胶体金免疫层析法检测葡萄球菌B型肠毒素

目的通过优化制备中各关键步骤的实验条件,建立快速检测葡萄球菌B型肠毒素的胶体金免疫层析法。方法采用柠檬酸三钠还原氯金酸法制备直径16nm的胶体金溶液,葡萄球菌B型肠毒素多克隆抗体制备免疫胶体金复合物,组装胶体金免疫层析快速检测试纸条。结果用柠檬酸三钠还原法制备的16nm胶体金溶液呈亮红色,其颗粒大小比较均一。胶体金标记抗体蛋白的最低稳定量为15μg／mL,最适稳定量为18μg／mL,标记的最适pH为7．8。此方法检测限为0．2μg/mL,准确度为94．9％。结论制备了葡萄球菌B型肠毒素胶体金免疫试纸条,该方法简便、快速,而且灵敏度高、稳定性强,适用于食品中葡萄球菌B型肠毒素的快速检测。     

雌二醇完全抗原及多克隆抗体的制备

目的 改造雌二醇半抗原,合成雌二醇完全抗原,并经免疫家免得到抗雌二醇多克隆抗体,为建立雌二醇的酶联免疫吸附方法及其在动物性食品安全快速检测中的应用奠定基础.方法 改造雌二醇-3-羧甲基醚(E2-3-CME),碳二亚胺(EDC)法合成免疫原(E2-BSA)和包被原(E2-OVA),采用SDS-PAGE电泳和质谱(MS)对其鉴定,免疫家兔2只,制备多克隆抗体;间接ELISA测定效价、灵敏度和特异性.结果 成功合成雌二醇免疫原和包被原,6次免疫后E2-T1和E2-T2抗血清的效价分别达到1∶128000和1∶32000,E2-T1抗体和E2-T2抗体的半数抑制浓度(IC50)分别为44.00 ng/ml和45.59 ng/ml,与雌二醇类似物没有明显交叉反应.结论 合成的雌二醇完全抗原具有较好的免疫原性,产生的抗雌二醇多克隆抗体具有较好的特异性.     

己烯雌酚阳离子牛血清白蛋白免疫原的合成及鉴定

目的 合成阳离子牛血清白蛋白(cBSA),制备多克隆抗体,为动物性食品安全快速检测提供技术支持.方法 合成免疫原(DES-HS-BSA和DES-HS-cBSA),采用SDS-PAGE电泳和质谱法对其鉴定,Bradford试剂盒对其定量,经动物免疫制备多克隆抗体,ELISA测定抗体效价和抗体灵敏度.结果 成功合成己烯雌酚...     

一种适用于全天候水质智能监测装备的无人机作业平台的设计与实现

正常规的全天候水质监测系统在我国的生态环境监测领域已得到了大范围的应用,但是其长期运行维护频率及成本较高,尤其是传感器监测点位固定,限制了其在突发水污染事件的应急监测能力。基于无人机平台的监测技术机动性灵活性均远优于其他监测模式,特别是在突发应急条件下,其具备远程、高效、安全等突出特点,在部队应急救援、战场侦察、卫勤保障中发     

消减免疫法制备氨苄青霉素抗体

目的应用消减免疫法制备氨苄青霉素(Amp)多克隆抗体,为动物性食品安全快速检测及进出口贸易提供技术支持。方法以生物偶联法制备Amp-OVA与Amp-BSA,以紫外分光光度法与SDS-PAGE鉴定完全抗原,以环磷酰胺药物消减免疫,以ELISA检测免疫耐受情况;直接ELISA法检测抗体效价,竞争ELISA检测抗体特异性与灵敏度并评价消减免疫效果。结果成功合成了Amp-OVA完全抗原,消减免疫使小鼠获得了对OVA的耐受,再经多次Amp-OVA免疫后,与未消减组小鼠(血清中针对OVA的效价1:10 000)相比,消减组小鼠血清针对OVA的抗体效价(1:1 000)明显降低。结论相对于常规免疫法,采用消减免疫法更易获得针对Amp的多克隆抗体。     

基于计算生物学方法的小容量单域抗体库的构建及食品中雌二醇特异性抗体的筛选

目的构建骆驼源单域抗体实体库和虚拟库,为快速筛选检测食品中小分子污染物的特异性抗体提供新方法。方法通过基因克隆、一代测序、同源性分析的方法构建骆驼源单域抗体基因库,通过二级结构分析和同源建模的方法建立单域抗体的三维结构虚拟库,利用分子对接技术实现雌二醇特异性抗体的虚拟筛选,并以雌二醇小分子为靶标进行初步验证。结果构建的小容量单域抗体库含有2000株抗体,每一株抗体的遗传背景、蛋白质结构及抗体抗原互补决定区(CDR)的信息清晰;通过分子对接得到结合雌二醇小分子能力最高的一株抗体的半经验结合自由能绝对值为9.56;相互作用分析结果显示,单域抗体结构中和雌二醇小分子发生相互作用的主要为3个CDR区形成的loop结构,经间接ELISA验证,其和雌二醇结合的50%抑制率(IC50)值为20 ng/ml,检测限(LOD,IC10)为4.097 ng/ml。结论通过计算生物学和基因工程技术相结合的方法构建的骆驼源单域抗体库,针对食品中常见的激素类兽药雌二醇,可以筛选得到背景清晰、具有较高亲和力的特异性抗体。