大肠埃希菌MG1655 Lon蛋白酶编码基因敲除株的构建

目的构建Lon蛋白酶编码基因缺失的大肠埃希菌（E．coli MG1655）菌株。方法PCR扩增基因序列,该序列两端与Lon蛋白酶基因部分序列同源,中间部分为氯霉素抗性基因。电转化法将该片段转入大肠埃希菌MG1655。利用宿主菌-大肠埃希菌MG1655内pKIM6编码的入重组系统,以PCR产物中的氯霉素抗性基因替代靶基因-Lon编码基因。氯霉素抗性平板筛选阳性重组体,琼脂糖凝胶电泳和DNA测序两种方法鉴定lon敲除突变株。结果氯霉素抗性平板成功筛选出重组菌株,基因检测结果表明Lon编码基因被氯霉素抗性基因替代。结论本研究通过该方法成功获得了E．coliMG1655蛋白酶编码基因lon敲除突变株,为探讨大肠埃希菌Lon在牙菌斑形成中的作用奠定了基础。     

Nrf2和Trx1在华支睾吸虫感染小鼠肝脏中表达的初步研究

目的分析华支睾吸虫感染小鼠肝脏中Nrf2和Trx1编码基因的表达情况,初步探讨Nrf2及Trx1在华支睾吸虫致病过程中的作用。方法选用健康Balb/c小鼠建立华支睾吸虫感染模型,分别在实验第0、3、5、7、10、14、21、28和35d摘除小鼠眼球采血,分离血清,检测血清中天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性;颈椎脱臼处死小鼠取肝脏,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝脏中Nrf2和Trx1的m RNA表达情况。结果与对照组相比,感染组小鼠在感染第5、7、10、14、21和35d血清ALT活性显著升高(P0.05);分别为(19.9332±1.98180)U/L、(64.3699±14.53874)U/L、(46.7455±6.27572)U/L、(99.0038±25.34329)U/L、(46.7590±8.85478)U/L和(50.3374±14.19886)U/L。感染组小鼠抗氧化应激通路上游基因Nrf2和下游Trx1的m RNA表达升高;其中Nrf2在感染第5天升高显著(P0.05);Trx1在感染第21d升高显著(P0.05)。结论 Nrf2和Trx1 m RNA在华支睾吸虫感染过程中表达升高,提示Nrf2/Trx1通路可能在华支睾吸虫致病过程中发挥一定的作用。     

红芪多糖3促进小鼠胸腺细胞增殖的差异蛋白质点分析

目的:寻找红芪多糖3(HPS-3)作用后小鼠胸腺组织差异表达的蛋白质点,探讨HPS-3提高免疫力的分子生物学水平机制。方法:正常小鼠给予不同剂量的HPS-3,测定胸腺、脾脏指数及T淋巴细胞增殖能力,并运用双向凝胶电泳技术对胸腺组织蛋白进行分离,银染显色、Image Scanner获取凝胶图谱后,通过PD Quest软件对其进行分析、寻找差异蛋白质点。结果:HPS-3(50mg/kg)对小鼠胸腺指数、脾脏指数及T淋巴细胞增殖能力无显著影响,而100 mg/kg HPS-3能显著增加小鼠胸腺、脾脏指数,增强T淋巴细胞增殖反应。实验所得2-DE图谱经PD Quest软件分析得出以下结果:空白组分离得到1129个蛋白点,HPS-3组得到1167个蛋白质点,仅在空白组出现的蛋白质点有316个,仅在HPS-3组出现的蛋白点有354个,两组共有的蛋白点中表达量差异两倍以上的有192个。结论:HPS-3能促进胸腺细胞增殖,显著影响小鼠胸腺细胞蛋白质表达。     

口腔微生物的研究进展

口腔是一个复杂的微生态环境,口腔组织器官以及口腔中的微生物共同构成了口腔微生态系统。口腔中数目繁多的微生物之间以及微生物与口腔环境之间有着千丝万缕的关系。本文就口腔微生物的研究技术、口腔微牛物与口腔疾病的关系、以口腔菌群为基础的生物制品研究等进行了综述。     

红芪多糖3作用小鼠胸腺组织蛋白双向电泳技术的建立

目的建立和优化红芪多糖3(HPS-3)作用后小鼠胸腺组织蛋白质组双向电泳技术方法。方法采用标准裂解法提取HPS-3 100 mg/(kg.d)灌胃14 d小鼠的胸腺组织总蛋白,后续进行三氯乙酸(TCA)-丙酮沉淀法和去脂蛋白纯化法获取胸腺组织蛋白,以固相pH梯度胶条进行双向凝胶电泳,并对等电聚焦程序进行改良和优化,同时将去脂蛋白纯化法运用于A549细胞蛋白的纯化并进行双向电泳,银染色后进行凝胶图像比较。结果去脂蛋白纯化法不仅能减少蛋白降解,而且增加蛋白的溶解性,因此去脂蛋白纯化法所得蛋白的双向电泳图谱显示更好的溶解性和重复性,此外在双向凝胶电泳(2-DE)时,聚焦电压在传统聚焦条件上进行优化,使横向和纵向拖尾有明显改善,成功建立了背景清晰,蛋白分离良好、分辨率较高的胸腺组织蛋白的双向电泳体系。去脂蛋白纯化法同样适用于A549细胞蛋白提取纯化。结论建立了HPS-3作用后小鼠胸腺组织蛋白质组提取纯化的方法,采用去脂蛋白纯化法可以更有效地提取胸腺组织蛋白。利用优化后的实验方法,获得了HPS-3作用后小鼠胸腺组织蛋白2-DE图谱,为后续研究打下基础。     

根管感染中产甲烷古细菌基于 mcrA 序列的系统发育分析

目的：分析根管感染中产甲烷古细菌的多样性,建立基于功能基因--甲基辅酶 M 还原酶（methyl coenzyme M reduc-tase,MCR）基因α亚基（mcrA）的系统发育树。方法：利用一对特异性引物选择性扩增感染根管中产甲烷古细菌的 mcrA 片段,在此基础上建立 mcrA 克隆文库。通过蓝白斑筛选的方法,筛选出阳性重组克隆子,进一步通过基因测序获得重组克隆子中的插入片段 mcrA 序列。利用 Clustalx 和 Mega 4软件包分析 mcrA 序列,对其进行同源性比较和系统发育学分析。结果：4例根管样本的其中1例检出了产甲烷古细菌;构建了基于 mcrA 序列的系统发育树。随机选出的8个 mcrA 克隆片段高度同源,均为类口腔甲烷短杆菌序列型。结论：本例根管感染中产甲烷古细菌的多样性局限于类口腔甲烷短杆菌序列型。     

鼻内窥镜下鼻出血的微波治疗(附113例分析)

目的:采取最简单而行之有效的方法迅速制止出血。方法:全部病例均采用微波治疗,输出功率0~80瓦,照射时间0~10 s。结果:总有效率100%,患者均获得满意的止血效果。结论:鼻内镜下微波治疗鼻出血局部损伤小,病人痛苦小,治疗时可立即制止出血,一般不会引起出血加重而使治疗无法继续进行。     

充分利用医学教育资源提高生物类专业微生物学教学质量的思考

微生物学是高等院校生物类专业的专业基础课,具有涉及面广、实用性强及发展迅速等特点,同时也是其他生物学理论和课程的基础,其教学质量对生物专业人才培养具有重要影响。徐州医科大学生物类专业是一门新开专业,如何结合医学院校自身教育优势及生物类专业特点和发展要求,努力探索一套科学合理、具有医学院校特色的微生物学教学体系,是目前医学院校生物类专业微生物教学的重要议题之一。     

双歧杆菌Ⅱ型毒素-抗毒素系统-MazEF的分子进化分析

目的：对双歧杆菌属编码的Ⅱ类毒素-抗毒素（TA）系统MazEF进行分子进化分析。方法：利用PSI-BLAST在NCBI中搜索获得双歧杆菌编码的MazF分子序列,在NCBI蛋白数据库、核酸数据库分别下载其他菌属基因组编码的MazF蛋白序列和本研究所涉及菌属的16 S rRNA序列,应用Clustal X2和MEGA4软件对Maz F做分子进化分析。结果：共搜索到双歧杆菌株染色体编码毒素蛋白MazF 26个。分子进化分析显示：整个双歧杆菌属的MazF保守性不好;MazF与16 S rRNA的共进化仅在个别菌种中发现,大部分MazF的聚类结果与相应菌种16 S rRNA的聚类结果不同。结论：双歧杆菌中的TA系统MazEF可能是通过基因的水平转移整合入基因组中,属于菌株非核心基因组部分。