TLR激动剂抑制IL-27诱导的THP-1细胞HLA-DR的表达

目的研究白介素27(IL-27)对THP-1单核细胞系Ⅱ类转录活化子(classⅡtransactivator,CⅡTA)和Ⅱ类主要组织相容性复合物(major histocom patibility complex classⅡ,MHCⅡ)分子的表达的影响及Toll样受体(Toll-likereceptor,TLR)激动剂LPS和Pam3CSK4的干预作用。方法RT-PCR检测CⅡTAⅠ、Ⅲ和Ⅳ以及人白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)-DRA和干扰素调节因子-1(interferon regulatory factor-1,IRF-1)mRNA的表达。半定量PCR检测HLA-DRA、DRB、DPA、DPB、DQA、DQB、IRF-1、CⅡTA mRNA的表达。流式细胞术检测细胞表面HLA-DR的表达。结果IL-27刺激24h后可分别上调THP-1细胞CⅡTAⅢ、CⅡTAⅣ和IRF-1mRNA表达水平。IL-27刺激24h和48h可升高MHCⅡ类分子mRNA的表达,并能诱导HLA-DR在28%和53%的THP-1细胞表面表达。在THP-1细胞和PMA诱导的THP-1巨噬细胞,LPS和Pam3CSK4均可抑制IL-27诱导的CⅡTA和HLA-DR的表达。结论IL-27可上调THP-1细胞CⅡTA和MHCⅡ类分子的表达,这种作用可被LPS和Pam3CSK4抑制。     

DNMT3B基因启动子单核苷酸多态性C46359T与中国北方汉族人群ITP发病的相关性研究

目的 探讨甲基化转移酶家族DNMT3B基因启动子C46359T单核苷酸多态性与特发性血小板减少性紫癜（idiopathic thrombocytopenic purpura,ITP）发病的相关性。方法采用PCR—RFLP结合DNA测序技术检测201例ITP患者及136例正常对照DNMT3B基因启动子C46359T单核苷酸多态性。结果在ITP患者和正常对照中均未检测到C／C基因型。在正常对照中．T／T纯合型和C／T杂合型及T、C等位基因的频率分别为97．8％、2．2％、98．9％和1．1％。ITP患者和正常对照之间的基因型和等位基因频率相比无统计学差异（P值分别为0．745和0．747）。ITP患者按年龄和病程分组,儿童组和成人组、儿童急性组和慢性组及成人急性组和慢性组之间的基因型和等位基因的分布均无统计学差异。结论ITP患者和正常对照的DNMT3B基因启动-149位基因型的基因型分布类似;中国北方人群中,DN—MT3B基因启动子-149位基因多态性不能作为ITP易感性的一个预测指标。     

银染mRNA差异显示方法的建立

目的：建立银染mRNA差异显示方法，为差异表达基因片断的分离克隆奠定基础，方法：采用随机引物和锚定引物各1条，建立差异显示反转录聚合酶链式反应（DDRT－PCR）和银染方法，对DDRT－PCR过程中各实验影响因素进行优化，割取差异条带进行二次扩增。结果：当总RNA用量为0．2ug，引物浓度为0．6－1．0umol/L,dNTP浓度为200unmol/L,MgCl2浓度为1．6－2.0mmol/L，时，同时起始5个循环的退火温度为50℃，扩增效率最佳，特异性好，背景 干净，结论：DDRT－PCR方法简便，灵敏，高效，可用于分离差异表达基因。     

成人过敏性紫癜28例临床分析

目的:了解成人过敏性紫癜的临床特点。方法:回顾性分析2005年5月至2010年6月在我院诊治的28例成人过敏性紫癜患者的临床和实验室资料。结果:本组病人以青壮年男性为主,冬、春季好发,上呼吸道感染为主要诱因,多数患者以皮肤紫癜为首发表现,双下肢为皮疹最易出现的部位,有关节损害者4例(14.3%),有胃肠道损害者5例(17.9%),有肾脏损害者7例(25.0%)。结论:成人过敏性紫癜除有皮疹表现外,可累及关节、胃肠道及肾脏。     

低剂量亚慢性砷中毒对家兔血液相关指标水平的影响研究

砷（As）是具有类金属特征的一种元素,普遍存在于自然界之中,而且As还能够通过各种方式而进入至人类生活的环境之中。本研究主要采用基础对照实验的方法,探讨低剂量NaAsO_2对家兔血液生化指标、血小板系统以及酶学相关指标水平的影响。     

DNA拓扑异构酶和谷胱甘肽S转移酶介导的机制在急性白血病临床耐药中作用的探讨

目的:探讨急性白血病(AL)患者DNA拓扑异构酶和谷胱甘肽S-转移酶介导的机制在临床耐药中的作用。方法:应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测111例AL患者DNA拓扑异构酶基因(TopoⅠ、Ⅱα、Ⅱβ)及谷胱甘肽S转移酶(GSTα、π)等基因mRNA表达水平,分析与临床化疗疗效的关系。结果:AL组TopoⅡα、TopoⅡβ、GSTπ相对表达水平明显高于正常对照组,GSTα表达水平明显低于对照组(P<0.05)。TopoⅠ则在两者间差别无显著(P>0.05)。上述基因在初治与复发组间表达无明显差别,但GSTα在耐药组表达水平明显高于敏感组(P<0.05),其余基因在敏感组与耐药组AL患者间表达无明显差别(P>0.05)。结论:GSTα可能与临床耐药相关,Topo和GSTπ在酶介导耐药机制中的具体作用需结合其它因素综合分析,不能将其孤立地作为判断耐药的肯定指标。     

Lag-3基因rs870849多态性和CD4基因rs2515733多态性与ITP易感性之间的联系

目的 分析cD4基因rs2515733多态性和Lsg-3基因rs870849多态性与特发性血小板减少性紫癜(ITP)易感性之间的关系.方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP)分析157例ITP患者和136例正常人的基因分型.结果 CD4基因rs2515733多态性位点基因频率和Lag-3基因rs870849多态性位点基因频率在患者组与对照组之间无显著差异.结论 ITP患者和正常人ca4基因rs2515733多态性和Lag-3 基因rs870849多态性基因频率的分布类似,这两个基因的多态性与ITP易感性无关.     

成人特发性血小板减少性紫癜患者生活质量研究

目的:评价成人特发性血小板减少性紫癜(ITP)对患者生活质量(QoL)的影响.方法:使用Medical Outcome Study SF-36 form(SF-36)中文版对中国医学科学院血液病医院236例成人ITP患者进行QoL调查.按照血小板计数,将患者分为3组[PLT<30×109/L;PLT(30～100)×109/L;PLT>100×109/L].SF-36的8个维度作为测量结果:躯体健康(PF);社会功能(SF);躯体角色功能(RP);躯体疼痛(BP);心理健康(MH);情绪角色功能(RE);精力(VT);总体健康(GH).结果:在8个维度ITP患者和正常人相比SF-36 QoL均降低.在PF、RP、BP、GH、SF和RE等6个维度中QoL得分差异有统计学意义.急性ITP患者在GH、VT和RE 3个维度与慢性患者相比QoL得分的差异有统计学意义.同时,在根据血小板计数分组的比较中,在PF、GH和SF 3个维度显示了明显的差别.年龄是除了SF以外其他所有维度的负性预测因子.当前血小板计数是BP,SF和GH的负性预测因子.而且治疗费用也影响了QoL得分.对出血的恐惧作为主观指标对QoL有明显的负面影响.结论:成人ITP患者的QoL明显降低,年龄、血小板计数和出血的恐惧对QoL有明显的负面影响.本研究为ITP的临床研究提供了基于询证的证据.     

逆转录病毒载体转染的人凝血因子Ⅸ基因在人脐带组织源间充质干细胞中的表达

为了研究逆转录病毒（pLEGFP—N1）转染的人凝血因子Ⅸ（hFⅨ）基因在人脐带间充质干细胞中的表达,应用DNA重组技术将hFⅨ cDNA构建入pLEGFP—N1载体,转导入包装细胞系Pheonix细胞,应用病毒上清感染人脐带组织源间充质干细胞（hUCT—MSCs）,经G418筛选10天后获得全部的转染阳性细胞,从蛋白质水平和其功能活性上检测hFⅨ的表达。结果显示：配养上清液中可检测到hFⅨ的表达,每24小时分泌量达2．68±0．36μg／10^6细胞。Westernblot检测表明,转导hFⅨ的hUCT—MSCs能分泌预期分子大小的hFⅨ入上清。功能性凝集测定实验表明了转导F／X的hUCT—MSCs 2天培养上清中hFⅨ的活性为100％-130％。结论：pLBGVe—N1-hFⅨ能有效地转导hUCT—MSCs,并在其子代细胞中表达具有凝血活性的hFⅨ,这为hUCT—MSCs成为血友病B基因治疗的细胞载体研究奠定了基础。     

腺病毒递送BMI-1shRNA

近年来发展了一些质粒载体介导shRNA的转录,然后在细胞酶的作用下加工成功能性的siRNAs。虽然这些载体较化学合成的siRNA有更多的优点,但仍存在相当多的缺点,如转染效率低和不能在体内使用。本研究建立一种没有上述缺点的腺病毒递送BmihRNAs系统,设计靶向人Bmi—1的载体。以pAdTrackCMV质粒为模板扩增CMV—GFP表达盒,从pGE1BMIhRNA质粒上酶切下U6-BMI-1shRNA表达盒,克隆它们入穿梭质粒pShuttle中,然后与pAdEasy-1质粒基因重组产生腺病毒质粒pAd—BMIhRNA—CVM—GFP,转染293A包装细胞,收获病毒。病毒感染K562细胞后,在mRNA和蛋白水平上分别用RealTime—PCR和Western blot检测BMI的表达水平。结果表明：成功构建了pGE1BMIhRNA腺病毒质粒并有效包装出病毒。感染BmmRNA腺病毒的K562细胞在mRNA和蛋白水平上均显著下调了Bmi-1的表达,而对照病毒没有明显的效果。结论：腺病毒是一种有效递送siRNA入哺乳动物细胞的载体。腺病毒递送siRNA载体可能成为siRNA药物的基因治疗载体。