EMS患者血清IFN-γ、IL-4测定的临床意义

近年来研究表明，子宫内膜异位症（endometriosis，EMS）发病与免疫功能紊乱有关。本文采用酶联免疫吸附试验双抗体夹心法（ELISA）测定EMS患者的血浆IFN－γ、IL－4的含量，探讨Th1／Th2型细胞因子与EMS发病的关系及其临床意义。     

小鼠Foxp3蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

目的:体外原核表达小鼠Foxp3蛋白,并以其免疫家兔,制备多克隆抗体。方法:从质粒Foxp3-pMD-18T扩增小鼠Foxp3全长基因,亚克隆至原核表达载体pET-32 a,转化E.coliBL-21;IPTG诱导表达目的蛋白,N i2 -NTA柱纯化及蛋白质印迹鉴定蛋白;纯化蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体,ELISA法检测抗体效价,蛋白质印迹检测抗体特异性。结果:成功构建了Foxp3-pET-32 a原核表达载体,表达和纯化了目的蛋白;ELISA法检测抗体效价为1∶20 000,蛋白质印迹检测结果显示抗体特异性与小鼠Foxp3蛋白结合。结论:成功表达小鼠Foxp3蛋白并制备了多克隆抗体。     

真核表达质粒pDisplay-hGITRaa1-165构建及其在COS-7细胞中的表达

目的:构建含有人GITR胞外段的真核表达质粒pDisplay-hGITRaa1-165,并检测其在真核细胞内的表达。方法:将带有信号肽的GITR基因片段克隆至真核表达载体pDisplay,经酶切鉴定及测序分析,脂质体介导法转染COS-7细胞,通过蛋白质印迹法检测其在COS-7细胞内的表达水平。结果:所构建的真核表达质粒pDisplay-hGI-TRaa1-165转染COS-7细胞后,在其培养上清中检测到目的蛋白的表达。结论:成功表达pDisplay-hGITRaa1-165蛋白,为GITR的生物学功能研究奠定了基础。     

早产儿万古霉素治疗 34例药物监测与用药分析

目的评估万古霉素早产儿治疗药物监测(Therapeutic Drug Monitoring,TDM)及用药情况,分析万古霉素在早产儿重症感染治疗过程中进行 TDM的必要性。方法采用回顾性分析方法,制定相应标准,按标准收集 2016—2018年南京医科大学附属无锡妇幼保健院早产儿 34例,统计分析其基本情况、血培养、痰培养等相关病原学检查、药敏试验结果、血药浓度结果、化验室指标、药物疗效及药品不良反应(Adverse Drug Reaction,ADR)等结果。结果统计分析的 34例病儿中,诊断以新生儿脓毒血症为主(48.94%)病原学送检率 100%,阳性检出率 76.47%,22例(占 83.33%)为革兰阳性菌感染,药敏试验结果均显示对万古霉素敏感;监测范围10～20 μg/mL的初次血药谷浓度病儿极少(仅占 26.47%),而通过临床药师合理干预可大大提高谷浓度的达标率(占 在,76.92%)差异有统计学意义(P＜0.05)。经万古霉素治疗后有效率达 85.29%,复查病儿的各项指标较前有明显好转［降钙素原(PCT)为.86±0.28)比(0.31±0.43)ng/mL,尿素(Urea)(5.39±3.91)比(2.24±1.35)mmol/L,血肌酐(Cr)为(64.24±20.44)比(34.43± (0,9.82)μmol/L,胱抑素C(CysC)为(1.85±0.55)比(1.29±08)mg/L、天冬氨酸氨基转移酶(AST)为(43.72±25.03)比(25.03±11.01)IU/ L,均P＜0.05］;未检测到万古霉素引起的耳肾损害等 ADR。结论万古霉素治疗早产儿感染,特别是革兰阳性菌引起的重症感.2为染效果明确。进行 TDM可以实现早产儿万古霉素治疗个体化,使早产儿用药更加安全有效。     

女性生殖道支原体感染类型及药敏分析

目的：了解无锡地区女性生殖道支原体感染类型及体外药敏情况,指导临床合理用药。方法：选择2 618例生殖道支原体感染的患者并进行体外支原体药敏试验。结果：2 618例支原体感染患者中解脲脲原体（Uu）的感染率为84.7%（2 218/2 618）,人型支原体（Mh）的感染率为2.9%（75/2 618）,混合感染（Uu＋Mh）的感染率为12.4%（325/2 618）。药敏实验显示支原体感染对强力霉素、交沙霉素、美满霉素较敏感。结论：女性生殖道支原体感染以Uu为主,治疗首选强力霉素、交沙霉素、美满霉素,药敏实验有助于指导临床合理用药。     

hGITRL_(aa52-177)蛋白在杆状病毒系统中的表达

目的 利用杆状病毒系统表达hGITRLaa52-177蛋白.方法 PCR扩增获得hGITRL胞外段(hGITRLaa52-177)基因,克隆入pFastBacHTa转移载体,在E.coli DH10Bac内通过转座子Tn7的介导,得到重组杆粒,转染Tn细胞表达目的蛋白.通过SDS-PAGE电泳及Western blotting鉴定目的蛋白的表达.结果 重组载体 pFastBacHTa-hGITRLaa52-177以及重组杆粒Bacmid-hGITRLaa52-177构建正确,在Tn细胞内成功表达6×His-hGITRLaa52-177重组蛋白,SDS-PAGE电泳及Western blotting显示重组hGITRLaa52-177蛋白相对分子质量约为Mr 18 000.结论 杆状病毒-昆虫表达系统获得 hGITRLaa52-177蛋白,为进一步从蛋白质水平研究hGITR/hGITRL对机体免疫调节的影响奠定了基础.     

孕妇血清标记物筛查唐氏综合征

目的评价采用孕妇血清标记物进行产前筛查唐氏综合征的效果。方法对总共1254例中期妊娠妇女用酶联免疫法检测其三种血清标记物：aFP、uE3、β-hcG，计算个体风险率。结果在所有接受筛查的孕妇中，筛查阳性153例，共有3例确诊为唐氏综合征(2例产前筛查阳性，1例产前筛查阴性)，总检出率为66.7％。结论孕妇血清标记物筛查可作为一项有效控制唐氏综合征发生的常规手段。     

可视化LAMP法检测耐碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌耐药基因bla_(KPC-2)的初步应用

目的建立可视化环介导等温扩增(LAMP)方法检测肺炎克雷伯菌耐药基因bla_(KPC-2),并初步评估其应用价值。方法设计3对特异性的LAMP引物,建立25μL的LAMP检测体系并进行优化,通过与聚合酶链反应(PCR)进行比较,分析其特异性和敏感性。结果成功建立了检测肺炎克雷伯菌耐药基因bla_(KPC-2)的可视化LAMP方法。63℃保温40 min可实现对bla_(KPC-2)基因的快速检测。特异性与PCR一致,敏感性比PCR高约10倍。采用新建立的可视化LAMP方法检测出25株对亚胺培南、美罗培南和厄他培南其中之一耐药的肺炎克雷伯菌中有12株携带bla_(KPC-2)基因,31株对亚胺培南、美罗培南和厄他培南敏感的肺炎克雷伯菌中有5株携带bla_(KPC-2)基因,二者比较差异有统计学意义(P=0.009 9)。结论建立的可视化LAMP方法可作为检测肺炎克雷伯菌耐药基因bla_(KPC-2)的方法,但尚不能替代体外药物敏感性试验。     

前S1抗原与HBVDNA及血清标志物检测结果分析

目的检测乙型肝炎表面抗原（HBsAg）阳性患者的乙型肝炎病毒血清标志物（HBV—M）、前S1抗原（Pre-S1Ag）及HBV DNA水平,并探讨三者的相关性。方法酶联免疫吸附试验法测定HBV-M及Pre-S1Ag,荧光定量聚合酶链反应检测HBV DNA。结果Pre-S1Ag在乙型肝炎e抗原（HBeAg）阳性和阴性患者的检出率差异有统计学意义,与HBV-M有良好的相关性。结论Pre-S1Ag可作为HBV DNA和HBV—M检测的补充和对照。