河南省部分区域肾综合征出血热患者汉坦病毒的分子特征

目的 分析河南省部分区域肾综合征出血热患者汉坦病毒的分子特征。方法 采集2017-2018年就诊于河南省郑州市第六人民医院临床诊断为肾综合征出血热患者血标本32例,采用半巢式PCR筛选汉坦病毒阳性样本,然后再对阳性样本中病毒S片段和M部分片段基因进行扩增和测序,并对得到的S片段基因序列进行组装。所得序列与已分离到的国内其他省份相对应的基因序列进行同源分析并构建系统发生树。结果 收集的32份血标本中,16份血标本扩增出目的片段,序列分析表明均为汉滩病毒(HTNV)。系统发生分析显示16株病毒株S片段和M部分片段聚类分支关系基本一致。其中HN2018/138病毒株与其余15株S片段和M部分片段核苷酸序列的同源性分别为91.4%~92.1%和83.2%~84.4%,差异较大,其余15株亲缘关系较近。结论 本研究所统计的河南省部分区域内肾综合征出血热患者以HTNV为主导基因型,且其表现出明显的地域聚集现象,并存在基因差异较大的变异株或省外输入病毒株的可能性。     

前列腺癌特异突变DNA聚合酶β表达载体转染NIH3T3的细胞生物学行为变化

目的观察前列腺癌(CPa)特异突变DNA聚合酶β(polβ)表达载体转染NIH3T3的细胞生物学行为变化。方法采用业已成功构建的2例特异突变polβ表达载体(pCDNA3.1-M1和pCDNA3.1-M2),采用脂质体包裹转染NIH3T3细胞,观察比较这些突变对细胞polβ基因mRNA和蛋白表达的影响以及引发的相应的细胞周期和细胞自发突变率等细胞生物学行为的变化。结果筛选得到高表达PCa特异突变polβ的NIH3T3细胞株(NIH3T3-M1,NIH3T3-M2)和高表达野生型polβ的NIH3T3细胞株(NIH3T3-W)。RT-PCR和Western印迹结果显示,外源DNApolβ在转化的NIH3T3细胞中呈现高表达。与转染空载体和未转染的NIH3T3细胞相比,转染PCa特异突变polβ的2个细胞株和转染野生型polβ的细胞株的细胞周期的S期比例及转染细胞的HGPRT(次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶)基因的自发突变率均显著增加,且转染野生型polβ的细胞株亦显著高于转染PCa特异突变DNApolβ的细胞株。结论 DNApolβ高表达介导了肿瘤发生的分子机制。     

质粒构象对转染后蛋白表达时间曲线的影响

目的探讨质粒的不同构象下磷酸钙转染后对蛋白表达量时间曲线的影响。方法经过处理的pcDNA3-MADCAM-1-Fc,pcDNA3.1/Hygro（＋）-Alpha4,pcDNA3.1/Hygro（＋）-Beta7三种质粒磷酸钙转染293T细胞,第一种表达分泌到胞外的蛋白通过收集上清,ProteinA纯化,另外两种表达于细胞外膜,通过流式细胞仪检测荧光强度。结果 pcDNA3-MADCAM-1-Fc磷酸钙转染后处理组（缺口开环）比对照组表达蛋白量多（t=5.009,p=0.0376）。pcDNA3.1/Hygro（＋）-Alpha4,pcDNA3.1/Hygro（＋）-Beta7两种质粒共转后处理组荧光强度36h后略高于对照组,48h后对照组明显升高。结论质粒的不同构象下磷酸钙转染后蛋白表达量有时间依赖性。     

人类免疫缺陷病毒储存库与人类免疫缺陷病毒感染/艾滋病患者免疫重建不良的相关性研究

目的:通过分析人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)1储存库与HIV感染/艾滋病患者发生免疫重建不良的相关性,探讨HIV-1储存库对免疫重建功能的影响。方法:筛选抗反转录病毒治疗2年以上、HIV RNA低于检测下限的HIV感染/艾滋病患者219例,其中郑州市第六人民医院19...     

嵌合病毒样颗粒疫苗研究进展

嵌合病毒样颗粒(chimeric virus-like particle,cVLP)是一种改良型病毒样颗粒,通过基因融合表达或基于病毒样颗粒平台采用化学偶联的方法将外源抗原多肽与其偶联制备而成.此文就cVLP疫苗的制备方法、免疫机制、表达系统及免疫原性等方面的研究进展做一综述.     

伤寒杆菌抗原胶体金层析法的研制及应用

目的:建立一种早期、简便、快速、准确的诊断伤寒的检验方法。方法:采用单克隆抗体,胶体金标记技术,运用双抗体夹心法,免疫层析原理,建立伤寒杆菌抗原胶体金层析法。与肥达反应、血培养、ELISA法进行对比。结果:伤寒杆菌抗原试纸条的灵敏度较肥达反应、血培养高,特异性与ELISA法接近,灵敏度比ELISA法稍低。结论:伤寒杆菌抗原试纸条具有简便、快速、结果易懂、无需特殊仪器的优点,能满足急诊检验的需要,提供了便利条件,适合于广大基层门诊推广、体检普查以及流行病学调查。     

河南省抗病毒治疗失败的艾滋病患者耐药特征

目的 对河南省艾滋病患者抗病毒治疗（ART）失败后的基因型耐药检测，分析ART失败的耐药特征。方法 研究对象为2018年1月至2021年5月河南省18个城市接受ART时间≥6个月且病毒载量≥1 000拷贝数/ml艾滋病患者，收集艾滋病患者血液样本、社会人口学特征和ART信息。采用In-house方法进行HIV-1基因型耐药检测，将基因序列提交到美国斯坦福HIV-1耐药数据库分析耐药突变位点和药物耐药情况。结果 在887例ART失败的艾滋病患者中，样本成功扩增率为91.54%（812/887），总耐药率为83.25%（676/812），其中核苷类反转录酶抑制剂（NRTIs）、非核苷类反转录酶抑制剂（NNRTIs）、蛋白酶抑制剂（PIs）和整合酶抑制剂（INSTIs）的耐药率分别为73.40%（596/812）、80.54%（654/812）、5.54%（45/812）和2.56%（17/663），4类药物的耐药率差异有统计学意义（χ²=1 686.34，P<0.001），对2类药物同时耐药率为66.38%（539/812），对3类药物同时耐药率为5.79%（47/812）。共检出9个HIV-1基因亚型，以B亚型为主（59.61%，484/812），其次是CRF01_AE亚型（22.17%，180/812）和CRF07_BC亚型（9.48%，77/812），不同基因亚型的耐药率差异有统计学意义（χ²=21.33，P=0.001）。NRTIs相关突变位点中，M184V/I突变率最高（63.42%，515/812），其次是K65R（27.46%，223/812）；NNRTIs相关突变位点中，突变率位居前3位的是K103N/S（34.98%，284/812）、G190A/S（26.11%，212/812）和V106M/I（24.63%，200/812）；PIs相关突变位点中，突变率位居前3位的是M46I（4.31%，35/812）、V82A/F（3.82%，31/812）和I54V/MV（3.69%，30/812）；INSTIs相关突变位点中，E157Q/EQ突变率最高（3.47%，23/663），其次是R263K和G140A（均为0.75%，5/663）。在NRTIs中，拉米夫定和恩曲他滨以高度耐药为主（65.52%，532/812）；在NNRTIs中，奈韦拉平（77.46%，629/812）和依非韦伦（71.18%，578/812）以高度耐药为主；在PIs中，洛匹那韦/利托那韦中/高度耐药占比仅为4.19%（34/812）；在INSTIs中，艾维雷韦和拉替拉韦中、高度耐药分别占1.66%（11/663）和1.21%（8/663），未发现比克替拉韦和多替拉韦的高度耐药。结论 河南省艾滋病患者ART失败的耐药率高，表现以NRTIs和NNRTIs耐药率高、耐药突变多样且复杂为特点。建议选择高耐药屏障药物，同时加强ART后病毒载量和耐药监测。