 miR-483-5p 和 FKBP4 的关系。利用转染和/或顺铂分别处理原代颗粒细胞及KGN细胞系（人颗粒细胞系）,将细胞分为对照（NC）组、miR-483-5p组、miR-483-5p+顺铂处理组和miR-483-5p+FKBP4+顺铂处理组。以此验证miR-483-5p、FKBP4在顺铂处理的颗粒细胞中的作用;利用 Cre-loxp 系统构建卵母细胞特异性过表达 miR-483-5p 及同窝未过表达的转基因小鼠,用免疫荧光、原位杂交及ELISA检测卵巢功能。结果 与生理盐水组相比,顺铂诱导的POI小鼠的卵巢中FKBP4表达下降（P<0.05）。靶点预测软件发现miR-483-5p的潜在靶点是FKBP4,并且较生理盐水对照组,它在顺铂诱导的POI小鼠的卵巢、血清以及POI患者的血清中均高水平表达（P<0.01）。体外实验进一步证实FKBP4是miR-483-5p的作用靶点。人颗粒细胞系及小鼠原代颗粒细胞过表达FKBP4缓解了顺铂联合miR-483-5p过表达引起的细胞凋亡（n=5,P<0.05）。与同窝未过表达的小鼠比较,卵母细胞过表达miR-483-5p的小鼠顺铂诱导造成的卵巢损伤更严重。结论 miR-483-5p/FKBP4在顺铂诱导的POI中发挥作用。顺铂诱导的卵巢损伤过程可能与上调的miR-483-5p靶向作用FKBP4,导致的FKBP4表达下降有关。miR-483-5p上调可能增加卵巢对顺铂药物的敏感性,使卵巢功能降低。检测血清miR-483-5p可以用来预测POI的发生和发展。     

母胎界面免疫微环境异常致复发性流产研究进展

母体对胚胎识别及免疫耐受的建立是妊娠的必要条件。母胎界面免疫耐受的本质是胚胎滋养层细胞、蜕膜基质细胞和蜕膜免疫细胞共同参与母-胎对话的过程,促进母胎界面免疫微环境的转化及适应性免疫的建立,如滋养层细胞浸润、螺旋动脉重塑和胚胎免疫耐受建立等。母胎界面免疫微环境异常会造成母胎免疫耐受稳态失衡,可能是导致复发性流产（recurrent spontaneous abortion,RSA）的重要原因。母胎界面免疫微环境异常包括母胎界面免疫攻击信号过强、免疫抑制信号不足和免疫微环境紊乱。因此,免疫调节是治疗RSA的核心策略之一,包括免疫抑制剂、免疫调节剂的应用及淋巴细胞主动免疫治疗等,但其疗效需要高级别循证医学证据的验证。     

早发性卵巢功能不全患者辅助生殖药物预处理新进展

早发性卵巢功能不全(POI)是一种严重影响生育期女性身心健康的异质性疾病,发病机制不明.对于POI患者,目前尚缺乏有效手段来预防和(或)恢复其正常卵巢储备功能.对有生育需求的POI患者,适时或及时接受辅助生殖治疗可提高其妊娠率和活产率.行辅助生殖治疗前,对POI患者进行个体化生育力评估,采用多种预处理方案,能有效改善卵...