精子与肿瘤细胞融合模型的建立

目的：构建一种稳定的精子与肿瘤细胞融合体系,为精子与肿瘤细胞融合研究提供生物模型。方法：采用体外共培养的方式进行精子与HeLa细胞等多种肿瘤细胞的融合实验;采用共聚焦显微镜三维重建成像的方法对精子与肿瘤细胞融合现象进行确证;采用嵌套式培养体系作为融合实验的对照研究;采用自主合成的精子与肿瘤细胞共培养基（STCM）对精子与肿瘤细胞融合模型进行优化。结果：精子与肿瘤细胞在体外可以发生融合,融合事件多发生于共培养后的1.5~2 h,精子与肿瘤细胞融合形成的嵌合型肿瘤细胞呈明显的球形改变,其贴附能力明显下降,通常漂浮于培养中。与RPMI 1640培养基相比较,STCM能够在不影响肿瘤细胞生长的情况下,显著提高精子与肿瘤细胞的融合率（P < 0.05）,并且能够加速精子与肿瘤细胞地融合。结论：采用体外共培养的方法,我们建立了精子与肿瘤细胞融合的生物模型。     

阿司匹林与氟尿嘧啶协同抑制结肠癌细胞生长增殖的机制研究*

 目的：检测阿司匹林与氟尿嘧啶协同抑制结肠癌细胞生长增殖的能力及相关作用机制。方法：将体外培养的结肠癌细胞分为4组：空白对照组、阿司匹林组、氟尿嘧啶组和阿司匹林+氟尿嘧啶组,采用MTT法检测阿司匹林和氟尿嘧啶抑制结肠癌细胞增殖的效果,采用Hoechst 33258染色、caspase活性检测和流式细胞术检测研究药物诱发凋亡的作用及机制,采用real-time PCR和Western blotting方法检测药物对凋亡相关蛋白表达的调控作用。结果：氟尿嘧啶有效抑制HCT116和SW620结肠癌细胞增殖,且低浓度阿司匹林具有协同抑制的效果。氟尿嘧啶诱发HCT116细胞核出现明显的凋亡形态,caspase酶活性增高及sub-G1期比例增加。阿司匹林协同作用明显提高HCT116细胞凋亡的比例和caspase酶活性。此外,低浓度阿司匹林可以显著增强氟尿嘧啶抑制Bcl-2 mRNA及蛋白表达的效果。结论：阿司匹林和氟尿嘧啶具有协同抑制结肠癌细胞生长增殖的效果,且主要通过诱发细胞凋亡发挥作用。     

TLR7激动剂偶联OCT4对小鼠卵母细胞发育成熟的影响

【立论依据】 TLR7激动剂是疫苗研发的理想佐剂,其抗肿瘤的作用表现为多效性,而肿瘤蛋白OCT4在生殖肿瘤中高度表达。更有研究表明,肿瘤免疫是以细胞免疫为主,而TLR配体与蛋白的偶联能产生更强的T细胞免疫效应。因此,本课题选择易合成及改造性强的小分子TLR7激动剂作为佐剂,首次将TLR7激动剂与OCT4蛋白偶联,有关研究已初步证实了偶联疫苗产生强而显著的抗肿瘤活性,具有临床应用价值。但是,OCT4在生殖细胞中亦高表达,该疫苗是否具有生殖细胞毒性尚需要进一步探明,为后续临床应用提供参考,此方面研究目前尚未见相关报道。 【设计思路】 用腹腔给药的方法研究体内生长发育成熟卵母细胞的超排情况,用液滴培养法研究3种试剂对体内发育体外成熟卵母细胞的情况,以及采用液滴包埋培养窦前卵泡模拟体外生长环境研究试剂对其体外发育成熟情况。 【实验内容】 选取雌性小鼠作为研究对象,分别采用体内超排、卵母细胞体外分段培养成熟技术检测TLR7、OCT4以及TLR7-OCT4作用后对卵母细胞数目、卵母细胞的成熟率以及体外培养卵泡直径与卵母细胞发育成熟状态的影响。 【材料】 实验动物:SPF级 KM小鼠;主要试剂:TLR7、OCT4、T7-OCT4、α-MEM培养基、注射用青霉素钠和硫酸链霉素、胎牛血清、矿物油、rLH、FSH、HCG及PMSG;实验仪器:二氧化碳培养箱、-80℃超低温冰箱、高压湿热灭菌锅、超净工作台、恒温水浴箱、倒置显微镜、正置显微镜等。 【可行性】 本实验室创立的生殖毒性检测系统现已完善,且各实验用品来源充足,窦前卵泡体外培养技术成熟。 【创新性】 实验材料价值大:OCT4控制细胞多能性的作用机制目前并未明确。本实验针对Oct4的作用特点研究其对女性生殖系统的影响,率先阐明Oct4在这一领域的具体作用价值;实验方法先进:率先将生殖工程中的前沿技术——腔前卵泡培养成熟技术应用于本实验的检测与评价中,高度接近人体生殖细胞的环境,该技术可靠性与准确性高;思路新:首次检测Oct4基因,腔前卵泡及卵母细胞发育,系统研究细胞毒性的发生过程及机制;意义深:在基因水平研究TLR激动剂对生殖系统的影响,从基因水平到具体性状,从微观水平到宏观水平,纵向剖析对生殖系统的具体影响,对生殖细胞的分化、生长、应激有着举足轻重的意义。     

酚磺乙胺合成工艺改进

酚磺乙胺合成工艺改进靳广毅，曾荣华（山东省医药工业研究所，济南２５０１００）酚磺乙胺作为促凝药，临床上广泛用于手术后防止出血。关于该化合物的合成，目前国内生产工艺均以对苯二醌为原料与二乙肤和二氧化硫生成的复盐反应。该法生产成本较高。我们参考文献［１］...     

精子与肿瘤细胞融合模型的生物学特性研究

目的：探讨精子与肿瘤细胞融合模型的生物学特性。方法：采用体外共培养对精子与肿瘤细胞融合模型的时效性、细胞接种密度依赖性及细胞类型特异性进行分析。采用显微操作及单克隆培养法获得小鼠精子与HeLa细胞融合的嵌合型单克隆细胞株,并对其进行生物学鉴定。采用体外扩增Y染色体特异基因TSPY的方法鉴别宫颈癌石蜡组织中的嵌合型肿瘤细胞。结果：精子与肿瘤细胞在体外的融合通常发生于共培养后的1.5 h,精子与肿瘤细胞融合率随细胞接种密度的升高而降低,精子与腺癌来源的肿瘤细胞具有更高的细胞融合率。在20例宫颈癌蜡块标本中我们发现1例存在嵌合型肿瘤细胞,而且其TSPY基因存在1处有义突变。结论：精子与肿瘤细胞融合存在时效性、细胞接种密度依赖性及细胞类型特异性特征。在宫颈癌标本中存在嵌合型肿瘤细胞。     

视网膜母细胞瘤发病机制的研究进展

视网膜母细胞瘤(RB)是婴幼儿常见的眼内恶性肿瘤,严重影响患儿的视力,甚至可危及生命。随着生物医学技术的发展,关于RB的研究已涉及病因学、分子生物学、表观遗传学、肿瘤干细胞及新药应用等各个方面。本文主要就国内外RB发病机制的研究进展进行系统综述,希望为RB的预防、诊断和治疗提供指导和参考意义。     

基于双中心理论的乙酰胆碱酯酶抑制剂研究进展

双中心理论早就应用于一些受体中 ,例如胆碱能烟碱受体双中心假说在 5 0年前就已提出 ,并依此设计出许多对称的双季铵盐化合物 ,例如氯化琥珀胆碱 (ｓｕｃｃｉｎｙｌｃｈｏｌｉｎｅｃｈｌｏｒｉｄｅ,1 ) [1 ] 、氯化美斯的明(ａｍｂｅｎｏｎｉｕｍｃｈｌｏｒｉｄｅ,2 )及箭筒毒碱 (ｔｕｂｏｃｕｒａｒｉｎｅ)、肌安松 (ｐａｒａｍｙｏｎ)等。　　1 982年 ,Ｅｒｅｚ等[2 ] 发展了阿片受体的双中心理论 ,设计并合成了Ｐ Ｘ Ｐ形式的双分子化合物 ,其中Ｘ代表直链烃基 ,Ｐ为原活性化合物。并用实验证实了活性和链长的关系 ,确定两个活性中心有…     

盐酸安非拉酮的合成

盐酸安非拉酮的合成ＳＹＮＴＨＥＳＩＳＯＦＡＭＦＥＰＲＡＭＯＮＥＨＹＤＲＯＣＨＬＯＲＩＤＥ靳广毅侯宁曾荣华（山东省医药工业研究所，济南２５０１００）ＪＩＮＧｕａｎｇ－Ｙｉ，ＨＯＵＮｉｎｇ，ＺＥＮＧＲｏｎｇ－Ｈｕａ（ＳｈａｎｄｏｎｇＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆ...     

Toll样受体与配体复合物结构的研究进展

Toll样受体(TLR)是一类模式识别受体,通过识别病原微生物的保守结构分子模式,触发先天免疫反应和基本的抗原特异适应性免疫。一些TLR结合配体复合物及胞内外结构域的晶体结构已经通过X射线晶体衍射分析确定。尽管配体结合位点各有不同,但是TLR家族胞外结构域均为马蹄状结构,其配体复合物的"m"外形也极度相似,C末端中心汇聚对胞内Toll/白细胞介素1受体(TIR)结构域紧靠一起非常重要,是启动下游信号的必需步骤。本文主要总结了TLR胞内外功能结构域及配体复合物的结构。