上海市闵行区建立高危儿全身运动评估网络效果评价

目的 对闵行区建立的社区卫生服务中心、闵行区妇幼保健院、复旦大学附属儿科医院三位一体高危儿全身运动(general movements ,GMs)评估网络的效果进行评价。方法 利用闵行区区域卫生信息平台开发应用模块,统一收集GMs评估数据。结果 5年间GMs评估技术为闵行区11 710名高危儿童进行了GMs评估,评估覆盖率从19.39%上升到了80.58%。扭动运动阶段和不安运动阶段的异常结果平均发现率相接近(0.37%、0.57%),两者差异无统计学意义,而可疑结果平均发现率(25.49%、2.4%)差异有统计学意义。5年间不安运动阶段的康复干预率从13.04%上升到53.26%,扭动运动阶段的康复干预率低于不安运动阶段。结论 通过社区卫生服务中心、闵行区妇幼保健院、复旦大学附属儿科医院三位一体建立的高危儿GMs评估工作网络促进了社区婴幼儿神经运动行为发育早期筛检、干预工作。     

NDRG1干扰载体的构建及稳定过表达NDRG1人脑微血管内皮细胞的建立

目的 构建N-myc下游调节基因1（NDRG1）的shRNA干扰载体和过表达载体,转染人脑微血管内皮细胞（hCMECs）后验证干扰和过表达效果并获得稳定过表达NDRG1的细胞。 方法 将pGPU6-GFP质粒采用BamH Ⅰ和Bbs Ⅰ双酶切后,分别与设计的8条shRNA连接构建pGPU6-GFP-NDRG1 shRNA干扰载体,经测序鉴定后采用Lipofectamine 2000转染hCMECs,采用荧光显微镜观察载体转染效率,将PCR扩增的NDRG1编码区序列与pMD19-T连接,经测序正确后将重组质粒与pcDNA3.1空质粒采用限制性内切酶BamH Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切,连接后构建pcDNA3.1-NDRG1过表达载体,采用Lipofectamine 2000将测序正确的过表达载体转染hCMECs,采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测干扰和过表达的hCMECs中NDRG1 mRNA表达水平,Western blotting法检测hCMECs中NDRG1蛋白表达水平,采用新霉素筛选出阳性克隆hCMECs。 结果 pGPU6-GFP载体经双酶切后,电泳结果显示完全线性化,测序结果显示shRNA均成功连接至pGPU6-GFP载体;荧光显微镜观察载体转染效率约为70%;RT-qPCR法检测,有3个shRNA干扰载体的干扰效果良好,转染后hCMECs中NDRG1 mRNA表达水平分别约为对照组的26%、21%和13%;Western blotting法检测到对应的特异性蛋白条带,重组质粒pcDNA3.1-NDRG1经双酶切后,电泳结果可见大小为1 185和5 428 bp的2条DNA条带,测序结果显示NDRG1基因成功插入,成功制备阳性克隆hCMECs。RT-qPCR法检测,阳性克隆hCMEC中NDRG1 mRNA表达水平较对照组升高,约为对照组的25.96倍;Western blotting法检测,hCMEC中NDRG1蛋白表达水平较对照组升高。 结论 成功构建pGPU6-GFP-NDRG1 shRNA干扰载体并验证干扰效果;成功构建pcDNA3.1-NDRG1过表达载体和稳定过表达NDRG1的hCMECs。