抗肿瘤真菌蛋白的研究进展

药用真菌具有明显的抗癌作用。以往认为多糖是真菌抗肿瘤活性的主要成分,但真菌中分离出的真菌免疫调节蛋白、凝集素、核糖核酸酶等蛋白质,具有提高机体免疫、抑制细胞增殖和诱导肿瘤细胞凋亡等抗肿瘤活性。真菌蛋白质是另一种重要的生物活性物质,对其抗肿瘤活性和机制的研究有广大的开发空间和挖掘潜力。     

香菇C91-3 cDNA文库的构建及鉴定

目的 构建香菇C91-3 cDNA文库.方法 低速离心法收集香菇C91-3菌丝体发酵液中的菌丝,提取总RNA,巢式PCR扩增5SrRNA非转录间隔区2片段并测序鉴定.纯化mRNA,以mRNA为模板进行反转录反应;产物与pBlueScript II SK(+)载体连接,并转化E.coil DH10B,检测库容及插入片段.结果 香菇C91-3cDNA文库初始库容为7.2×106cfu,插入片段长度0.4～3.4kb,平均1.5kb.结论 成功构建香菇C91-3 cDNA文库,适合用于研究香菇蛋白的编码基因.     

香菇菌C91-3凋亡相关蛋白24414对小鼠肝癌细胞Hca生物学功能的影响

[目的]通过诱导表达香菇菌C91-3凋亡相关蛋白24414,研究其对小鼠肝癌细胞Hca的生物学功能影响,探讨其诱导肿瘤细胞凋亡的机制。[方法]构建真核重组表达质粒pPIC9K-24414,用毕赤酵母GS115体系进行诱导表达,将已鉴定的诱导表达蛋白作用于小鼠肝癌细胞Hca,用MTT法测定不同浓度目的蛋白组、顺铂(DDP)组及空白对照组的抑瘤率,用流式细胞术检测目的蛋白对肿瘤细胞的凋亡作用,同时用MTT法检测目的蛋白对正常鸡胚成纤维细胞的毒性作用。[结果]Western-blot结果显示目的蛋白成功表达;MTT法检测结果显示,不同浓度此蛋白对Hca细胞的生长抑制作用(OD595)与对照组比较差异均有显著性意义(P<0.05),7.5μg/mL、15μg/mL和30μg/mL目的蛋白的最大抑瘤率分别为70.03%、82.02%和74.66%,均超过5μg/mL DDP的作用;流式细胞术结果显示,此蛋白具有诱导Hca细胞凋亡的能力,早晚双期细胞凋亡诱导率与对照组比较差异均有显著性意义(P<0.05),浓度为30μg/mL时诱导凋亡的作用最强,早晚两期凋亡率分别为(9.28±0.04)%和(9.37±0.03)%;同时此蛋白对正常细胞无毒性作用。[结论]香菇菌C91-3凋亡相关蛋白24414在毕赤酵母GS115中成功诱导表达,此蛋白对小鼠肝癌细胞Hca生长具有抑制作用,能够诱导其产生凋亡,为进一步深入研究香菇菌C91-3的抗肿瘤机制奠定了基础。     

香菇C91-3转录组Unigene 28447基因的蛋白表达及其对细胞凋亡和周期的影响

[摘要]　目的〖ＨＴＫ〗　克隆香菇C91-3转录组中Unigene 28447基因,对其进行生物信息学分析,并研究该基因结构域的生物学活性。　方法　提取香菇C91-3菌丝体中的总RNA,用3′-Full RACE、5′-Full RACE方法获得香菇菌丝体Unigene 28447基因全长;构建基因表达载体,进行原核诱导表达,将表达蛋白进行纯化、复性。运用MTT法、流式细胞仪法研究蛋白对肿瘤细胞生长、周期及凋亡的影响。　结果　成功构建重组质粒pET32a（+）-Unigene,诱导重组蛋白表达,并进行纯化、复性。MTT法显示不同浓度蛋白对肿瘤细胞的生长抑制作用与对照组比较差异均有显著性意义（P<0.05）,流式细胞仪显示此蛋白具有诱导肿瘤细胞改变周期和凋亡的作用（P<0.05）。　结论　初步鉴定Unigene 28447基因的结构域具有抗肿瘤活性。     

香菇蛋白LFP91-3-A的分离纯化及其抗肿瘤机制

香菇是食用兼药用真菌，其子实体、菌丝体及发酵液具抗癌、保肝、降胆固醇、提高机体免疫力的作用。国内外学者对香菇的抗肿瘤活性进行了大量的研究，认为起主要作用的有效物质是多糖。我们对香菇中蛋白质的生物学活性进行了初步研究。     

香菇C91-3菌丝发酵液蛋白口服液抗肿瘤免疫机制的探讨

[目的]探讨香菇C91-3菌丝发酵液蛋白（LFP91-3）口服液的抑制肿瘤作用及机制。[方法]取60只昆明小鼠,随机分6组后进行S180荷瘤,并对荷瘤小鼠分别给予蒸馏水和不同剂量的LFP91-3口服,观察剂量对小鼠生存期的影响,确定LFP91-3的最适剂量。同时观察口服最适剂量后荷瘤小鼠淋巴细胞增殖反应,血清IL-2和TNF-α含量的变化,以蒸馏水口服组为对照。[结果]LFP91-3口服液能延长荷瘤小鼠的生存期,且存在一定的剂量依赖关系。LFP91-3最适剂量组小鼠淋巴细胞增殖率,血清IL-2和TNF-α水平分别为（44.11±14.4）%,(48.33±16.7) pg/mL和(84.27±16.88) pg/mL,明显高于对照的蒸馏水组（18.04±8.72）%,（30.5±3.58）pg/mL和（35.05±17.29）pg/mL,P<0.05。[结论]LFP91-3口服液具有体内抑瘤作用,其抑瘤作用可能与机体免疫能力提高有关。     

细胞因子在翼状胬肉疾病发生发展中的作用

目的通过检测碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和白细胞介素-6（IL-6）在翼状胬肉患者血清中的表达，探讨细胞因子在翼状胬肉发病机制中的作用。方法应用酶联免疫吸附试验检测翼状胬肉患者（观察组）和无翼状胬肉患者（对照组）血清中bFGF和IL巧的含量；取胬肉组织及正常球结膜组织做常规HE染色。结果观察组血清中有bFGF和IL-6的表达。且比对照组明显升高；bFGF和IL-6表达呈正相关；复发性翼状胬肉患者血清中bFGF和IL-6的表达比初发性翼状胬肉患者明显升高，而初发性翼状胬肉静止期组与进行期组比较差异无统计学意义；翼状胬肉组织病理切片中可见增生和变性两种表现。结论翼状胬肉的发生、发展及术后复发可能与bFGF和IL-6的异常分泌有关。     

长爪沙鼠的高脂血症与动脉粥样硬化相关性分析

目的探讨沙鼠高脂血症与动脉粥样硬化的相关性。方法用含l％胆固醇＋10％猪油＋10％蛋黄粉的高脂饲料饲养沙鼠120d，检测血清总胆固醇（Tc），高密度脂蛋白胆固醇（HDL-c），低密度脂蛋白胆固醇（LDL-c），血清甘油三酯（TG）的变化，在120d时处死动物，取各组织作形态学观察。结果高脂组沙鼠的TC、HDL-c、LDL-c的值一直都明显高于对照组，以LDL-c升高为主，且出现了严重的脂肪肝，肝硬化，脾脏肿大和主动脉根部粥样硬化。结论加重高脂血症的程度能导致长爪沙鼠形成动脉粥样硬化的病理改变，沙鼠可能是一种适合研究脂肪肝的实验动物。     

长爪沙鼠速发型高脂血症模型的初步建立

目的建立长爪沙鼠速发型高脂血症模型的方法。方法用含1%胆固醇高脂饲料分别饲养大鼠、小鼠和沙鼠,检测其血清TC、HDL-c、LDL-c、TG,比较三种动物对饲料反映的特点。结果沙鼠组的TC、HDL-c及LDL-c在第1周时明显的升高,并且平稳的保持此升高趋势到第四周。而TG数值相对平稳,没有变化。而大鼠和小鼠的TC、HDL-c、LDL-c、TG值没有变化。结论通过饲喂高脂饲料可快速诱发长爪沙鼠形成高脂血症模型。     

香菇菌C91-3凋亡相关蛋白24414对人肺癌细胞A549凋亡作用及其机制的研究

目的:研究香菇菌C91-3凋亡相关蛋白24414对人肺癌细胞A549的凋亡诱导作用,探讨其诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法:将用毕赤酵母GS115体系进行诱导表达并已鉴定的香菇菌C91-3凋亡相关蛋白24414作用于人肺癌细胞A549,用MTT法测定目的蛋白的抑瘤率,用流式细胞术检测目的蛋白对肿瘤细胞的诱导凋亡作用,用ELISA法测定目的蛋白对肿瘤细胞Caspase-3活性的影响,同时用MTT法检测目的蛋白对正常鸡胚成纤维细胞的毒性作用。结果:流式细胞术与MTT法检测结果显示,终浓度为7.5、15和30μg/mL的此蛋白对A549细胞凋亡作用与对照组比较差异有统计学意义。ELISA法检测结果显示以上浓度的此蛋白对A549细胞Caspase-3活性影响与对照组相比较差异也有显著性意义(7.5μg/mL组vs对照组:t=8.787,P=0.000;15μg/mL组vs对照组:t=13.429,P=0.000;30μg/mL组vs对照组:t=36.908,P=0.000)。同时此蛋白对正常鸡胚成纤维细胞无毒性作用。结论:香菇菌C91-3凋亡相关蛋白24414在对正常鸡胚成纤维细胞无毒性作用的同时对人肺癌细胞A549具有诱导凋亡作用,其凋亡途径可能通过Caspase-3通路。